国家自然科学基金(81270115)
- 作品数：14 被引量：64H指数：5
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- 鞭毛蛋白致肺微血管内皮细胞炎症诱发共培养肺泡上皮细胞炎症的级联放大效应与信号传导通路被引量：1
- 2013年
- 目的探讨鞭毛蛋白感染后炎症级联放大效应与信号传导通路。方法建立Transwell共培养体系，将人肺微血管内皮细胞株（ human pulmonary microvascular endothelial cells, HPMECs ）接种于Transwell小室的下层，培养2h后，将人Ⅱ型肺泡上皮细胞A549细胞株接种于小室的上层与HPMECs共培养15d。实验分为3组：HPMECs与A549细胞共培养空白对照组、鞭毛蛋白（2μg／mL）感染HPMECs再与A549细胞共培养组（实验组I）、HPMECs加DAPT（Notch信号阻断剂，终浓度10μmol／L）预处理再行鞭毛蛋白感染与A549细胞共培养组（实验组Ⅱ）。用ELISA法检测各组HPMECs和A549细胞培养上清液TNF-α蛋白表达，检测HPMECs上清液Notchl蛋白表达水平。结果与共培养空白对照组比较，鞭毛蛋白感染HPMECs后，共培养HPMECs和A549细胞上清液TNF-α蛋白[（11．45±1．59）pg／mLvs（6．13土0．86）pg／mL，（P〈0．01）、（9．93±1．46）pg／mLvs（5．895：0．83）pg／mL，（P〈0．01）]和HPMECs上清液中Notchl蛋白[（7．03±1．06）pg／mL坩（5．39±0．76）pg／mL，（P〈0．05）]表达水平皆明显升高，提示鞭毛蛋白引起HPMECs炎症，且向A549细胞传导级联放大，而HPMECs使用Notch信号阻断剂处理后，HPMECs上清液Notchl蛋白表达水平明显降低[（3．78±0．53）pg／mLvs（7．03±1．06）pg／mL，（P〈0．01）]，共培养A549细胞上清液TNF-α蛋白表达水平也显著下降[（7．47±1．05）pg／mL坩（9．93±1．46）pg／mL，（P〈0．05）]，表明HPMECs炎症反应经过Notch信号通路传导向A549细胞级联放大。结论鞭毛蛋白感染肺微血管内皮细胞能引起炎症反应，并可能经过Notch信号通路传导向肺泡上皮细胞级联放大。
- 周长喜夏世金胡明冬杨昱孙涛钱桂生
- 关键词：鞭毛蛋白微血管内皮细胞肺泡上皮细胞共培养
- Gax基因双向调节低氧性肺动脉内皮细胞增殖及影响HIF-1α基因表达的研究被引量：1
- 2013年
- 目的观察Gax基因对低氧性肺动脉内皮细胞(PAECs)增殖和低氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因表达的影响,为进一步研究Gax基因调节低氧性肺动脉高压(HPH)的作用与机制奠定基础。方法取大鼠肺动脉,用酶消化法获取PAECs并进行原代培养;PAECs分4组:未转染常氧对照组(常氧组)、未转染低氧处理组(低氧组)、Ad-βGal转染再行低氧处理组(Ad-βGal+低氧组)、Ad-Gax转染再行低氧处理组(Ad-Gax+低氧组)。分别在常氧(21%O2)和低氧(2.5%O2)1 h、3 h、6 h和12 h各时相点,采用3H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入法检测PAECs增殖;使用RT-PCR和Western blot方法分别检测PAECs中HIF-1αmRNA和蛋白表达水平。结果①PAECs的3H-TdR掺入量:与常氧组同时相点比较,低氧组和Ad-βGal+低氧组均显著升高(P均<0.01),在低氧6 h达最大值;Ad-Gax+低氧组与常氧组同时相点比较均显著升高(P均<0.01),但与低氧组比较却均明显降低(P<0.01、P<0.05),到低氧6 h降幅最大;②在低氧处理6 h,与常氧组比较,低氧组和Ad-βGal+低氧组HIF-1αmRNA和蛋白表达均明显上调;与低氧组或Ad-βGal+低氧组比较,Ad-Gax+低氧组HIF-1αmRNA和蛋白表达皆显著下调,差异有统计学意义(P<0.05、P<0.01)。