国家质检总局科技计划项目(2006IK009)
- 作品数：2 被引量：11H指数：2
- 相关作者：石建平孟日增李伟李伟卢强更多>>
- 相关机构：吉林出入境检验检疫局吉林大学黑龙江生物科技职业学院更多>>
- 发文基金：国家质检总局科技计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 截短表达牛传染性鼻气管炎病毒gB基因及抗原性分析
- 本研究用DNA Star分析IBR gB基因编码的吸附蛋白抗原性、亲水性和表面展示概率,将gB基因截短成4个片段,用Oligo 6设计四对引物,并以pMD18-T-gB为模板,用PCR方法分别扩增出gB1、gB2、gB3...
- 孟日增肖成蕊王伟利孟庆峰宋战昀石建平
- 关键词：牛传染性鼻气管炎病毒GB基因截短表达抗原性分析
- 文献传递
- 牛传染性鼻气管炎病毒截短gB基因原核表达与间接ELISA诊断方法建立被引量：6
- 2010年
- 用DNAstar-Protean分析牛传染性鼻气管炎病毒gB蛋白的亲水性、抗原性和表面展示概率,据IBRVgB全基因序列设计引物,PCR扩增编码385-550位氨基酸的基因序列。将目的片段克隆,酶切鉴定并测序鉴定后,定向连接到pET-28b载体上,转化表达菌DE3并诱导表达。经SDS-PAGE分析,获得大小约为21.4 ku的目的蛋白,与预测值相符。纯化后的蛋白浓度约为2.0 mg/mL,纯度为95.27%。间接ELISA及Western blotting证明,表达的目的蛋白具有抗原性。以该蛋白作为诊断抗原建立的间接ELISA诊断方法,确定的抗原包被量为50μg/mL,血清的最佳稀释倍数为50。与进口IBRV全毒ELISA抗体诊断试剂盒比较,特异性为92.3%、敏感性为93.8%、符合率为93.3%;试验结果表明该诊断方法具有良好的特异性和敏感性。
- 李伟李伟孟日增石建平何江帅赵晓
- 关键词：IBRV原核表达间接ELISA
- 牛传染性鼻气管炎病毒gB基因的截短表达与抗原反应性分析被引量：5
- 2010年
- 根据牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)全基因组序列设计合成gB基因的特异性引物,采用PCR方法扩增IBRgB基因,并将其克隆到pMD18-T载体。用DNA Star分析IBR gB基因编码的吸附蛋白抗原性、亲水性和表面展示概率,将gB基因截短成4个片段,用Oligo 6设计4对引物,并以pMD18-T-gB为模板,用PCR方法分别扩增出gB1、gB2、gB3和gB44个基因片段,其大小分别为402、312、306和318 bp,分别定向插入到pGEX-6p-1表达载体中,转入表达菌BL21中,经IPTG诱导表达。SDS-PAGE电泳表明,表达产物以包涵体形式存在,融合蛋白大小约为40 300、39 000、38 700和37 800,与预测值相符。利用GSTrap HP层析柱纯化重组蛋白,经Western-blot和ELISA鉴定4种融合蛋白中gB3和gB4有较好的抗原反应性和特异性。
- 石建平孟日增马海利牛得料肖成蕊刘晶丁壮
- 关键词：牛传染性鼻气管炎病毒GB基因截短表达抗原性分析
