国家自然科学基金(81270110)
- 作品数：7 被引量：46H指数：4
- 相关作者：王良兴黄晓颖邹丽珍张协颜双泉更多>>
- 相关机构：温州医科大学温州医学院附属第一医院扬州市江都人民医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 小鼠肺细小动脉平滑肌细胞原代培养和鉴定以及低氧对其增殖与凋亡的影响被引量：5
- 2014年
- 目的：建立一种方法简单、重复性好、培养周期短的小鼠肺细小动脉平滑肌细胞（PASMCs）原代培养及传代方法,并初步探索低氧下小鼠PASMCs的增殖与凋亡情况。方法：无菌条件显微镜下分离小鼠肺细小动脉,经胶原酶I消化结合血清铺底法培养PASMCs。传代过程中弃除对细胞损伤大的离心步骤。倒置相差显微镜观察细胞形态,免疫细胞化学法和免疫荧光染色法进行α-平滑肌肌动蛋白鉴定,CCK-8显法及TUNEL法测定低氧下PASMCs的增殖与凋亡情况。结果：形态学观察、免疫细胞化学法和免疫荧光染色法鉴定均表明培养的细胞为PASMCs。与大鼠传代后的PASMCs典型的＂峰-谷＂样生长相比,传代后的小鼠PASMCs形态各异,没有此典型＂峰-谷＂规律。原代培养后5～7 d即传代,依据细胞活性可传3～5代。CCK-8法显示,与常氧组24 h比较,低氧组A值升高（P〈0.05）。TUNEL法结果显示低氧24 h后凋亡率较常氧组下降（P〈0.05）。结论：胶原酶I消化结合血清铺底法培养小鼠PASMCs,方法简单,培养周期短,重复性好,是一种值得推广的小鼠PASMCs体外培养方法。低氧可以促进小鼠PASMCs的增殖,抑制小鼠PASMCs的凋亡。
- 虞晓明郭瑞唐江锋黄晓颖王良兴
- 关键词：小鼠低氧细胞增殖
- 腺苷A_(2a)受体在红景天苷调节大鼠低氧性肺动脉高压中的作用被引量：14
- 2012年
- 目的:探讨腺苷A2a受体(A2aAR)对低氧性肺动脉高压大鼠的保护作用及红景天苷对大鼠低氧性肺动脉高压的调控作用及其机制。方法:将SD大鼠60只随机分为6组:正常组、低氧组、低氧+红景天苷低剂量组、低氧+红景天苷中剂量组、低氧+红景天苷高剂量组、低氧+A2aAR激动剂(CGS-21680)组。测定各组大鼠平均肺动脉压(mPAP)、平均颈动脉压(mCAP)和右心室(RV)/(左心室+室间隔)(LV+S),观察各组肺细小动脉显微结构变化;用免疫组化法和原位杂交法测定肺细小动脉管壁A2aAR含量的变化;用实时荧光定量PCR法和Western blotting法测定肺组织匀浆A2aAR mRNA和蛋白含量的变化。结果:(1)低氧组大鼠mPAP明显高于正常对照组,A2aAR激动剂组和红景天苷高剂量组可以明显降低mPAP,红景天苷中、低剂量组mPAP虽有下降趋势,但差异无统计学意义。(2)低氧组大鼠RV/(LV+S)显著高于正常组,A2aAR激动剂组和红景天苷中、高剂量组RV/(LV+S)显著低于低氧组,红景天苷低剂量组较低氧组有减低趋势,但差异无统计学意义。(3)低氧组大鼠肺细小动脉重构显著,A2aAR激动剂组及红景天苷低、中、高剂量组肺血管重构较低氧组明显减轻。(4)低氧组肺血管和肺组织A2aAR mRNA和蛋白表达均明显高于正常组,A2aAR激动剂组和红景天苷高剂量组肺血管和肺组织A2aARmRNA和蛋白水平均较低氧组进一步升高。结论:A2aAR对低氧性肺动脉高压大鼠具有保护作用;红景天苷能够上调低氧性肺动脉高压大鼠肺血管和肺组织A2aAR的表达,该通路可能是其减轻低氧性肺动脉高压和肺血管重建的重要机制。
- 黄晓颖樊荣蔡学定张协卢园园王良兴
- 关键词：肺动脉高压低氧红景天苷腺苷A2A受体
- 腺苷A_(2a)受体在博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化中的作用被引量：2
- 2018年
