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国家高技术研究发展计划(2006AA10Z440): 作品数：15 被引量：145H指数：7; 相关作者：黄昆仑许文涛罗云波元延芳郭星更多>>; 相关机构：中国农业大学中华人民共和国农业部河北农业大学更多>>; 发文基金：国家高技术研究发展计划引进国际先进农业科技计划国家自然科学基金更多>>; 相关领域：生物学轻工技术与工程医药卫生农业科学更多>>

潮霉素磷酸转移酶的致敏性评价研究被引量：7: 2009年; 潮霉素磷酸转移酶基因广泛用于转基因生物的基因转化过程中,该基因(hpt)编码的蛋白属于无食用和食物过敏史的处源目的蛋白。根据IFBC-ILSI制定的转基因食品致过敏性评价方法,进行了与已知的过敏蛋白的氨基酸序列相似性比较、消化稳定性实验以及动物模型实验。结果表明,未发现连续8个氨基酸序列相同:该蛋白在80℃加热10min左右时已全部降解,不具有热稳定性:体外模拟消化实验表明,消化20min时,SDS-PAGE和Western Blotting已检测不出Hpt蛋白。实验采用BN大鼠作为过敏模型,ELISA检测特异IgG、IgE以及组胺水平,Hpt蛋白与阳性存在显著性差异(p<0.05),与阴性无显著性差异。综合结果表明,Hpt蛋白潜在致敏性很低。本研究可为进一步开展以hpt基因为标记性基因的作物上市前安全性的评价提供基础数据。; 许文涛芦云罗云波元延芳黄昆仑; 关键词：安全评价体外消化动物模型过敏

葡萄柚种子提取物对酿酒酵母抑制机理的研究被引量：2: 2010年; 通过揭示葡萄柚种子提取物(GSE)诱导酿酒酵母凋亡的现象,探讨其对酵母抑制的机理。结果表明:GSE有效抑制酿酒酵母的最低质量浓度为0.13mg/mL。DAPI和TUNEL核酸荧光染色表明GSE能使酿酒酵母细胞核浓缩并导致核裂及DNA断链。ROS检测表明GSE能引起酿酒酵母细胞内活性氧大幅增加。; 张南曹思硕黄昆仑罗云波郭星元延芳许文涛; 关键词：酿酒酵母

重组弹性蛋白酶在猪肉嫩化中的应用被引量：8: 2010年; 以木瓜蛋白酶作为对照,研究本实验室构建的重组毕赤酵母表达产物即弹性蛋白酶在肉类嫩化方面的应用,测定酶的活力,并对酶的最佳作用条件进行研究,进一步对其在肉类嫩化应用中加酶量、加入方式,肉的处理温度和时间进行优化。实验利用质构仪和嫩度计测定肉的剪切力的变化,按照剪切力与嫩化程度成反相关的规律并结合显微镜观察结果综合判断肉的嫩化程度。结果显示:利用注射法把酶液均匀注射入经过75～80℃水浴加热20～30min处理的肉样中,加入酶量约20～37mg/mL,处理时间为2.5～6h时,该重组弹性蛋白酶对肉的嫩化效果较好。; 陈卓君王雷许文涛谷欣晰李筱婷梅晓宏黄昆仑; 关键词：肉类嫩化显微镜剪切力

稻米中PCR抑制因子抑制机理的研究被引量：2: 2009年; 针对在检测过程中发现的大米中存在PCR抑制现象,对PCR抑制因子作用机理进行研究。通过把糙米加工成精米和米麸后的实验证明,PCR抑制因子主要存在于糙米的米麸中。研究间接证明PCR抑制因子主要通过抑制Taq聚合酶的酶活来抑制PCR反应。尝试采用多种方法来对大米中的PCR抑制因子进行鉴定,通过非变性电泳(PAGE)和电泳迁移率实验(EMSA)实验排除了大米中的PCR抑制因子是大分子物质。; 许文涛黄昆仑邓爱科罗云波; 关键词：稻米基因组 PCR

荞麦水溶性多糖的分离纯化及其分子量的测定被引量：9: 2009年; 通过热水浸提法从荞麦中提取水溶性多糖,并用离子交换柱和凝胶过滤柱对荞麦多糖进行分离纯化、测定其分子量。结果表明,荞麦多糖粗品用Savag法脱蛋白后,采用DEAE-Sepharose Fast Flow和Sephacryl S-400HR柱层析纯化,得到荞麦多糖(FEP),经过凝胶柱色谱分析表明,FEP为均一多糖。用苯酚硫酸法测定多糖的含量,用AKTA快速液相蛋白层析仪的紫外检测器在280nm波长处检测蛋白质含量。最后根据用不同分子量标准葡聚糖做出的标准曲线,测定出FEP分子量(Mw)为1720442D。; 许文涛张方方罗云波王颖黄昆仑; 关键词：荞麦多糖分离纯化分子量测定

