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鸭圆环病毒Cap基因在昆虫细胞杆状病毒系统中的表达及鉴定被引量：4: 2012年; 通过PCR方法扩增完整的鸭圆环病毒Cap基因,按正确的阅读框架将其克隆入pFastBacTM HTB杆状病毒载体,将筛选的阳性重组载体pF-CP转化至含有杆状病毒穿梭载体和辅助载体的DH10Bac大肠杆菌感受态细胞,经过蓝白斑筛选和PCR鉴定,获得重组表达载体rBacmid-CP。在脂质体的介导下转染Sf9昆虫细胞,72h后获得重组杆状病毒。Western blot和间接免疫荧光(IFA)试验结果表明,表达的蛋白与原核表达Cap蛋白免疫小鼠采集的血清具有良好的反应原性,为进一步研究Cap蛋白的功能奠定基础。; 张兴晓邹金峰相琪旺王鑫陈琳谢之景姜世金; 关键词：鸭圆环病毒 IFA

1型鸭甲肝病毒LY0801株VP1基因在鸭胚传代中的变异规律研究被引量：1: 2014年; 为了解1型鸭甲肝病毒（Duck hepatitis A virus type 1）VP1基因在鸭胚传代中的变异规律,本研究将LY0801株DHAV-1在鸭胚体内传代至30代,分别对1~5、10、15、20、25、30代病毒进行VP1基因的克隆测序。各代次病毒分别以108copies/胚接种9日龄健康鸭胚,测定各组鸭胚的平均死亡时间和病毒在鸭胚尿囊液中的增殖拷贝数。结果表明：DHAV-1在鸭胚传代过程中,不同代次之间出现12个氨基酸的反复变异和同步变异,分别为R43M（K）、T48A、T101S、L169F、T180I、S181L、R183Q、E184A（K）、G187D、D193N、M213R、H219Y;在传代过程中,病毒致死鸭胚的时间逐渐延迟,但病毒在鸭胚内的增殖拷贝数未呈现稳定增长的趋势。; 马明杰郭翠平焦玉祥吕佳泓孙振张瑞华陈君豪谢之景姜世金; 关键词：VP1 致弱

山东部分地区肉鸭群鸭圆环病毒血清学调查被引量：7: 2012年; 为了解鸭圆环病毒(DuCV)在山东地区的流行情况,本研究采用已建立的间接ELISA(iELISA)方法对山东省潍坊和泰安两个地区的17个肉鸭场1 130份血清进行DuCV抗体检测。结果显示,肉鸭场的DuCV抗体个体阳性率为2%～78%,平均为29.91%(338/1130),群体阳性率为100%(17/17)。潍坊地区的抗体阳性率(42.81%)明显高于泰安地区(17.73%),显示DuCV在老养殖区鸭群中污染更加严重。; 王鑫相琪旺朱岩丽谢之景陈君豪周国梅成岩姜世金; 关键词：鸭圆环病毒间接ELISA 血清学调查

改良菌落PCR法筛选、鉴定DHBV部分核衣壳蛋白基因的重组克隆被引量：1: 2012年; 目的优化并验证改良菌落PCR程序的有效性。方法经常规PCR扩增DHBV编码核衣壳蛋白与DNA多聚酶重叠区的部分核苷酸片段(DHBc-dp),纯化特异性扩增产物并连入pMD 18-T载体,转化DH5α感受态细胞后涂布于Amp加倍的LB平板,记为亲代样品(PS),37℃培养12h,室温放置4h～8h。无菌操作挑取细菌转入优化的PCR反应液扩增、鉴定;余菌体室温放置完成二次生长。PS剩余PCR鉴定产物继代转化并涂布LB平板,记为继1代样品(F1S),同样进行菌落PCR鉴定。选取PS和F1S中PCR强阳性样品进行扩增及菌液PCR、质粒PCR、质粒酶切和测序鉴定。结果挑菌后的菌落二次生长成面积扩大的菌苔;优化菌落PCR反应体系保持、甚或提高了原有方法的高度特应性和稳定性;携外源目的片段的重组质粒在菌落PCR反应过程中能保持结构完整,并能在继代转化宿主细胞中忠实复制与扩增。结论改进的菌落PCR程序,继承了既有菌落PCR程序鉴定重组克隆的特异性和高效性,并能有效预防阳性转化子的丢失;同时,在增加优势抗性菌落生长量的前提下有效地抑制了卫星菌落的生长。; 王玉于爱莲姜世金施鲁笛陈国敏高鹏; 关键词：DHBV 核蛋白基因菌落PCR

鸭甲肝病毒3型2012年山东分离株VP1基因的序列分析被引量：5: 2013年; 为揭示近年来鸭甲肝病毒3型(DHAV-3)中国分离株VP1基因的遗传变异规律,本研究对2012年从山东省分离到的13株DHAV-3的VP1基因分别进行PCR扩增、序列测序与分析。结果显示,13株DHAV-3的VP1基因均由720个核苷酸组成,共编码240个氨基酸,核苷酸序列和氨基酸序列同源性分别为94.6%～99.9%和95.0%～100%。与GenBank中公布的31株DHAV-3的VP1基因的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为92.5%～100%和90.8%～100%。系统进化分析显示,DHAV-3可分为两个基因型,其中除疫苗毒B63之外所有中国分离株均属于GⅠ型,越南分离毒株主要属于GⅡ型S1亚型,而韩国分离株组成GⅡ型中的S2亚型,具有明显的地域特征。; 徐倩陈琳琳张瑞华杨蕾谢之景朱岩丽姜世金司兴奎; 关键词：VP1基因 GENBANK

