北京市优秀人才培养资助(20071D1600200391)
- 作品数：6 被引量：17H指数：3
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- 基质金属蛋白酶-9抑制剂治疗自身免疫性心肌炎大鼠模型的实验研究被引量：5
- 2011年
- 目的 观察基质金属蛋白酶（MMP）-9抑制剂米诺环素对实验性自身免疫性心肌炎（EAM）Lewis大鼠模型的治疗效果，并探讨其机制。方法 Lewis大鼠60只，6～8周龄，体重150～170g。双足底注射心肌C蛋白片段和完全弗氏辅佐剂的油状混合物，腹腔注射百日咳毒素建立自身免疫性心肌炎大鼠模型。根据药物干预的时期不同将大鼠分为早期干预组、中期干预组和晚期干预组3组，每组20只，不同的干预组又分为米诺环素治疗组（治疗组）和对照组两个亚组，每个亚组10只。早期干预组治疗组为腹腔注射50me／kg的米诺环素，1次／d，连续21d，免疫注射后第1～2l天。中期干预组治疗组为腹腔注射50me／kg的米诺环素，1次／d，连续21d，免疫注射后第8～28天。晚期干预组治疗组为腹腔注射50mg／kg的米诺环素，1次／d，连续21d，免疫注射后第15～35天。各对照组均为在相同时间给予与治疗组相同体积的生理盐水腹腔注射。干预结束后，处死动物，心脏取材，进行系列检测。组织病理学石蜡切片苏木素-伊红（HE）染色检测心肌炎症分级，天狼猩红染色检测心肌胶原纤维含量，免疫组织化学染色检测心肌巨噬细胞和T细胞浸润，实时定量PCR检测MMP-2、MMP-9的mRNA表达水平，冰冻切片用于原位明胶酶谱法检测明胶酶活性。结果 早期干预组和中期干预组的治疗组大鼠心肌组织石蜡切片显示心肌组织炎症积分均显著低于其相应对照组[分别为1．51±0．36比3．03±1．35（P〈0．05）和2．11±0．82比3．75±0．29（P〈0．01）]，免疫组织化学显示心肌巨噬细胞和T淋巴细胞浸润数目均显著低于其相应对照组，天狼猩红染色显示心肌间质纤维积分和纤维含量均明显低于其相应对照组[分别为1．51±0．35比2．75±0．29（P〈0．01）和1．61±0．42比2．50±0．41（P〈0．05）]，实时定量PCR检测心肌MMP-
- 韩丽娜李铁岭张亚晶杨庭树丁宇赵晓宁郭树理
- 关键词：心肌炎MMP-9米诺环素
- 自身免疫性心肌炎大鼠模型血清HA和LN的表达被引量：3
- 2011年
- 目的:探讨实验性自身免疫性心肌炎(EAM)大鼠血清透明质酸(HA)和层黏连蛋白(LN)的动态变化及其意义。方法:Lewis大鼠60只,随机等分为6组,其中5组采用心肌C蛋白和完全弗氏佐剂足底注射,百日咳毒素腹腔内注射制作EAM大鼠模型。在免疫注射后1w、2w、4w、6w和8w,取心脏,行苏木素-伊红染色检测心肌炎症积分,天狼星红染色检测心肌纤维化积分,同时行放射免疫分析检测血清HA和LN。另外1组不予免疫注射,作为空白组。结果:EAM大鼠心肌炎症积分在免疫注射后1w较空白组大鼠无明显改变,2w后迅速升高,高水平状态维持到第4w,以后逐渐下降;心肌间质纤维化积分在免疫注射后第1w、2w较空白组大鼠无明显改变,第4w后迅速升高,并维持高水平状态到第8w;血清HA和LN在免疫注射后第1w、2w水平较空白组大鼠无明显改变,第4w迅速升高,并维持高水平状态到第8w,同心肌间质纤维化积分变化一致。结论:血清HA和LN水平可作为判断心肌自身免疫性心肌炎心肌间质纤维化程度和活动性,且能作为预测心脏病转归方向的指标。
- 韩丽娜李铁岭张亚晶杨庭树丁宇郭树理赵晓宁
- 关键词：心肌炎层黏连蛋白
- 人心肌C蛋白诱导建立实验性自身免疫性心肌炎模型被引量：3
- 2012年
- 目的构建人心肌C蛋白（cardiacCprotein，CCP）具有免疫原性肽段的重组质粒，并在大肠杆菌中表达，纯化和复性重组蛋白，并利用重组蛋白免疫建立实验性自身免疫性心肌炎（EAM）大鼠模型。方法提取人心肌总RNA，反转录生成cDNA，PCR扩增从人CCP基因组中获得具有免疫原性肽段基因片段。通过克隆载体pEASY—T1进行CCP基因克隆，用插入失活筛选法筛选阳性重组体，菌检PCR和核酸序列测定。将阳性克隆与原核表达载体pQE30双酶切，将CCP具有免疫原性肽段和表达载体连接，转化到大肠杆菌感受态细胞M15中表达，菌检PCR筛选阳性克隆大量合成蛋白。六组氨酸标签蛋白（His—tag）蛋白质纯化方法提纯重组蛋白，在pH值3．0、0．1mol／L甘氨酸和盐酸缓冲液中通过半透膜恢复重组蛋白的天然结构。100μgCCP和2．5g/L完全氟氏佐剂充分混合，Lewis大鼠双足垫等量注射，0．