广东省自然科学基金(040636)
- 作品数：5 被引量：14H指数：2
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- 大黄鱼过敏原的提取、分离及免疫学特性鉴定被引量：7
- 2009年
- 目的提取、分离大黄鱼特异性过敏原成分,并对其免疫学特性进行鉴定。方法采用Coca’s提取液提取大黄鱼蛋白;十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析大黄鱼总蛋白的组成,以对鱼过敏患者阳性血清为一抗,Western-Blotting分析大黄鱼中的过敏原;阴离子交换层析对大黄鱼总蛋白进行初步分离,Western-Blotting分析各个组份的免疫学活性。结果大黄鱼粗浸液蛋白分子量在8～116kD之间;Western-Blotting检测到分子量为54、29、27和14kD的过敏原;通过离子交换层析分离,过敏原蛋白的相对含量有显著提高,且大多都保持原有的免疫学活性。结论研究发现了大黄鱼中多种过敏原并对其免疫学活性进行了鉴定。
- 杨睿吴海强刘志刚
- 关键词：免疫活性食物过敏
- 带鱼过敏原的分离、鉴定与纯化被引量：5
- 2008年
- 目的分离、鉴定和纯化带鱼特异性过敏原。方法采用Coca′s提取液提取带鱼蛋白;十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western-blotting分析其中的过敏原;阴离子交换层析对过敏原进行分离纯化。结果带鱼粗浸液蛋白分子量在8～130kDa之间;Western-blotting检测到分子量为12、18、25、27、29、34、38、54和60kDa的过敏原蛋白;通过离子交换层析分离得到较纯的分子量为18、38kDa的过敏原蛋白,且具有免疫活性。结论发现了带鱼中多种过敏原,并对2种过敏原分离纯化,为带鱼过敏的诊断和治疗奠定了理论基础。
- 杨睿吴海强刘志刚
- 关键词：带鱼
- pH值和酶作用对鲩鱼过敏原免疫学活性的影响研究被引量：1
- 2010年
- 目的研究pH值、胃蛋白酶和胰蛋白酶作用对鲩鱼过敏原免疫学活性的影响。方法采用不同Coca's液提取制备鲩鱼总蛋白,以鲩鱼过敏患者阳性血清为一抗用Western Blotting方法分析pH值、胃蛋白酶和胰蛋白酶以及多因素多重作用对鲩鱼过敏原免疫学特性的影响。结果HCl溶液、胃蛋白酶溶液、胰蛋白酶溶液以及多种因素的多重作用对鲩鱼蛋白均有不同程度的降解作用,且均可以显著降低鲩鱼过敏原的免疫学活性,但一些蛋白具有很高的稳定性,如M_r为35 000和23 000的蛋白。受制备过程的影响,鲩鱼蛋白中出现新的阳性过敏原条带,如M_r为27 000和20 000的阳性过敏原条带(pH 1.0 HCl溶液)。结论鲩鱼含有稳定性较高的潜在过敏原,该类潜在过敏原对热、酸、酶解等作用均有很强的耐受性。
- 吴海强徐飞龙王晓娟刘志刚
- 关键词：鲩鱼PH值胃蛋白酶免疫学特性
- 互隔交链孢霉菌在不同培养基中致敏蛋白组份的变化被引量：1
- 2008年
- 目的研究互隔交链孢霉菌在不同培养基中致敏蛋白组份的变化,为我国该菌过敏原的标准化提供理论依据。方法用4种不同的培养基(营养肉汤培养基、察氏肉汤培养基、察氏酵母膏培养基、细菌合成培养基)培养互隔交链孢霉菌,生长14d后,观察霉菌生长情况,收集菌体制备粗浸液,应用SDS-PAGE和免疫印迹分析互隔交链孢霉菌粗浸液的蛋白质成份及过敏原成份,再用Bio1D软件分析各蛋白质和过敏原组份的相对分子质量。结果在不同培养基中,互隔交链孢霉菌菌体的形态学特征各不相同。4种培养基培养的霉菌菌体的蛋白质组份分别为4、10、11和13条蛋白带;用真菌过敏患者阳性血清免疫印迹显示4种不同培养基培养的互隔交链孢霉菌特异性过敏原分别为1、6、2和1条阳性带。其中,察氏肉汤培养基培养的菌体中阳性血清反应带最多,相对分子质量分别为83000、27000、26000、20000、12000和10000。察氏肉汤培养基、察氏酵母膏培养基、细菌合成培养基培养14d的菌体中都存在一种Mr12000的致敏蛋白组份;并且不同培养基培养的互隔交链孢霉菌各自有其特异性致敏蛋白组份。结论不同培养基成份能够影响互隔交链孢霉菌的形态学特征、菌体蛋白质组份和致敏蛋白组份的数量。
- 黄志坚魏玺刘志刚李荔
- 关键词：真菌免疫印迹分析
- 枝孢芽枝菌主要过敏原的分析与免疫、质谱鉴定被引量：2
- 2008年
- 目的分析并用免疫和质谱方法鉴定枝孢芽枝菌(Cladosporium cladosporioides)的主要过敏原。方法空气中暴皿获得枝孢芽枝菌菌种,经鉴定后大规模培养;用碳酸盐缓冲液提取枝孢芽枝菌蛋白,并用SDS-PAGE、Western-blotting方法鉴定出枝孢芽枝菌的主要过敏原。主要过敏原胶内酶切,再经基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析,所得质谱数据进入网站(http://www.matrixscience.com)Mascot检索比对。结果经过暴皿获得枝孢芽枝菌菌种,其蛋白粗提液SDS-PAGE结果显示有14个条带,含量丰富的有10个条带;Western-Blotting鉴定出18kD的蛋白阳性率达66%,为枝孢芽枝菌的主要过敏原;质谱显示枝孢芽枝菌主要过敏原与约18kD嗜冷杆菌(Psychrobacter arcticum)50S的核糖体蛋白的匹配分值最高。结论采用免疫、质谱法鉴定了枝孢芽枝菌的主要过敏原是约18kD的核糖体蛋白。
- 李荔李启沅刘志刚吴海强
- 关键词：MALDI-TOF-MS核糖体蛋白真菌