鸭圆环病毒ORF3基因的克隆及序列分析被引量：4: 2011年; 为了解鸭圆环病毒(DuCV)不同分离株ORF3基因变异情况及分析其同源性,本研究从临床病料中分离10株DuCV,扩增ORF3基因并测定其序列。通过与已知序列比对分析发现,DuCV ORF3基因分为两种基因型,大小分别为237 bp和297 bp。ORF3基因同一基因型之间的核苷酸同源性为95.8%～100%,氨基酸同源性为88.6%～100%,而不同基因型之间的核苷酸同源性仅为87.8%～91.6%,氨基酸同源性仅为72.2%～81.0%。; 魏宗邹金峰雷战孙慧王鑫相琪旺赵钦姜世金; 关键词：鸭圆环病毒 ORF3基因基因型

山东省禽源大肠杆菌中超广谱β-内酰胺酶的基因型检测被引量：2: 2013年; 为研究山东省禽源大肠杆菌中产超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrum b-lactamases,ESBLs)的基因型分布及其对头孢类抗生素的耐药性,分别用针对TEM、SHV、OXA-2、OXA-10、CTX-M-1、CTX-M-2、CTX-M-8与CTX-M-9等8个耐药基因的通用引物对118株禽源大肠杆菌进行了PCR检测,并对其进行了5种头孢类抗生素(头孢拉定、头孢哌酮、头孢曲松、头孢噻肟、头孢噻呋)的药敏试验。结果表明山东省禽源大肠杆菌对5种头孢类抗生素均产生了较高耐药性(54.24%～81.36%),其产ESBLs的耐药基因携带率达到75.42%(89/118),29.66%(35/118)的菌株携带2种产ESBLs基因,11.86%(14/118)的菌株携带3种产ESBLs基因。山东省禽源大肠杆菌中未检测到SHV、CTX-M-2、CTX-M-8与OXA-10基因,TEM、CTX-M-9、CTX-M-1和OXA-2基因的检出率依次为52.54%(62/118)、37.29%(44/118)、28.00%(33/118)和10.17%(12/118)。; 郭翠平马明杰刘建民吕佳泓焦玉祥朱岩丽谢之景姜世金; 关键词：禽源大肠杆菌药敏试验超广谱Β-内酰胺酶基因型

鸭甲肝病毒3型荧光定量PCR检测方法的建立及其在雏鸭体内分布规律被引量：4: 2016年; 为研究鸭甲肝病毒3型（DHAV-3）在雏鸭体内的动态分布情况,本研究建立了检测DHAV-3的Taqman荧光定量PCR方法,该方法在107-102范围内有良好的线性关系,相关系数0.997,检测下限为22copies/PCR。将200只2日龄雏鸭随机分为4组,依次对每组雏鸭肌肉注射0.2ELD50、2ELD50、20ELD50的DHAV-3（SD1201株）和生理盐水,并于感染后1、2、6、12、18、24、36、48、72、96h从各组分别随机取3只雏鸭,应用荧光定量PCR方法对其心脏、肝脏、脾脏、肾脏、胸腺、法氏囊的病毒含量进行检测。结果表明,DHAV-3于感染后1h即可在3个试验组雏鸭肝脏中检测到,病毒含量为102-103 copies/g,2h后在心脏、脾脏、肾脏、胸腺和法氏囊中均检测到该病毒。各器官中的病毒含量于感染后36-48h达到高峰期,至72h病毒含量仍维持稳定。此外,在整个感染过程中,被检器官中的病毒含量与初始感染剂量呈正相关。本研究结果有助于阐明DHAV-3的致病机理。; 林少莉杨蕾张瑞华陈君豪王鑫夏琳琳谢之景姜世金; 关键词：荧光定量PCR

山东省禽源致病性大肠杆菌质粒介导喹诺酮类药物耐药基因的检测被引量：4: 2012年; 为了解山东省禽源致病性大肠杆菌质粒介导喹诺酮类药物耐药基因分布情况,对2004～2011年间分离的230株禽源致病性大肠杆菌进行了qnrA、qnrB、qnrS基因的PCR检测,结果发现未检出qnrA和qnrB,qnrS基因的检出率为25.22%(58/230)。对部分检出的qnrS基因测序后发现假阳性率较高(8/24),为了提高检测的特异性,建立了检测qnrS基因的套式PCR,测序结果表明该方法检出准确率为100%,使用该方法检出230株细菌中qnrS基因的携带率为16.52%(38/230),表明含qnrS基因的耐药质粒在山东省禽源致病性大肠杆菌中分布较为广泛。; 苏晶杨芳芳孙慧朱岩丽王淑静谢之景毕海洋姜世金; 关键词：大肠杆菌喹诺酮类药物耐药性套式PCR

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山东省科技发展计划项目(2010GNC10914)

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