低氧早期内皮细胞异常增殖加速,而此时增强Gax基因的表达可抑制细胞的异常增殖;随着低氧时间的不断延长,细胞增殖受到抑制,而此时增强内皮细胞中Gax基因表达却又促进细胞增殖,以此来维持细胞的数量。结论 Gax基因对维持内皮细胞数量的稳态具有双向调节作用。增强Gax基因的表达能下调低氧诱导的HIF-1αmRNA和蛋白表达,这可能与Gax基因抑制低氧性内皮细胞异常增殖的机制相关。
- 胡明冬夏世金吴俊珍孙涛吴金峰彭正羽钱桂生
- 关键词：GAX基因低氧内皮细胞增殖低氧诱导因子-1Α
- Gax基因对低氧性肺动脉内皮细胞增殖与ET-1、VEGF和eNOS蛋白表达的影响被引量：1
- 2013年
- 目的观察Gax基因对低氧性肺动脉内皮细胞(PAEC)增殖及内皮素(ET-1)、血管内皮生长因子(VEGF)和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)蛋白表达的影响。方法取大鼠肺动脉,用酶消化法获取PAEC并进行原代培养;分4组:未转染常氧对照组(常氧组)、未转染低氧处理组(低氧组)、Ad-βGal转染再行低氧处理对照组(Ad-βGal+低氧组)、Ad-Gax转染再行低氧处理组(Ad-Gax+低氧组)。分别在常氧(21%O2)和低氧(2.5%O2)6 h后,采用3H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入法和酶联免疫吸附测定(ELISA)检测PAECs增殖和培养上清液中ET-1、VEGF和eNOS蛋白水平。结果与常氧组比较,低氧组和Ad-βGal+低氧组PAEC的3H-TdR掺入量均显著升高(P<0.01);与低氧组比较,Ad-Gax+低氧组PAEC的3H-TdR掺入量均明显降低(P<0.01)。与常氧组比较,低氧组和Ad-βGal+低氧组PAEC上清中的VEGF和ET-1水平均显著升高(P<0.01),而eNOS含量明显降低(P<0.01);与低氧组比较,Ad-Gax+低氧组PAEC上清中VEGF和ET-1水平均明显降低(P<0.01),而eNOS水平显著升高(P<0.01)。结论低氧诱导PAEC异常增殖加速,而此时增强Gax基因表达可抑制细胞异常增殖;低氧上调PAEC中VEGF和ET-1含量,下调eNOS含量,而增强Gax表达可以逆转这种现象。
- 夏世金吴俊珍万文斌孙涛彭正羽吴金峰胡明冬钱桂生
- 关键词：GAX基因低氧内皮细胞增殖内皮型一氧化氮合酶
- 骨髓间充质干细胞治疗肺部疾病的展望被引量：3
- 2013年
- 骨髓间充质干细胞（bonemarrowmesenchymalstemcells，BMSCs）具有多分化潜能，可以分化为骨骼肌细胞、脂肪组织、血管、泌尿系统组织、结蹄组织等。BMSCs可自我更新，而且具有基因和表型稳定性，很容易从少量骨髓中提取，并可以高效增殖，可从实验室培养BMSCs而直接应用于临床，可采用不同的方式移植到人体，而且分化较易控制，致瘤风险小。BMSCs可逃避同种异体识别，并可抑制同种异体T细胞增殖，在免疫功能正常的受体中不会产生免疫应答。
- 孙涛夏世金张伟
- 关键词：骨髓间充质干细胞疾病
- 门诊呼吸科患者抗生素使用情况调查被引量：2
- 2013年
- 目的了解并分析本院门诊呼吸科患者抗生素使用情况,为促进门诊抗生素的合理用药提供依据。方法收集医院门诊呼吸科2012年1～12月处方2 143份,从用药频率、给药途径、联合用药等方面,分析患者使用抗生素的情况,根据《抗菌药物临床指导原则》对抗生素合理使用进行评定。结果使用抗生素处方1 890份,占88.19%,用药频率居前3位的分别是阿莫西林胶囊、左氧氟沙星片、头孢曲松钠注射液。其中单药使用占45.32%,二药联用占36.44%,三药联用占6.43%。给药途径中,口服占76.21%,肌肉注射占1.72%,静脉滴注占22.34%。用药物利用指数(DUI)合理,合理处方占73.7%,不合理处方占26.3%。不合理主要表现为:抗生素非必要使用以及用药途径不合理。结论门诊呼吸科抗生素使用率较高,且存在一定的不合理现象,应加强抗生素的管理和应用。