- 目的:观察腺苷A_(2a)受体(A_(2a)R)在小鼠肺纤维化形成中的调控作用。方法:30只雄性SPF级野生型BALB/C小鼠和20只A_(2a)R基因敲除BALB/C小鼠,随机分为以下5组:野生型小鼠对照组(A组)、野生型小鼠纤维化组(B组)、A_(2a)R基因敲除小鼠对照组(C组)、A_(2a)R基因敲除小鼠纤维化组(D组)、野生型小鼠纤维化+A_(2a)R激动剂(CGS21680)组(E组),每组各10只。纤维化组小鼠气管内注入博莱霉素(bleomycin,BLM)溶液50μl(5mg/kg体重),对照组在气管内注入等体积生理盐水,注射后立即将小鼠直立旋转3~5 min,使其均匀分布于两肺。A、B、C、D各组每天腹腔注射生理盐水0.5 ml,E组每天腹腔注射A_(2a)R激动剂(CGS21680)0.5 ml(0.25 mg/kg体重),连续28 d。第29天取血检测血清转化生长因子β1(TGF-β1)含量;检测肺组织中羟脯氨酸(hydroxyproline,Hyp)、TGF-β1和A_(2a)R蛋白质含量,TGF-β1 mRNA、A_(2a)R mRNA的表达,并观察肺组织光镜和超微结构。结果:(1)光镜和超微结构提示,B组肺泡壁增厚破坏,肺泡腔狭窄或部分陷闭,纤维增生,炎细胞浸润,I型、II型肺泡上皮细胞明显空泡化,D组较B组明显,E组表现较B组减轻。Masson染色提示B组、D组小鼠肺组织纤维增生明显,E组明显减少,提示基因缺失加重了小鼠肺纤维化的形成。(2)与A组比较,B组血清TGF-β1含量,肺组织Hyp含量,TGF-β1、A_(2a)R蛋白质含量和TGF-β1 mRNA、A_(2a)R mRNA的表达均明显增高(P<0.01,P<0.05)。与C组比较,D组血清TGF-β1含量、肺组织Hyp、TGF-β1含量和TGF-β1 mRNA表达明显增高(P<0.01,P<0.05),提示肺纤维化小鼠肺组织Hyp含量增高,TGF-β1表达上调。(3)与B组相比,D组血清TGF-β1、肺组织Hyp、TGF-β1含量和TGF-β1 mRNA表达明显增高(P<0.01)。与B组比较,E组A_(2a)R蛋白质含量和A_(2a)R mRNA的表达均增高(P<0.01),而血清TGF-β1、肺组织Hyp和TGF-β1蛋白含量及TGF-β1 mRNA表达较B组明显下降(P<0.01,P<0.05),提示A_(2a)R基因敲除小鼠肺
- 陈彦凡何以成黄卡特虞晓明陈马云陈相黄晓颖王良兴
- 关键词：肺纤维化博莱霉素TGF-Β1
- 积雪草苷通过抑制炎症和纤维化减弱平阳霉素诱导的肺间充质纤维化（英文）被引量：10
- 2016年
- 目的研究积雪草苷对平阳霉素诱导的大鼠肺间充质纤维化的治疗效果及其潜在机制。方法雄性SD大鼠分为正常对照组、模型组和治疗组;模型组和治疗组均给予平阳霉素诱导肺间充质纤维化;治疗组给予积雪草苷灌胃处理。HE染色和Masson染色用于分析肺组织的病理变化;化学方法检测肺组织匀浆中羟脯氨酸含量;酶联免疫吸附法检测大鼠血清中γ干扰素(IFN-γ),白细胞素介素4(IL-4)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量;免疫组化检测转化生长因子β_1(TGF-β_1)和腺苷A2受体(A2AR)在肺组织中的表达;Western蛋白印迹法检测TGF-β_1和A2AR蛋白表达。结果在实验的第7天、第14天和第28天,模型组的肺组织炎症评分显著高于对照组(P<0.01),而积雪草苷组的肺组织炎症较模型组减轻(P<0.01,P<0.05);与正常对照组相比,模型组的肺纤维化评分显著高于对照组(P<0.01),而积雪草苷组的肺纤维化程度较模型组得到改善(P<0.05);在实验的第14天和第28天,模型组大鼠肺组织的羟脯氨酸含量[1.85±0.10,(2.48±0.18)mg·g^(-1)]较正常对照组[0.79±0.07,(0.84±0.08)mg·g^(-1)]升高(P<0.01),但在积雪草苷组羟脯氨酸含量[1.32±0.131,(1.71±0.13)mg·g^(-1)]较模型组降低(P<0.05);积雪草苷组IL-4,TNF-α的含量低于模型组(P<0.05),而模型组IL-4和TNF-α的含量高于正常对照组(P<0.01,P<0.05);积雪草苷组TGF-β_1蛋白表达较模型组降低(P<0.05),A2AR蛋白表达较模型组升高,而模型组TGF-β_1的蛋白表达较正常对照组升高(P<0.05),A2AR蛋白表达较正常对照组降低(P<0.05)。结论积雪草苷通过降低IL-4,TNF-α和TGF-β_1的表达,提高A2AR的表达水平来抑制肺组织炎症和基质累积,改善平阳霉素诱导的间充质性肺纤维化。
