国家科技重大专项(2012ZX09102301-015)
- 作品数：5 被引量：6H指数：1
- 相关作者：李真真张砚君杨圆圆卢杨张晴更多>>
- 相关机构：中国医学科学院北京协和医学院西安交通大学中国医学科学院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 以脐带间充质干细胞为载体的靶向基因治疗系统联合5-FU对裸鼠HepG2移植瘤的作用被引量：1
- 2017年
- 目的构建以人脐带间充质干细胞(HUMSCs)为载体的靶向基因治疗系统,观察该系统联合低剂量5-FU对裸鼠HepG2移植瘤的治疗作用。方法采用组织块接种法从新鲜无菌新生儿脐带中分离HUMSCs,利用PCR、重叠PCR、酶切、连接等分子生物学技术构建慢病毒表达质粒LentiR.E1A和腺病毒穿梭质粒pAd-hTERTpIL24,并包装慢病毒LentiR.E1A和腺病毒Ad-hTERTp-IL24。采用Transwell实验观察慢病毒和腺病毒共感染对HUMSCs向HepG2细胞趋化的影响。采用皮下接种的方法建立HepG2移植瘤模型,将荷瘤小鼠分成5组各5只,分别给予尾静脉注射PBS、HUMSCs、低剂量5-FU、慢病毒感染HUMSCs联用低剂量5-FU、双病毒共感染HUMSCs联用低剂量5-FU的治疗,比较各组的抑瘤效应。利用BD Annexin-Ⅴ-PE凋亡试剂盒检测腺病毒Ad-hTERTp-IL24与低剂量5-FU联用诱导肝癌细胞凋亡情况。结果成功构建了慢病毒表达载体p LentiR.E1A和腺病毒表达载体pAd-hTERTp-IL24,并成功包装出了慢病毒LentiR.E1A和腺病毒Ad-hTERTp-IL24。Transwell实验显示,慢病毒和腺病毒共感染HUMSCs向肿瘤细胞的迁移能力无明显改变。联合低剂量5-FU治疗裸鼠肝移植瘤中治疗组肿瘤体积较对照组减小(P<0.01)。Ad-hTERTp-IL24与低剂量5-FU联用诱导肿瘤微环境内的肿瘤细胞发生凋亡,其荧光强度明显强于Ad-Track+5-Fu组和5-Fu组。结论成功构建了以HUMSCs为载体的靶向基因治疗系统,由HUMSCS.LentiR.E1A运载携带抑瘤基因的腺病毒Ad-hTERTp-IL24联用低剂量5-FU对裸鼠HepG2移植瘤有明显抑制作用。
- 孔凡妮查剑英杨圆圆卢杨李真真张砚君
- 关键词：脐带间充质干细胞
- 低剂量5-Fu与Ad-IL24联用对肝癌细胞HepG2生长的抑制作用及其机制被引量：2
- 2016年
- 目的探讨低剂量5-Fu与腺病毒表达的IL24联用对HepG2细胞的生长抑制作用及其机制。方法采用PCR、酶切、连接等方法构建pAd-IL24腺病毒表达载体,Western blot检测IL24蛋白水平表达情况。CCK8法确定5-Fu联用剂量,检测与Ad-IL24联用对HepG2肝癌细胞的抑制效果,并计算联合指数。流式细胞术检测不同腺病毒感染复数及不同5-Fu浓度下绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)阳性细胞的比例。流式细胞术检测5-Fu作用前后HepG2细胞表面柯萨奇腺病毒受体(coxsackie adenovirus receptor,CAR)的表达变化。结果成功构建腺病毒表达载体pAd-IL24。确定5-Fu联用剂量为1μg/ml和2μg/ml,Ad-IL24与低剂量5-Fu联用可以协同抑制HepG2肝癌细胞生长,联合指数分别为0.75和0.64。低剂量5-Fu作用于HepG2后使其表面CAR水平显著增加(P<0.01)。结论低剂量5-Fu与Ad-IL24联用对HepG2肝癌细胞系的抑制有协同作用,可能与5-Fu上调HepG2表面CAR水平相关。
- 杨圆圆卢杨张晓龙张晴李真真张砚君
- 关键词：肝癌5氟尿嘧啶腺病毒
- IL3融合蛋白稳定性分析、改造及活性研究被引量：1
- 2013年