5μg百日咳毒素腹腔注射建立EAM模型。在免疫注射后第2、4、6和8周，行心脏血液动力学检测后处死实验动物行心肌组织病理学检测。结果琼脂糖凝胶电泳扩增所得人CCP片段为1000bp左右，与预期大小一致。构建重组克隆载体后，提质粒经过核酸序列分析后，得出克隆片段与CCP基因序列一致。构建重组表达载体后，菌检PCR得到的目的片段为1000bp左右，与预期大小一致。包涵体形式表达重组蛋白占细胞总蛋白的80％～90％。纯化CCP垂直凝胶电泳相对分子质量在35000左右，与预期大小一致，纯度达90％以上。用抗6×His—Tag抗体做Westernblot检测，诱导后高表达的蛋白质条带和纯化后的蛋白质在相同的电泳位置上出现染色条带。EAM大鼠，2周是急性、炎症性心肌炎病程阶段，4周是炎症性心肌炎和纤维化心肌炎并存的亚急性阶段，6周是慢性扩张型心肌病阶段。结论结合使用基因克隆技术和六组氨酸标签蛋白
- 韩丽娜李铁岭丁国雷刘健伟丁宇张亚晶
- 关键词：心肌炎
- MMP-2抑制剂治疗自身免疫性心肌炎大鼠的实验研究被引量：2
- 2011年
- 目的:观察基质金属蛋白酶-2(MMP-2)抑制剂TISAM对实验性自身免疫性心肌炎(EAM)Lewis大鼠模型的治疗效果,并探索可能的治疗机理。方法:口服5 mg/kg TISAM,每日一次,连续14 d治疗EAM Lewis大鼠动物。根据治疗方案不同,分3组,分别为早、中和晚期治疗组(n=20)。治疗结束后,处死动物,心脏取材,进行心肌炎症分级、心肌胶原纤维含量,心肌巨噬细胞和T细胞浸润,MMP-2和MMP-9的mRNA表达,以及明胶酶活性测定。结果:TISAM早期治疗(在模型建立同时开始治疗,持续14 d)无效,中、后期治疗(在模型建立后第7～14天开始治疗,持续14 d)有效。在治疗有效方案中,治疗组与对照组相比,心肌炎症级别下降,心肌间质纤维化级别下降,巨噬细胞和T淋巴细胞浸润数目减少,MMP-2 mRNA表达降低,明胶酶活性降低。结论:MMP-2抑制剂抑制EAM中期的病理发展过程,其机制可能与降低心肌炎症细胞浸润,延缓心肌间质纤维化,从转录水平降低MMP-2 mRNA的表达,同时从蛋白水平降低明胶酶活性表达有关。
- 韩丽娜李铁岭张亚晶杨庭树丁宇
- 关键词：心肌炎基质金属蛋白酶-2
- 自身免疫性心肌炎Th细胞亚群及其相关细胞因子的变化被引量：5
- 2011年
- 目的了解辅助性T细胞Th1、Th2和Th17亚群在自身免疫性心肌炎的反应状态,从而探讨该病的免疫学发病机制。方法心肌C蛋白和完全弗氏佐剂足底注射、百日咳毒素腹腔内注射制作实验性自身免疫性心肌炎(EAM)大鼠模型。未给予免疫注射正常大鼠作为对照。在免疫注射后1周、2周、4周、6周和8周,经胸行心脏超声心动图检测。取心脏,行苏木素-伊红染色确定心肌炎症积分,天狼星红染色确定心肌纤维化。采用细胞内细胞因子染色和四色荧光抗体流式细胞术检测各组大鼠脾细胞中Th1、Th2和Th17比例,酶联免疫吸附试验检测外周血Th1相关细胞因子干扰素(IFN-)γ、Th2相关细胞因子白细胞介素(IL-)4和Th17相关细胞因子IL-17水平。结果经胸超声心动图显示EAM大鼠至免疫注射后第4周心脏射血分数维持正常值,左室收缩末期直径和左室舒张末期直径缩小;至第8周心脏射血分数明显降低,左室收缩末期直径和左室舒张末期直径增加。炎性积分在免疫注射后2周上调,4周达高峰,6周时逐渐降低;心肌纤维含量在第1周和第2周无明显改变,至第4周明显增强并达高峰,持续至第8周。脾细胞Th1及其相关细胞因子IFN-γ第1周反应血清水平升高,第4周达高峰,第6周开始下降。Th17及IL-17在第2～4周升高,水平维持至第6～8周。Th2在前4周无明显变化,IL-4在第4周开始升高,两者均在第6周迅速升高,并持续至第8周。结论在EAM大鼠模型中,2～4周是心肌炎症阶段,4～8周是纤维化阶段。在此过程中出现Th1/Th2失衡,其中炎症性心肌炎阶段以Th1、Th17亚群介导的细胞免疫为优势,纤维化心肌炎阶段以Th2和Th17亚群介导的体液免疫为优势,Th17衔接机体细胞免疫和体液免疫。
- 韩丽娜李铁岭张亚晶杨庭树丁宇郭树理
- 关键词：自身免疫性心肌炎辅助性T细胞
- 心力衰竭基因治疗的研究进展
- 2011年
- 心力衰竭是多种心血管疾病的终末阶段。在过去二三十年里,虽然广泛采用药物和尖端仪器治疗心力衰竭,但患者数量仍不断增加。近年来,一些学者提出基因治疗方法,并进行了大量实验研究。本文就心力衰竭基因治疗的研究进行综述。
- 丁国雷韩丽娜
- 关键词：基因治疗心力衰竭