- 叶文静朱小春王晓冰王良兴谢戌颖
- 关键词：干扰素Γ白细胞介素4
- 小鼠经颈外静脉右心导管法测定心室压力的实验方法研究被引量：3
- 2014年
- 目的:研究可行性高的测定小鼠右心室压力的实验方法。方法:通过自制PE导管,连接powerlab多通道生物信号记录系统,经颈外静脉插管,右心导管法测定小鼠右心室压力,并借以研究肺动脉压力变化。结果:用此方法对51只小鼠进行插管,46例成功进入心室并测压,成功率90.2%。其中33只正常小鼠中,成功30例,测得压力值:收缩压(23.4±5.7)mmHg,舒张压(3.7±2.6)mmHg,平均压(12.0±3.7)mmHg;18只肺动脉高压模型小鼠中,成功16例,测得压力值:收缩压:(32.2±2.8)mmHg,舒张压(3.8±2.0)mmHg,平均压(14.9±2.3)mmHg。共失败5例,经解剖发现2例进入下腔静脉,2例穿破心耳,1例穿破腋静脉进入胸壁。结论:使用自制的PE导管经颈外静脉插管,右心导管法测定右心室压具有成功率高、数据更准确、操作省时、方法易普及的优点。是一种较好的对小鼠进行右心室压力测定的方法。
- 刘盼盼颜双泉陈马云邹丽珍黄晓颖王良兴
- 关键词：右心导管小鼠
- 腺苷A_(2A)受体激活抑制低氧性肺动脉平滑肌细胞增殖的机制
- 2013年
- 目的研究腺苷A2A受体(adenosine A2Areceptor,A2AR)激活对低氧肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smoothmuscle cells,PASMCs)增殖的影响及其作用机制。方法体外培养SD大鼠PASMCs,经免疫组化鉴定,离体培养分7组:①正常对照组(control group);②低氧组(chronic hypoxia,CH);③CH+线粒体敏感性钾通道(MitoKATP)开放剂diazoxide组;④CH+MitoKATP阻断剂5-HD组;⑤CH+A2AAR特异性激动剂CGS21680组;⑥CH+CGS21680+diazoxide组;⑦CH+CGS21680+5-HD组。CCK-8染色法检测CGS21680对离体大鼠PASMCs增殖的影响,实时荧光定量法检测CGS-21680对大鼠PASMCs腺苷A2A受体基因表达的影响。结果低氧使CCk-8吸光度(absorbance,A)值升高(P<0.01),CGS-21680干预使低氧下A值明显下降,且CGS-21680和5-HD协同作用下效果更明显。Real-time RT PCR显示低氧和CGS-21680干预组A2AAR表达显著升高(P<0.01),且以CGS-21680联合5-HD组升高最明显。结论 A2AAR激活剂CGS-21680抑制低氧PASMCs增殖,可能与阻断MitoKATP通道开放有关。
- 张协屠金晶郭瑞颜双泉黄晓颖王良兴
- 关键词：腺苷受体激动剂平滑肌细胞腺苷A2A受体
- 改良右心导管法测量大鼠肺动脉压力的实验方法研究被引量：12
- 2014年
- 目的:研究快速、经济、准确、易普及的测定肺动脉压力的实验方法。方法:通过自制聚乙烯(polyethylene,PE)导管,连接PowerLab多通道生物信号记录系统,肝素化后经颈外静脉插管,经上腔静脉、右心室进入肺动脉,记录实时波形及压力。通过解剖明确出现不同波形时的导管位置及朝向,从而指导导管推送过程。结果:通过自制PE导管。采用改良右心导管法对120只Sprague-Dawley(SD)大鼠进行肺动脉插管。采用该法从插管开始至到达肺动脉平均耗时2 min,成功率95%。结论:使用自制的PE导管经改良右心导管法测定肺动脉压力具有成功率高、数据准确、操作省时、方法易掌握的优点,是一种较好的测定大鼠肺动脉压力的实验方法。
- 邹丽珍陈马云黄晓颖王良兴
- 关键词：肺动脉压
