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博卡病毒VP2基因在昆虫细胞sf9中表达及临床标本筛查被引量：2: 2009年; 目的表达人博卡病毒（HBoV）vP2蛋白，用于临床标本HBoV的筛查。方法将VP2基因重组于杆状病毒基因组，重组的杆状病毒感染昆虫细胞sf9，用HA抗体进行Western Blot鉴定重组融合vP1蛋白表达。通过电镜观察重组蛋白颗粒。以vR2蛋白作为抗原对176例临床样本进行免疫印迹筛查。结果在昆虫细胞中vB蛋白的表达量约占细胞总蛋白的60％以上，VP2蛋白相对分子质量为60×10^3。电镜观察博卡病毒vP，蛋白形成病毒样颗粒（VLP），其大小在20nm左右；采用免疫印迹技术从临床标本中筛查出4例患者HBoV阳性，阳性率达到2.28％（4／176）。结论本研究成功的在昆虫细胞中表达了博卡病毒VR蛋白；表达vP2蛋白具有一定抗原性，为开展人博卡病血清学研究方法建立提供基础。; 滕灵方林峰郑美云郑昌华吴锋曾爱平黄恩佩莫一涵郑敏巧李旭阳侯建毅; 关键词：基因表达调控免疫印迹法

利用人支气管上皮细胞系分离和培养人博卡病毒被引量：4: 2009年; 目的研究人博卡病毒（HBoV）在呼吸道感染中致病性及机理。方法利用人支气管上皮细胞系进行HBoV分离及培养，通过电镜对培养细胞中HBoV的形态及感染细胞进行研究，并采用逆转录PCR（RT-PCR）方法，检测HBoV在细胞中转录产物mRNA，同时对扩增产物进行测序及分析。结果将含有HBoV阳性痰液标本无菌接种人支气管上皮细胞系，出现2例致使细胞发生明显的病变（CPE）。电镜观察在细胞质中散在六角形或圆形的病毒粒子，大小18-26nm之间，大部分是20nm。RT-PCR扩增产物经电泳检测与预期结果相符是295bp，扩增产物测序结果与GenBank中HBoV序列比较，核苷酸同缘性99％，氨基酸同缘性100％。结论HBoV感染人支气管上皮细胞后能够在该细胞内增殖，并产生特征性生物学改变。本研究为今后HBoV致病性及免疫应答谱研究奠定基础。; 林峰滕灵方郑美云郑昌华吴锋李桦郑敏巧曾爱平黄恩佩莫一涵侯建毅; 关键词：支气管上皮细胞细胞

检测人博卡病毒抗体间接酶联免疫吸附法的建立及临床应用被引量：1: 2010年; 目的建立间接酶联免疫吸附法（ELISA）检测人博卡病毒（HBoV）抗体，探讨其临床应用的可行性。方法以重组表达的HBoV融合蛋白VP2作为包被抗原，建立检测HBoV抗体的间接ELISA，优化该检测方法的最佳条件，观察其精密度、敏感度和特异性，并与荧光定量PCR方法对比检测40份临床样本，同时采用免疫印迹法（Westernblot）确认其符合率。结果所建立的间接ELISA最佳抗原包被浓度为2mg／L，酶标二抗工作浓度为1：5000，血清标本最佳稀释度为1：200。该方法平均批内变异系数为6．87％，平均批间变异系数为4．67％。40份临床样本间接ELISA检测结果与荧光定量PCR及免疫印迹结果一致，符合率100％。结论利用VP2融合蛋白作为抗原，建立的检测血清HBoV抗体间接ELISA方法特异性强、重复性好，可用于HBoV抗体的定量和定性检测。; 林峰滕灵方郑敏巧郑昌华吴锋黄恩佩侯建毅; 关键词：抗体酶联免疫吸附测定临床实验室技术

人博卡病毒感染支气管上皮细胞生物学特征的研究被引量：6: 2008年; 目的研究人博卡病毒（HBoV）在呼吸道感染中的致病性及机制。方法采用人博卡病毒阳性标本感染健康人支气管上皮细胞，观察HBoV感染支气管上皮细胞后的生物学特征，并进行病毒空蚀斑、红细胞吸附抑制及免疫荧光测定。结果75％感染细胞变圆并堆积成葡萄状，伴随有坏死、破碎、脱落。病毒蚀斑测定出典型“猫头鹰眼”现象。红细胞吸附实验观察到90％以上红细胞附着感染支气管上皮细胞。荧光检测出在细胞核内具有典型荧光块。结论支气管上皮细胞可用于分离HBoV，HBoV感染支气管上皮细胞后能够在该细胞内增殖，并导致特征性生物学改变。本研究为今后人博卡病毒致病机制研究奠定基础。; 林峰侯建毅郑敏巧吴锋曾爱平李桦郑昌华陈弘李旭阳饶高峰莫一涵黄恩佩; 关键词：上皮细胞支气管

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国家自然科学基金(30771913)