湖北省自然科学基金(2007ABA290)
- 作品数：4 被引量：17H指数：2
- 相关作者：夏章晖杨晓徐翠玲周文祥聂祥智更多>>
- 相关机构：华中科技大学武汉市第一医院更多>>
- 发文基金：湖北省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 重组人促红细胞生成素对人肾小管上皮细胞缺血再灌注损伤的保护机制被引量：1
- 2010年
- 目的:探讨重组人促红细胞生成素(rHuEPO)在人肾小管上皮细胞(HK-2)缺血再灌注损伤保护机制。方法:体外培养HK-2细胞,随机分为5组:①正常对照组;②缺血再灌注损伤组;③预先给药组:缺血损伤30min前预先给予rHuEPO;④即时给药组:再灌注损伤5min前给予rHuEPO;⑤延迟给药组:再灌注损伤30min后给予rHuEPO。用AnnexinV/PI染色结合流式细胞仪技术检测细胞凋亡;用RT-PCR及Western印迹法分别检测蛋白激酶B(Akt)、糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)mRNA及蛋白活性水平。结果:缺血再灌注诱导细胞损伤后,细胞内Akt(Ser473)、GSK-3β(Ser9)水平下降,Caspase-3基因及蛋白水平均上调,与正常对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05),而Akt、GSK-3β基因水平不变(P>0.05);rHuEPO各干预组与缺血再灌注损伤组相比,细胞内Akt(Ser473)、GSK-3β(Ser9)表达水平上调,Caspase-3基因及蛋白水平均下调,预先给药组调节幅度最大,即时给药组次之,延迟给药组上调幅度最小,差异均有统计学意义(P<0.05);同时预先给药组(9.17%±0.35%)、即时给药组(12.47%±0.86%)和延迟给药组(15.63%±0.75%)细胞凋亡率明显低于缺血再灌注损伤模型组(17.97%±1.06%),差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:rHuEPO可能通过增强Akt活性,抑制其下游因子GSK-3β蛋白活性,从而抑制其下游凋亡蛋白酶Caspase-3活性的变化,减轻了抗霉素A诱导的人肾小管上皮细胞的缺血再灌注损伤。
- 周文祥杨永丽夏章晖杨晓聂祥智董骏武徐翠玲周国梅
- 关键词：重组人促红细胞生成素缺血再灌注损伤蛋白激酶B糖原合成酶激酶3Β肾小管上皮细胞细胞凋亡
- 重组人红细胞生成素对肾小管上皮细胞缺血再灌注损伤的保护作用
- 2010年
- 目的 探讨磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）-蛋白激酶B（Akt）-糖原合成酶激酶3β（GSK-3β）通路对人肾小管上皮细胞（HK-2）缺血再灌注（IR）损伤过程中细胞凋亡的调控以及重组人红细胞生成素（rHuEPO）对其保护作用.方法 正常培养的HK-2细胞,分为7组：正常对照组、IR组、LY294002干预组（P13K-Akt阻断剂,10 μmol/L）、LiCl干预组（GSK-3β阻断剂,20 μmol/L）、rHuEPO干预组（20 U/L）、rHuE-PO＋LY294002干预组、rHuEPO＋LiCl干预组.Western印迹法检测Akt（Ser473）、GSK-3β（Set9）及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（caspase-3）活性;MTT法检测细胞活力;Annexin V和PI染色结合流式细胞仪技术检测细胞凋亡.结果 IR损伤诱导HK-2细胞凋亡率上调（15.20%±1.43%）、Akt活性水平下降、GSK-3β及caspase-3酶活性水平上调,与正常对照组相比,差异有统计学意义（P＜0.05）;与IR组相比,LY294002干预使细胞凋亡率进一一步上调（18.20%±2.06%）、Akt活性水平下调、GSK-3β及caspase-3酶活性上调,LiCl干预使细胞凋亡率下调（12.30%±0.85%）、Akt活性水平上调、GSK-3β及caspase-3酶活性下调,差异均有统计学意义（P＜0.05）.rHuEPO干预组与IR组相比,细胞凋亡率下降（11.10%±1.62%）、Akt活性水平升高,GSK-3β及caspase-3酶活性下调,差异有统计学意义（P＜0.05）.与rHuEPO干预组相比,rHuEPO＋LY294002干预组细胞凋亡率升高（13.40%±1.94%）、Akt活性水平下降,GSK-3β及caspase-3酶活性上调,rHuEPO＋LiCl双干预细胞凋亡率下调（7.50%±1.31%）、Akt活性水平上升,GSK-3β及caspase-3酶活性下降,差异均有统计学意义（P＜0.05）.结论 IR损伤可引起肾小管上皮细胞凋亡,Akt活性降低,GSK-3B活性升高影响caspase-3依赖的外源性凋亡途径可能是其凋亡机制之一.rHuEPO可通过增强Akt活性,降低GSK-3β及caspase-3酶活性,减轻细胞凋亡,对HK-2IR损伤有一定的保护作用.
