南京医科大学科技发展基金(08NMUZ050)
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
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- BAS-TRFIA检测抗核抗体Ig(GAM)方法学评估
- 2012年
- 目的评估BAS-TRFIA法检测患者血清中抗核抗体Ig(GAM),为临床早期诊断相关疾病提供良好的试验依据。方法从检测范围、精密度、回收率、稳定性、相关性试验等方面对建立的BAS-TRFIA法检测抗核抗体Ig(GAM)进行分析。结果 BAS-TRFIA法测ANA的曲线良好线性范围在1.1～37 355U/ml;ELISA法测ANA的曲线良好线性范围在18.2～1167U/ml,BAS-TRFIA法与ELISA法相比,ANA可测量范围明显提高;BAS-TRFIA法检测ANA低、中、高3种浓度混合血清的批内精密度(CV)分别为5.79%、3.81%和3.16%,批间CV分别为7.48%、6.33%和5.32%;ELISA法低、中、高3个浓度批内CV分别为9.27%、7.35%和5.51%,批间CV分别为12.31%、9.36%和7.15%;高、中、低浓度回收率分别为98.5%、102.2%、104.7%,平均回收率为101.8%;该方法测定值与进口ELISA法所得结果高度相关(R2=0.989);试剂盒置于37℃水浴箱7d后,BAS-TRFIA法结合率仅下降15.9%,而ELISA法结合率下降58.4%,BAS-TRFIA法试剂盒稳定性较好。结论BAS-TRFIA法检测人血清中的ANA抗体灵敏度高、检测范围宽、重复性和稳定性好,对早期诊断自身免疫性疾病及监测疗效具有重要意义。
- 张晓峰叶燕邹耀红胡志刚
- 关键词：生物素时间分辨荧光抗核抗体
- ANA-IgG抗体时间分辨荧光免疫分析法的建立被引量：1
- 2010年
- 目的建立时间分辨免疫荧光定量检测ANA-IgG抗体的方法。方法以重组ANA蛋白作为抗原包被微孔板,双功能螯合剂异氰酸苄基二乙烯三胺四乙酸(DTTA)络合Eu3+及ANA-IgG抗体,采用夹心法建立ANA-IgG-TRFIA并进行质量控制,考核其灵敏度特异性测量范围及方法的稳定性等。结果方法的灵敏度为2.19U/ml;批内和批间CV分别为4.75%和6.77%,平均回收率为99.27%;该方法测定值与ELISA所得结果高度相关;180份正常体检者血清标本进行ANA-IgG抗体检测,结果均为正常,特异性100.00%。结论 ANA-IgG-TRFIA检测方法灵敏度高、特异性强,可测范围广,可以方便应用于临床,为相关疾病的诊断和监测提供良好的实验指标。
- 俞蕾邹耀红胡志刚陈国千
- 关键词：免疫荧光测定酶联免疫测定
- 生物素-亲合素系统-时间分辨荧光免疫分析法检测抗核抗体方法学的建立和临床应用被引量：2
- 2012年
- 目的建立高灵敏度、宽量程的定量检测患者血清中抗核抗体的生物素．亲合素系统．时间分辨荧光免疫分析（BAS，TRFIA）方法。方法以hela细胞核和抗人免疫球蛋白（GAM）分别作为固相抗原和生物素化抗体，Eu3＋标记亲合素；标准品或样品中抗核抗体与固相核抗原、生物素GAM、Eu3＋标记亲合素形成固相核抗原．抗核抗体．生物素化抗体-Eu3＋标记亲合素的多层夹心免疫反应复合物；加入荧光增强液解离Eu3＋，形成强荧光螯合物，荧光强度与样品中待测抗核抗体的含量呈正比，建立BAS-TRFIA方法检测抗核抗体；对建立的BAS-TRFIA法检测抗抗核抗体的精密度、检测范围、稳定性等进行分析。收集50名健康献血者、105例系统性红斑狼疮、109例类风湿关节炎、25例原发性胆汁性肝硬化、29例干燥综合征、23例硬皮病、25例混合性结缔组织病患者血清标本，采用建立的BAS-TRFIA法检测这些患者血清中的抗核抗体，计算阳性率。结果BAS—TRFIA法检测抗核抗体高、中、低3种浓度混合血清的批内（n=20）精密度分别为3．13％、3．74％和5．76％，批间（n=8）精密度分别为5．31％、6．25％和7．46％，均优于酶联免疫吸附试验（ELISA）法；方法的灵敏度为2．24U／ml；平均回收率为100．74％；该方法测定值与进口ELISA法所得结果高度相关（Rz=0．989）；BAS．TRFIA法检测健康献血者、系统性红斑狼疮、类风湿关节炎、原发性胆汁性肝硬化、干燥综合征、硬皮病、混合性结缔组织病患者血清标本抗核抗体，阳性率分别为0、100％、23％、96％、38％、91％、92％；一强阳性标本，BAS．TRFIA法测抗核抗体的曲线良好线性范围在稀释浓度1：12．5～1：409600的范围内；ELISA法测抗核抗体的曲线良好线性范围在稀释浓度1：100～1：51200的范围内，BAS-TRFIA法与ELISA法相比，抗核抗体可测量范围明
- 胡志刚刘洁陈国千邹耀红俞蕾
- 关键词：抗体抗核生物素荧光免疫测定