- 白细胞介素3受体α链(IL-3Rα链)即CD123抗原在急性髓系白血病(AML)干细胞表面高表达,在正常造血干细胞表面几乎不表达,可用做白血病治疗靶点。本实验室构建融合蛋白IL3-LDM靶向杀伤CD123+的肿瘤干细胞,针对其结构不稳定部位进行质谱鉴定,发现IL3第131位丙氨酸和第132异亮氨对融合蛋白稳定性起关键作用,经分子克隆改造后,IL3融合蛋白的稳定性得以显著提高,蛋白产量、靶向结合能力没有变化,这一发现有望广泛应用于相关蛋白产品中,有效提高IL3融合蛋白类药物的稳定性。
- 张砚君刘荣张梦楠苗庆芳甄永苏熊冬生张益芝
- 关键词：融合蛋白基因改造蛋白质谱急性髓系白血病
- 融合蛋白anti-CD19（Fab）-LDM对B细胞淋巴瘤的抑制作用被引量：1
- 2016年
- 目的：探讨融合蛋白anti-CD19（Fab）-LDM在体内对B细胞淋巴瘤生长的抑制作用。方法利用流式细胞检测技术分析anti-CD19（Fab）-LDP抗体与B型淋巴瘤细胞体外免疫结合活性，并分析其平衡解离常数。建立Balb/c裸鼠Raji细胞移植瘤模型，活体成像技术观察Cy5标记的anti-CD19（Fab）-LDP在裸鼠体内靶向定位作用。将融合蛋白anti-CD19（Fab）-LDM经尾静脉注射入Raji荷瘤裸鼠体内，观察其对肿瘤生长的抑制情况，计算抑瘤率，评价疗效。结果 anti-CD19（Fab）-LDP抗体与靶抗原的亲和活性与anti-CD19（Fab）抗体相当，两者的平衡解离常数分别为3.3＆#215;109M-1和4.3＆#215;109M-1。成功建立Raji淋巴瘤细胞皮下移植瘤模型，体内活体成像结果表明，融合蛋白anti-CD19（Fab）-LDP可靶向定位到肿瘤部位。融合蛋白anti-CD19（Fab）-LDM对裸鼠移植性CD19＋B细胞淋巴瘤的生长具有抑制作用，并且具有剂量依赖性。结论融合蛋白anti-CD19（Fab）-LDM，具有较强的特异抗肿瘤疗效，作为抗体靶向药物，在B系淋巴瘤治疗中具有很好的应用前景。
- 张晓龙杨圆圆杨雨琪卢杨赵英新姜琳琳熊冬生范冬梅
- 关键词：重组融合蛋白质类抗肿瘤药移植瘤模型
- 双病毒共感染的人脐带间充质干细胞多重靶向肝癌细胞的治疗体系的建立被引量：1
- 2016年
- 目的基于间充质干细胞(MSC)向肿瘤部位归巢的能力,利用E1A基因修饰的人脐带间充质干细胞(HUMSC)包装出携带人端粒酶逆转录启动子(hTERTp),以驱动抑癌基因的腺病毒,并感染HepG2肝癌细胞系。方法利用组织块贴壁法从脐带Wharton’s jelly(WJ)分离培养HUMSC。以pGL3-basic、pCDH1-MSC1-EF1-Ds Red、pAd-Track等载体为基础,用聚合酶链反应(PCR)、overlap PCR、酶切、连接等技术构建pGL3-hTERTp报告基因载体、pLentiR.E1A慢病毒表达载体、pAd-hTERTp腺病毒表达载体,经测序验证其正确性。利用双荧光素酶的方法鉴定hTERTp的特异性。利用实时定量PCR的方法分别检测MSC.pLentiR+pAd-Track(共转染腺病毒及对照慢病毒的MSC)和MSC.pLentiR.E1A+pAdTrack中不同时间点的病毒相对拷贝数,用电子显微镜观察HUMSC中病毒颗粒的产生。流式细胞术检测由双病毒共感染的HUMSC包装出的腺病毒对HepG2细胞系的感染效率。Transwell方法研究双病毒感染对HUMSC向HepG2细胞趋化的影响。结果成功从脐带WJ组织中分离培养HUMSC。成功构建载体pGL3-hTERTp、pLentiR.E1A、pAd-hTERTp。双荧光素酶方法证明hTERTp在不同肿瘤细胞中具有较高的转录活性,而在正常细胞中转录活性极低。Ad-Track及LentiR.E1A共同感染HUMSC后,随着腺病毒早期复制基因E1A逐渐表达,Ad-Track启动复制程序,最终将MSC裂解并释放具有感染能力的病毒颗粒,进一步感染HepG2细胞。感染双病毒的HUMSC与对照组一致在LentiR.E1A感染后32 h内可以穿过Transwell小室,向培养HepG2细胞的下室迁移。结论经过E1A修饰的HUMSC可包装出携带hTERTp肿瘤特异启动子的复制缺陷型腺病毒,并进一步感染肿瘤细胞的多重靶向治疗系统,为肿瘤的靶向基因治疗提供了新思路。
- 杨圆圆卢杨张晓龙张晴李真真张砚君
- 关键词：脐带间充质干细胞E1A