- 刘贤买汪峰韦吕伟夏世金
- 关键词：抗菌素门诊呼吸科合理用药
- 不同血糖水平对2型糖尿病患者肺功能改变的影响被引量：7
- 2013年
- 目的检测不同血糖水平及糖化血红蛋白水平对2型糖尿病(T2DM)患者肺功能的影响。方法 130例T2DM患者分别根据空腹血糖水平及糖化血红蛋白水平高低各分为3组,分别检测各组肺通气、弥散功能。对照组为本院体检健康人群40例。结果与对照组比较,轻度和中度T2DM组的肺通气功能(VC、FEV1、MVV、TLC)及弥散功能均无明显改变(P>0.05)。重度T2DM组在肺通气功能(VC、FEV1、MVV、TLC)及弥散功能(DLco)方面均较对照组有显著性降低(P<0.01)。低HbAlc组的肺通气功能(VC、FEV1、MVV、TLC)及弥散功能无明显改变(P>0.05);中、高HbAlc组在肺通气功能(VC、FEV1、MVV、TLC)及弥散功能(DLco)均较对照组有显著性降低。结论 T2DM患者中,过高血糖水平及糖化血红蛋白高于正常均能加重肺功能损害,及时合理控制血糖可能是降低肺功能损害的重要措施。
- 胡艳汪峰夏世金蒋永平
- 关键词：2型糖尿病肺功能糖化血红蛋白
- Gax基因对低氧性肺动脉内皮细胞增殖、凋亡和周期的影响
- 2013年
- 目的观察Gax基因对低氧性肺动脉内皮细胞(PAECs)增殖、凋亡和周期的影响。方法 PAECs分为4组:未转染常氧对照组(常氧组)、未转染低氧处理组(低氧组)、Ad-βGal转染后低氧处理组(Ad-βGal+低氧组)、Ad-Gax转染后低氧处理组(Ad-Gax+低氧组)。在常氧和低氧处理1、3、6 h和12 h后,3H-TdR掺入法测PAECs增殖、流式细胞术测细胞周期和凋亡率。结果与常氧组比较,低氧组和Ad-βGal+低氧组PAECs3H-TdR掺入量均显著升高(P均<0.01),低氧6 h最大;Ad-Gax+低氧组与常氧组比较均显著升高(P均<0.01),与低氧组比较均明显降低(P<0.01或P<0.05),低氧6 h降幅最大。与常氧组比较,Ad-βGal+低氧组和低氧组PAECs凋亡率均显著降低(P均<0.05),低氧6 h最低。Ad-Gax+低氧组与常氧组比较均显著上升(P<0.01或P<0.05),与低氧组比较均明显增加(P<0.01或P<0.05),低氧6 h增幅最大。与常氧组比较,低氧组和Ad-βGal+低氧组G0/G1期比例明显降低(P<0.05或P<0.01),低氧6 h最低;S期和G2/M期比例显著增加(P<0.05或P<0.01),低氧6 h S期比例最大。与常氧组和低氧组比较,Ad-Gax+低氧组G0/G1期比例均显著上升(P<0.05或P<0.01),低氧6 h增幅最大;S期和G2/M期比例显著降低(P<0.01或P<0.05),低氧6 h降幅最高。结论 Gax基因干预低氧性PAECs增殖、凋亡和周期,双向调节并维持细胞数量稳态。
- 夏世金吴俊珍孙涛胡明冬钱桂生
- 关键词：GAX基因低氧肺动脉高压内皮细胞
- 慢病毒介导环状RNA mmu-circ-0001033过表达抑制低氧性小鼠肺动脉平滑肌细胞增殖的实验研究被引量：7
- 2018年
