国家自然科学基金(311012299)
- 作品数：3 被引量：27H指数：3
- 相关作者：吴静邬敏辰陈伟黄芳龚燕燕更多>>
- 相关机构：江南大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央高校基本科研业务费专项资金教育部重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程更多>>
- 羧肽酶研究进展被引量：21
- 2012年
- 羧肽酶(Carboxypeptidase)是一类可水解肽链C末端氨基酸残基的蛋白酶,广泛存在于高等植物、动物组织及真菌中,主要分为丝氨酸羧肽酶(EC3.4.16.-)、金属羧肽酶(EC3.4.17.-)和半胱氨酸羧肽酶(EC3.4.18.-)3个亚类。作者综述了羧肽酶的研究进展,主要包括羧肽酶的应用、性质、来源分布、克隆表达及研究意义,并对其研究前景进行了展望。
- 吴静闵柔邬敏辰陈伟
- 关键词：羧肽酶
- 糖苷水解酶第10家族真菌木聚糖酶保守区及进化关系的分析被引量：4
- 2014年
- 目的对糖苷水解酶第10家族(glucoside hydrolase family 10,GHF10)真菌木聚糖酶保守区及进化关系进行分析。方法应用CLUSTALW2软件对41条GHF10真菌木聚糖酶氨基酸序列进行多序列比对分析,获得完全保守的氨基酸位点;应用Block Maker和Consensus软件对CLUSTALW2比对结果进一步分析,确定第10家族真菌木聚糖酶共有的保守区及保守氨基酸位点;应用Pymol软件对源于GenBank中登录的6种10家族木聚糖酶进行比对,并找到这41条序列中共有的β折叠和α螺旋;利用MEGA 4.0软件对CLUSTALW2比对结果构建系统进化树,并根据进化树进行分组。结果 41条序列长度虽然不等,但均包含E270和E405两个谷氨酸催化位点。通过序列比对,得到第10家族真菌木聚糖酶的5个高度保守区TPENSMK、RGHTLVWHSQLPSWV、WDVVEN、AKLYINDYYNL、TELDI以及20个完全保守的氨基酸位点,这些保守区和保守位点多数分布在木聚糖催化区域以及(β/α)8折叠桶的内壁上。根据木聚糖酶的亲缘关系,可将第10家族真菌木聚糖酶分为3个大组,其中第1和第3组的木聚糖酶分别有12和27种,且均来源于子囊菌门;第2组仅包含2种木聚糖酶序列,来源于Neocallimastigomycota和担子菌门。结论分析了GHF10真菌木聚糖酶的保守区及进化关系,为木聚糖酶的工程改造奠定了基础。
- 龚燕燕朱天地殷欣邬敏辰吴静
- 关键词：真菌木聚糖酶进化
- 宇佐美曲霉羧肽酶成熟肽基因的表达及鉴定被引量：4
- 2013年
- 目的克隆、表达宇佐美曲霉(Aspergillus usami)羧肽酶成熟肽基因,并检测其酶学性质。方法根据前期克隆的宇佐美曲霉羧肽酶基因序列设计引物,克隆羧肽酶成熟肽基因AucpA,构建重组表达质粒pPIC9k-AucpA,电击转化毕赤酵母GS115,甲醇诱导重组蛋白表达。表达的重组蛋白经Sephadex-50层析纯化后,进行酶活性及其影响因素的检测。结果重组表达质粒pPIC9K-AucpA经双酶切及测序证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约81 000,纯化的重组羧肽酶最高比酶活为57.15 nkat/mg,最适反应温度为45℃,最适反应pH为3.5,金属离子、EDTA对重组羧肽酶的酶活性无影响,而PMSF对重组羧肽酶酶活性的抑制率达50%以上。结论已成功在毕赤酵母中表达了具有较高酶活的宇佐美曲霉羧肽酶,为进一步研究该重组酶的应用奠定了基础。
- 闵柔黄芳曾妍邬敏辰吴静陈伟
- 关键词：宇佐美曲霉羧肽酶基因表达酶学
