江苏省卫生厅医学科技发展基金(H201022)
- 作品数：4 被引量：4H指数：1
- 相关作者：陆超朱亮华胡毓华更多>>
- 相关机构：南京医科大学江苏省人民医院更多>>
- 发文基金：江苏省卫生厅医学科技发展基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 重组蛋白酶抑制蛋白拮抗中性粒细胞释放炎性介质的作用
- 2012年
- 目的克隆分泌型白细胞蛋白酶抑制(SLPI)蛋白基因并表达人SLPI重组蛋白,探讨其拮抗中性粒细胞释放炎性介质的作用。方法抽提人外周血中性粒细胞mRNA,克隆SLPI基因,构建质粒,转染后抽提纯化蛋白,实验分组后,分别进行不同剂量的SLPI和内毒素(LPS)共处理中性粒细胞。A组:正常对照组(不予LPS和重组SLPI蛋白处理);B组:LPS处理组(加终质量浓度0.001 g·L-1的LPS);C组:低剂量重组SLPI蛋白干预组(加重组SLPI蛋白0.010 g·L-1和终质量浓度0.001 g·L-1的LPS);D组:中剂量重组SLPI蛋白干预组(加重组SLPI蛋白0.050 g·L-1和终质量浓度0.001 g·L-1的LPS);E组:高剂量重组SLPI蛋白干预组(加重组SLPI蛋白0.100 g·L-1和终质量浓度0.001 g·L-1的LPS)。然后进行中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)活性实验、炎性介质释放实验以及转录因子STAT3活性实验,分别测定NE活性、炎性介质IL-6/IL-8表达量及转录因子STAT3的DNA结合活性。结果成功构建SLPI基因全长cDNA的真核表达载体,发现重组SLPI蛋白呈剂量依赖性地抑制LPS诱导的NE活性[(17.78±0.54)nmol·L-1vs(5.46±0.12)nmol·L-1,P<0.05]。重组SLPI蛋白也显著抑制LPS诱导的炎性介质IL-6[(179.51±6.61)ng·L-1vs(63.13±4.55)ng·L-1,P<0.05]和IL-8[(192.98±7.65)ng·L-1 vs(103.42±4.76)ng·L-1,P<0.05]的释放及转录因子STAT3的DNA结合力升高。结论 SLPI可有效抑制NE活性,减轻炎性损伤。
- 胡毓华朱亮华陆超
- 关键词：弹性蛋白酶炎性介质转录因子
- 不同胎龄早产儿喂养不耐受危险因素被引量：3
- 2013年
- 目的探讨不同胎龄早产儿喂养不耐受的危险因素。方法分析早期早产儿(268例)与晚期早产儿(280例)喂养不耐受的危险因素。结果早、晚期早产儿中发生喂养不耐受发生率分别为36.57%、12.50%。早期早产儿喂养不耐受的危险因素按显著性排序为氨茶碱使用(OR=8.766,95%CI=1.652-48.114)、宫内窘迫(OR=6.514,95%CI=1.214-41.453)、开奶延迟(OR=2.223,95%CI=1.027-4.373);晚期早产儿喂养不耐受的危险因素按显著性排序为开奶延迟(OR=8.445,95%CI=1.672-50.102)、宫内窘迫(OR=3.221,95%CI=1.010-8.524)、氨茶碱使用(OR=1.105,95%CI=1.001-2.101)。结论早期早产儿与晚期早产儿喂养不耐受危险因素显著性不同,前者需强调氨茶碱的个体化给药,后者应避免开奶延迟。
- 缪晓林崔曙东郭丽敏许云仙胡毓华
- 关键词：早产儿喂养不耐受
- SLPI对脂多糖诱导人肺上皮细胞中SP-D表达的影响被引量：1
- 2015年
- 目的研究分泌型白细胞蛋白酶抑制因子(SLPI)对脂多糖(LPS)诱导的人肺上皮细胞株A549中肺表面活性物质D(SP-D)表达的影响。方法体外培养A549细胞,分为空白对照组(A组)、LPS 10μg/ml刺激组(B组)、pcDNA3.1(+)-SLPI转染组(C组)和pcDNA3.1(+)转染组(D组)。采用RT-PCR和Western blot分别检测SP-D mRNA和蛋白表达。结果与A组相比,C组SP-D mRNA和蛋白表达增加(P<0.05),而B组和D组SP-D mRNA和蛋白表达降低(P<0.05);C组SP-D mRNA和蛋白表达均较B组增加(P<0.01)。结论 SLPI能拮抗LPS的炎性作用,刺激人肺上皮细胞中SP-D的分泌,提示SLPI对LPS诱导的肺损伤具有保护作用。
- 马思萌胡毓华陆超
- 关键词：脂多糖人肺上皮细胞
- SLPI基因真核表达质粒的构建和鉴定
- 2012年
- 目的构建并鉴定含分泌型白细胞蛋白酶抑制蛋白(SLPI)基因的重组真核表达质粒。方法以HeLa细胞的总RNA为模板,用RT-PCR方法扩增出SLPI基因cDNA,将产物克隆进真核载体pcDNA3.1(+)内,构建含SLPI基因的重组真核表达质粒。将pcDNA-SLPI重组质粒和空载体pcDNA分别转染HeLa细胞,Western blot检测SLPI蛋白表达。结果核酸序列分析及双酶切鉴定SLPI已成功插入pcDNA3.1(+)载体中,转染pcDNA-SLPI的HeLa细胞中检测到高表达的SLPI蛋白。结论成功构建了含SLPI基因的重组真核表达质粒。
- 朱亮华金蕊陆超周国平胡毓华
- 关键词：真核表达载体