Cr(III)在钝顶螺旋藻中的生物富集及其对钝顶螺旋藻生长的影响被引量：5: 2009年; 本实验研究了钝顶螺旋藻对Cr(III)的吸收和生物转化以及Cr(III)对钝顶螺旋藻的生长影响,用ICP-MS-HPLC对无机Cr(III)经钝顶螺旋藻吸收后的存在价态进行了分析。结果表明,钝顶螺旋藻对Cr(III)具有良好的富集和生物转化能力,在本实验中总铬富集量可达到173.17mg/g,有机化程度可高达96.99%。ICP-MS-HPLC分析结果表明没有有毒的Cr(VI)的产生。此外,干重测定结果显示低浓度的Cr(III)(<234.38×10-6g/g)促进钝顶螺旋藻的生长,高浓度的Gr(Ⅲ)(>234.38×10-6g/g)则抑制共生长,并导致钝顶螺旋藻形态异常。在一定范围内钝顶螺旋藻能高效富集Cr(III),可作为安全营养的保健食品;钝顶螺旋藻抗高Cr(III)压,吸附高浓度Cr(III)的能力使其可用于环境中Cr(III)污染的去除。; 许文涛王颖罗云波李元飒张方方黄昆仑; 关键词：钝顶螺旋藻 CR(III)生物富集生物转化

Nisin-rbLF-N融合基因的构建及其在大肠杆菌中的表达被引量：1: 2010年; 针对乳链菌肽(nisin)抑菌谱窄的缺点,选择对抗菌谱较广且具有较强抗性的牛乳铁蛋白氨基末端多肽(rbLF-N)为材料,构建融合基因Nisin-rbLF-N。将融合基因克隆到原核表达载体pGEX-4T1中,转化E.coli BL21(DE3)进行诱导表达,将诱导表达的产物进行Tricine-SDS-PAGE蛋白电泳及抑菌活性检测。结果表明,克隆菌经诱导后可表达出可观的融合蛋白,融合蛋白以包涵体形式存在,包涵体经洗涤、尿素溶解、复性后具有抗菌生物活性。; 袁晓宇许文涛黄昆仑罗云波谷新晰田洪涛; 关键词：融合基因抑菌活性

通用引物多重PCR技术检测3种病原微生物被引量：12: 2011年; 为寻找快速且准确的病原微生物检测方法,在普通多重PCR（polymerase chain reaction）技术的基础上研究一种新的通用引物多重PCR（universal primers-multiplex PCR,UP-M-PCR）技术。利用该技术对食品中主要的3种致病菌——大肠杆菌、单增李斯特菌和沙门氏菌进行同时检测,经过单重PCR验证、二重以及三重UP-PCR反应条件和体系优化。结果表明,该方法的最低检测限为0.5pg目标DNA,复合引物和通用引物的加入量分别为2nmol/L和300nmol/L。此方法检测灵敏度高、病原菌检测限低,可在实践中应用。; 商颖许文涛元延芳梁志宏石慧翟志芳张雅楠罗云波黄昆仑; 关键词：大肠杆菌单增李斯特菌沙门氏菌通用引物多重PCR

微生物菌群多样性分析方法的研究进展被引量：51: 2009年; 随着现代科学技术的进步,对微生物多样性的研究已经提升到了一个新的高度,特别是由于分子生物学在该分支学科中的应用,使得在微生物菌群多样性的研究中克服了传统培养的缺点,使分析方法取得了长足的进步。本文主要介绍了微生物多样性研究的多种方法,将其简要划分为三大部分:(1)传统纯培养技术;(2)现代分子生物学技术;(3)上述两种方法的联合使用,并重点阐述了这些方法的优缺点,展望了微生物多样性研究方法的发展前景。; 许文涛郭星罗云波黄昆仑; 关键词：微生物菌群多样性分子生物学方法

转基因玉米59122品系的特异性检测被引量：8: 2011年; 使用反向聚合酶链式反应(PCR)技术克隆了转基因玉米59122的外源基因与玉米基因组之间的两段侧翼序列,并据其左侧侧翼序列设计了具品系特异性的引物,运用半巢式PCR技术建立了59122的品系特异性二重PCR检测方法,扩增片段100bp,横跨pat终止子与转基因玉米侧翼基因之间。以转基因玉米59122、MON863、MON810、GA21、NK603,转基因大豆Roundup Ready和转基因油菜GT73等为材料,证明本方法与其他转基因作物具有高特异性。本方法在检测59122时,确定出连接体系中线性DNA的最佳质量浓度为1ng/μL左右,检出限达到0.1%,灵敏度为38个单倍体基因组拷贝数。因此可准确、快速、高效地检测转基因玉米及其产品,或作为常规PCR定性检测后的验证方法。; 许文涛杨蓉陆姣张南罗云波何景黄昆仑; 关键词：转基因作物

国家高技术研究发展计划(2006AA10Z440)

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