- 周文祥夏章晖杨永丽聂祥智董骏武徐翠玲杨晓
- 关键词：重组红细胞生成素1-磷脂酰肌醇3-激酶糖原合成酶激酶3肾小管
- 重组人红细胞生成素预处理对肾小管上皮细胞缺血再灌注损伤中PI3K-Akt-GSK-3β通路的调控作用被引量：2
- 2010年
- 目的 探讨磷脂酰肌醇-3激酶（P13K）-蛋白激酶B（Akt）-糖原合成酶激酶3β（GSK-3β）通路对人肾小管上皮细胞（HK-2）缺血再灌注（IR）损伤过程中细胞凋亡的调控及重组人红细胞生成素（rHuEPO）的保护作用.方法 正常培养的HK-2细胞,分为7组：正常对照组、IR组、LY294002干预组（P13K-Akt阻断剂,10 μmol/L）、LiCl干预组（GSK-3β阻断剂,20μmol/L）、rHuEPO干预组（20 U/L）、rHuEPO＋LY294002干预组、rHuEPO＋LiCl干预组.Westem印迹法榆测Akt（Ser473）、GSK-3β（Set9）及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（caspase-3）活性;MTT法检测细胞活力;Annexin V和PI染色结合流式细胞仪技术检测细胞凋亡.结果 IR损伤诱导HK-2细胞凋亡率上调（15.20%±1.43%）、Akt活性水平下降、GSK-3β及caspase-3酶活性水平上调,与正常对照组相比,差异有统计学意义（P〈0.05）.与IR组相比,LY294002干预使细胞凋亡率进一步上调（18.20%＋2.06%）、Akt活性水平下调、GSK-3β及caspase-3酶活性上调,LiCl干预使细胞凋亡率下调（12.30%±0.85%）、Akt活性水平上调、GSK-3β及caspase-3酶活性下调,差异均有统计学意义（P〈0.05）. rHuEPO干预与IR组相比,细胞凋亡率下降（11.10%±1.62%）、Akt活性水平升高而GSK-3β及caspase-3酶活性下调,差异有统计学意义（P〈0.05）.与rHuEPO干预相比,rHuEPO＋LY294002双干预细胞凋亡率升高（13.40%±1.94%）、Akt活性水平下降而 GSK-3β及caspase-3酶活性上调,rHuEPO＋LiCI双干预细胞凋亡率下调（7.50%±1.31%）、Akt活性水平上升而GSK-3β及caspase-3酶活性下降,差异均有统计学意义（P〈0.05）.结论 IR损伤可引起肾小管卜皮细胞凋亡,Akt活性降低及GSK-3β活性升高,影响caspase-3依赖的外源性凋亡途径可能是其凋亡机制之一.rHuEPO可通过增强Akt活性,降低GSK-3β及caspase-3酶活性,从而减轻细胞凋亡,对HK-2 IR损伤有一定的保护作用.
- 周文祥杨永丽夏章晖杨晓聂祥智董骏武徐翠玲
- 关键词：1-磷脂酰肌醇3-激酶糖原合成酶激酶3肾小管上皮细胞
- PI3K/Akt/GSK-3β信号通路在肾小管上皮细胞缺血再灌注损伤中的调控作用及重组人红细胞生成素预保护效应被引量：14
- 2010年
- 目的探讨PI3K/Akt/GSK-3β通路对人肾小管上皮细胞(HK-2)缺血再灌注损伤过程中细胞凋亡的调控及重组人红细胞生成素(rHuEPO)的预保护作用。方法正常培养的HK-2细胞,分为7组,正常对照组、缺血再灌注(I/R)组、LY294002干预组(PI3K/Akt阻断剂10μmol/L)、LiCl干预组(GSK-3β阻断剂20μmol/L)、rHuEPO干预组(20U/L)、rHuEPO+LY294002双干预组、rHuEPO+LiCl双干预组。Western blot法检测蛋白激酶B(Akt)、AktSer473、糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)、GSK-3βSer9及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)3活性;MTT法检测细胞活力;An-nexinⅤ/PI染色结合流式细胞仪技术检测细胞凋亡。结果缺血再灌注损伤诱导HK-2细胞凋亡率上调[(15.2±1.4)%]、Akt活性水平下降、GSK-3β及Caspase3酶活性水平上调,与正常对照组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。与I/R组相比,LY294002干预使细胞凋亡率进一步上调[(18.2±2.1)%]、Akt活性水平下调、GSK-3β及Caspase3酶活性上调;LiCl干预使细胞凋亡率下调[(12.3±0.8)%]、Akt活性水平上调、GSK-3β及Caspase3酶活性下调,差异均有统计学意义(均P<0.05)。rHuEPO干预与I/R组相比,细胞凋亡率下降[(11.1±1.6)%]、Akt活性水平升高而GSK-3β及Caspase3酶活性下调,差异均有统计学意义(均P<0.05)。与rHuEPO干预组比较,rHuEPO+LY294002双干预组细胞凋亡率升高[(13.4±1.9)%]、Akt活性水平下降而GSK-3β及Caspase3酶活性上调;rHuEPO+LiCl双干预组细胞凋亡率下调[(7.5±1.3)%]、Akt活性水平上升而GSK-3β及Caspase3酶活性下降,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论缺血再灌注损伤可引起肾小管上皮细胞凋亡,Akt活性降低及GSK-3β活性升高,影响Caspase3依赖的外源性凋亡途径可能是其凋亡机制之一。rHuEPO可通过增强Akt活性,降低GSK-3β及Caspase3酶活性,减少细胞凋亡,对HK-2缺血再灌注损伤有一定的保护作用。
- 周文祥杨永丽杨晓夏章晖韩敏聂祥智徐翠玲
- 关键词：糖原合成酶激酶3Β缺血再灌注损伤肾小管上皮细胞重组人促红细胞生成素
