广东省科技攻关计划(0700016)
- 作品数：5 被引量：6H指数：2
- 相关作者：李明松王媛媛陈学清王文敬黎诚耀更多>>
- 相关机构：南方医科大学南方医院南方医科大学广州医学院第一附属医院更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金广东省科技攻关计划国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 利用重叠PCR实现乙肝表面抗原CTL表位的替换
- 2009年
- 目的以磷酸酰肌醇蛋白聚糖-3蛋白(glypican-3,GPC3)的CTL表位EYILSLEEL替换HBsAg中内源性CTL表位LLD,构建用于预防和治疗乙肝的DNA疫苗。方法以重组表面抗原基因pcHBsAg质粒为模板,应用重叠延伸PCR扩增出含EYILSLEEL表位的HBsAg基因HBsAg/GPC3,将其插入pBSSK+载体中,构建出pBSSK/GPC3载体。利用DNA重组技术将其定向插入真核表达载体pcDNA3.1+中,将真核表达载体经PCR、酶切和测序鉴定,构建表达CTL表位EYILSLEEL的DNA疫苗。结果酶切和测序的结果显示序列无错配,获得了完整表达EYILSLEEL表位的真核质粒pcDNA3-HBsAg/GPC3。结论成功将EYILSLEEL表位替换HBsAg的内源性CTL表位,构建了pcDNA3-HBsAg/GPC3真核表达质粒。
- 王文敬黎诚耀李明松
- 关键词：重叠延伸PCR
- Ghrelin增强树突状细胞的免疫功能被引量：2
- 2009年
- 目的探讨Ghrelin能否调节树突状细胞(DC)的免疫功能。方法自人外周血单核细胞制备DC;以TNF-α诱导DC成熟,然后以Ghrelin刺激DC;检测经Ghrelin刺激后DC表面B7-H1的表达和细胞因子的表达,并进一步检测该DC诱导T淋巴细胞增值能力。结果Ghrelin下调TNF-α诱导的B7-H1的表达,并进一步增强其诱导T淋巴细胞增殖活性;抗B7-H1抗体能增强该DC诱导T淋巴细胞增值活性;特异性的PKC抑制剂能逆转Ghrelin对DC免疫功能的调节。结论Ghrelin通过抑制B7-H1表达增强DC的免疫功能,提示Ghrelin将可能在肿瘤和感染性疾病中发挥重要作用。
- 陈学清王媛媛刘思德李明松
- 关键词：GHRELIN树突状细胞B7-H1免疫功能
- 体外表达的Glypican-3的CTL表位肽诱导特异性免疫应答被引量：2
- 2009年
- 目的探讨体外表达的Glypican-3(GPC3)能否诱导出GPC3特异性的细胞免疫应答。方法体外表达GPC3的CTL表位肽GPC3298-306及GPC3144-152偶联血蓝蛋白(KLH)后免疫Balb/c小鼠,检测免疫后小鼠脾淋巴细胞免疫活性,包括IFN-γ的分泌,以及该淋巴细胞对表达GPC3的鼠肿瘤细胞细胞毒活性。结果经GPC3298-306及GPC3144-152免疫后,小鼠脾细胞中分泌IFN-γ的T淋巴细胞阳性率明显增高(P<0.01);脾淋巴细胞中CD4+T/CD8+T比值亦明显升高(P<0.05);脾淋巴细胞对表达GPC3的鼠肿瘤细胞有特异性的杀伤作用。结论体外表达的GPC3的CTL表位肽能诱导出GPC3特异性的细胞免疫,提示体外表达的GPC3的CTL表位肽GPC3298-306及GPC3144-152可能在在以GPC3为靶向的抗肿瘤免疫治疗中发挥重要作用。
- 王媛媛肖冰王文静徐伟文李明松
- 关键词：GLYPICAN-3细胞免疫免疫应答
- Bryostatin-1调节TNF-α激活的树突状细胞免疫功能被引量：2
- 2010年
- 目的探讨Bryostatin-1对树突状细胞(DC)免疫功能的调节作用。方法联合应用GM-CSF和IL-4自人外周血单核细胞定向分化DC;以Bryostatin-1刺激TNF-α诱导成熟的DC,收集DC及其上清夜,以FACS和ELISA方法分析DC表面免疫分子(CD80、CD83、CD86、HLA-DR和B7-H1)和细胞因子(IFN-γ、IL-1β、IL-10和IL-12)表达水平;自DC提取RNA,以Northern blot分析DC的B7-h1 mRNA表达水平;以DC为诱导细胞,进一步检测DC的免疫诱导功能。结果Bryostatin-1通过降低DC表面B7-H1表达和增强B7.2表达,以及调节DC细胞因子(IL-1b、IL-12和IFN-γ)分泌,增强DC的免疫诱导功能,PKC通道特异性的抑制剂BI明显逆转Bryostatin-1的上述作用。结论Bryostatin-1增强DC免疫功能,其机制可能是激活PKC通道。
- 陈学清王静石云李明松
- 关键词：树突状细胞免疫功能
- GPC-3 CTL表位表达载体构建
- 2009年
- 将重组的乙肝表面抗原(pcHBsAg)中多个CTL表位,用外源性的磷酸酰肌醇蛋白聚糖-3蛋白(GPC3)CTL表位序列替换,构建单拷贝和多拷贝DNA疫苗,获得不同位点的单拷贝或可同时表达多个CTL表位肽的真核表达质粒。以pcHBsAg质粒为模板,应用重叠延伸PCR扩增出含三个不同位点磷酸酰肌醇蛋白聚糖-3蛋白(GPC3)CTL表位EYILSLEEL(EYI)的HBsAg基因片段EYI1,及替换pcHBsAg中不同CTL表位的HBsAg基因片段EYI2、EYI3;分别将EYI1、EYI2、EYI3基因片段插入pBSSK+载体中,构建出含3拷贝EYI的pBSSK/EYI1、pBSSK/EYI2、pBSSK/EYI3载体。在此基础上,利用DNA重组技术将其分别定向插入真核表达载体pcDNA3.1+,构建表达EYI表位肽的DNA疫苗。真核表达载体经PCR、酶切和测序鉴定,结果显示:成功构建了pcDNA-EYI1/HBsAg、pcDNA-EYI2/HBsAg、pcDNA-EYI3/HBsAg真核表达质粒,为进一步测定以GPC3基因为基础的HBsAg多肽候选疫苗提供理论、实验依据。
- 王文敬黎诚耀李明松
- 关键词：表面抗原重叠延伸PCR