- 目的探讨慢病毒介导环状RNA mmu-circ-0001033过表达对低氧性小鼠肺动脉平滑肌细胞增殖的影响,为环状RNA防治低氧性肺动脉高压(HPH)提供实验依据。方法体外原代培养小鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMC),并随机分为4组:常氧组、低氧组、mmu-circ-0001033过表达慢病毒转染+低氧组、空白载体慢病毒转染+低氧组。体外构建环状RNA mmu-circ-0001033过表达慢病毒载体,转染PASMC。运用qRT-PCR技术检测各组PASMC中mmu-circ-0001033的表达水平,采用CCK-8法检测各组PASMC增殖,对各组的指标值进行统计学比较和分析。结果低氧处理导致PASMC中mmu-circ-0001033的表达明显下调,且呈时间依赖性;与对照组比较,慢病毒转染组中mmu-circ-0001033表达显著上调(P<0.05),提示mmu-circ-0001033过表达慢病毒成功转染入PASMC,且并高效表达;与常氧组比较,低氧组和空白载体慢病毒转染+低氧组PASMC增殖明显增多(P<0.05),而mmu-circ-0001033过表达抑制了低氧对PASMC的促增殖作用。结论过表达的mmu-circ-0001033显著抑制低氧所诱导的PASMC的增殖,为明确mmu-circ-0001033作为HPH防治靶标奠定了实验基础。
- 王坚胡明冬唐晓丹葛海燕彭正羽宋元林夏世金
- 关键词：肺动脉平滑肌细胞
- 老年宫颈癌E2-EPF表达与肿瘤深肌层浸润及盆腔淋巴结转移关系的研究被引量：5
- 2012年
- 目的了解老年宫颈癌E2-EPF表达水平与肿瘤深肌层浸润及盆腔淋巴结转移发生的关系,为老年宫颈癌转移的早期防治提供依据。方法选择2010年1月至2012年1月住院老年宫颈癌患者36例,手术切除获取癌组织标本,用实时荧光定量PCR检测癌组织中E2-EPF mRNA的表达水平,探讨E2-EPF表达水平与肿瘤深肌层浸润及盆腔淋巴结转移发生的关系。结果 36例病例中发现肿瘤深肌层浸润19例,占52.8%,盆腔淋巴结转移10例,占27.8%。深肌层浸润组E2-EPF mRNA平均表达水平为无深肌层浸润组的2.14倍,盆腔淋巴结转移组E2-EPF mRNA平均表达水平为无盆腔淋巴结转移组的1.72倍,均具有统计学差异(P<0.05)。结论 E2-EPF在发生转移的老年宫颈癌组织中高表达,E2-EPF信号通路可望成为宫颈癌防治的新靶点。
- 胡鸿飞汪峰夏世金骞军平郑绮明胡艳
- 关键词：老年宫颈癌淋巴结转移
- 淫羊藿苷提高SIRT6酶活性及抑制小鼠NF-κB炎症信号通路的实验研究被引量：15
- 2012年
- 目的观察淫羊藿苷（Icrrin，ICA）对组蛋白去乙酰化酶SIRT6的激活作用及对老年小鼠体内NF-kB（p65）、SIRT6蛋白表达及NF—kB信号通路下游炎症细胞因子表达的影响。方法以体外酶学实验观察ICA对SIRT6的激活作用并绘制不同剂量浓度激活效率曲线。选取24月龄老年组（N=11）、24月龄＋ICA干预组（N=12）和3月龄青年组小鼠（N=10）的心、肝、肌肉组织，用Westernblot检测NF-kB（p65）和SIRT6蛋白表达水平；采用ELISA法柃测小鼠血清中肿瘤坏死网子α（TNF—α）、细胞间粘附分子-1（ICAM-1）、白细胞介素-2（IL-2）和白细胞介素-6（IL-6）的含量。结果体外酶学实验显尔ICA随着药物浓度的下降，对SIRT6逐渐呈现激活效应，在10。mol／L浓度时达到最大激活效应为142％。小鼠实验显示ICA干预后，心脏、肝脏与肌肉组织中NF—kB（p65）蛋白表达与老年小鼠比较呈现下调趋势，而SIRT6蛋白表达较老年小鼠则呈现上调趋势；与青年小鼠比较，老年小鼠血清中炎症细胞TNF-α、ICAM-1、IL-2、IL-6的含量均明显上调（P〈0．05、P〈0．01）；与老年小鼠比较，ICA干预后小鼠血清中炎症因子TNF-α、ICAM-1、IL-2、IL-6的含量均明显下降（P〈0．05、P〈0．01）。结论ICA对SIRT6的酶活性具有显著的激活效应，且在极低的药物浓度下仍对SIRT6有激活作用；ICA能上调老年小鼠组织中SIRT6蛋白表达，抑制NF—kB（p65）蛋白表达及下调下游炎症细胞因子的产生，提示ICA延缓炎性衰老的作用机制及干预新靶点与NF—kB信号通路和组蛋白去乙酰化酶SIRT6密切相关。
- 陈洋平键张晶黄建华夏世金沈自尹
- 关键词：淫羊藿苷炎性衰老小鼠NF-KB信号通路炎症细胞因子
