国家重点基础研究发展计划(2010CB529405)
- 作品数：38 被引量：164H指数：7
- 相关作者：周清华于士柱孙翠云王虔安同岭更多>>
- 相关机构：天津医科大学总医院天津市肺癌转移与肿瘤微环境重点实验室四川大学华西医院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- miR-146b-5p对胶质瘤TJ905细胞生长的抑制作用及其机制探讨被引量：3
- 2012年
- 目的:在TJ905胶质母细胞瘤细胞系中观察miR-146b-5p对MMP16的调控作用及其对细胞侵袭、迁移、增殖和凋亡的影响。方法:分别用无义序列表达质粒(对照组)和miR-146b-5p表达质粒(P-miR-146b-5p组)转染TJ905细胞,用qRT-PCR和Western blot检测两组细胞miR-146b-5p的表达水平及MMP16 mRNA和蛋白的表达水平,用体外迁移侵袭实验及流式细胞术检测转染细胞迁移、侵袭、细胞周期分布和凋亡水平,并分析这些变化的相互关系。结果:与对照组相比,p-miR-146b-5p组MMP16 mRNA和蛋白表达量明显降低,二者间呈正相关且均与miR-146b-5p表达量呈负相关。p-miR-146b-5p组侵袭和迁移细胞数均明显低于对照组,并均与同组MMP16蛋白表达量呈正相关;而凋亡水平明显高于对照组,并与同组miR-146b-5p表达量呈正相关,但两组细胞周期时相分布无显著性差异。结论:miR-146b-5p是胶质瘤的抑瘤miRNA;补充外源性miR-146b-5p可促进胶质瘤细胞凋亡,并通过抑制靶基因MMP16表达阻止其侵袭迁移;提示miR-146b-5p在恶性胶质瘤基因治疗方面具有重要的潜在应用价值。
- 李艳艳于士柱王虔孙翠云孔妍玲王影安同岭温艳军徐金玲魏常娟王菲刘静孙静
- 关键词：胶质瘤微小RNA凋亡
- 胶质瘤miR-29c表达异常减少及其对肿瘤细胞增殖的影响被引量：7
- 2015年
- 目的：探讨microRNA-29c（miR-29c）在胶质瘤中的表达及其对细胞分裂周期蛋白42（CDC42）的调控作用和对细胞增殖的影响。方法：用锁定寡核苷酸原位杂交法和免疫组织化学法检测60例不同级别胶质瘤及10例非肿瘤对照脑组织中miR-29c和CDC42的表达水平，实时荧光定量RT-PCR、Western blot及MTS法分别检测U87MG细胞中miR-29c瞬时表达、CDC42 mRNA和蛋白表达及其对胶质瘤细胞增殖的影响。结果：各级别胶质瘤的miR-29c表达水平均明显低于非肿瘤对照脑组织，且随肿瘤级别升高而显著降低，各组间的差异均有统计学意义（P〈0.001）。而CDC42表达水平则呈相反趋势，其表达水平随胶质瘤良恶性级别增加相应升高，除Ⅰ～Ⅱ级组与非肿瘤对照组之间外，其余各组间的差异均有统计学意义（P〈0.001）。与对照组相比， miR-29c转染组的CDC42 mRNA（P〈0.001）和蛋白表达水平（P〈0.01）均明显降低。miR-29c转染组细胞的增殖能力明显低于U87MG空白对照组和Scr转染组（P〈0.05）。结论：miR-29c是胶质瘤的抑瘤miRNA，其表达水平可作为评价胶质瘤良恶性级别的重要参考指标。miR-29c在胶质瘤中表达减少解除了其对靶基因CDC42转录后水平的抑制作用，并导致肿瘤细胞无限增殖。表明miR-29c表达异常减少可能是引起胶质瘤发生、发展的关键事件。
- 石翠娟王影于士柱孙翠云王虔徐慧安同岭温艳军徐金玲刘静李慧凝
- 关键词：胶质瘤细胞增殖
- 应重视对胶质母细胞瘤少见亚型临床及病理学特征的认识被引量：6
- 2015年
- 随着对胶质母细胞瘤(glioblastoma，GB)异质性认识的不断深入，发现了一些GB的新亚型。在2007版WHO分类表中仅列出了多形性GB、巨细胞型GB和胶质肉瘤，在其正文中重点描述了这三种GB亚型的临床及病理学特征，并简要介绍了小细胞型GB及含少突胶质细胞瘤成分的GB。而对其他9种GB少见亚型未作明确介绍。本文结合文献报道及笔者自己的病例，对这些GB少见亚型的临床、病理、免疫表型及分子遗传学特征做简要介绍，供同道们参考。
- 于士柱
- 关键词：胶质母细胞瘤病理学特征新亚型少突胶质细胞瘤胶质肉瘤巨细胞型
- RNAi沉默AQP-4技术治疗胶质瘤性脑水肿的实验研究被引量：2
- 2012年
- 目的应用RNA干扰（RNAi）技术靶向沉默胶质瘤内水通道蛋白4（AQP-4）的表达，观察其对胶质瘤源性脑水肿的治疗效果。方法构建靶向AQP-4的siRNA质粒，免疫荧光化学方法检测其对C6细胞AQP-4的沉默效果；建立sD大鼠颅内c6胶质瘤模型，分对照组、空载组、无义序列组和siRNA组；聚合酶链式反应和蛋白印迹方法分别检测第3、6、9、12天AQP-4的mRNA和蛋白水平；干／湿比重法和Evans蓝测定法检测不同时相脑组织含水量和血脑屏障通透性改变；比较动物生存期。结果siRNA可沉默AQP-4表达；siRNA组脑组织水含量和血脑屏障通透性均明显低于对照组、空载组和无义序列组，动物生存期最长。结论靶向AQP-4的RNAi技术可在-定程度上减轻胶质瘤性脑水肿的发生和发展，为胶质瘤脑水肿提供了-种新的治疗策略选择。
- 梁冰刘晓智张赛苏治国陈镭姜忠敏于士柱刘振林
- 关键词：神经胶质瘤脑水肿水通道蛋白RNA干扰
- 肺腺癌吉非替尼获得性耐药相关microRNAs的筛选鉴定被引量：7
- 2011年
- 背景与目的肺腺癌吉非替尼获得性耐药严重影响了肺癌的治疗效果,microRNA在肺腺癌吉非替尼获得性耐药中的作用及其机制尚不清楚。本研究筛选与肺腺癌获得性吉非替尼耐药相关的microRNAs。方法以吉非替尼敏感肺癌细胞PC9与吉非替尼耐药肺癌细胞PC9/AB11为细胞模型,观察二者的形态学差异,流式细胞仪检测二者的细胞周期,计算它们的倍增时间,MTT法检测吉非替尼对两种细胞的IC50,应用microRNA芯片检测和筛选与吉非替尼耐药相关的microRNAs,并进行real-timePCR验证。结果 PC9细胞与PC9/AB11细胞形态差异明显,在细胞周期、倍增时间和吉非替尼对其的IC50上均具有统计学差异。microRNA芯片结果显示,与PC9相比,耐药肺癌细胞株PC9/AB11中有4个microRNAs表达水平明显上调,有9个microRNAs表达水平明显下调。经real-timePCR验证,microRNA-138在PC9/AB11中表达明显下调,与芯片结果一致。结论 PC9和PC9/AB11细胞株microRNA表达谱存在明显差异,初步筛选到了13个与肺腺癌吉非替尼耐药密切相关的microRNAs,为进一步深入研究microRNA在肺腺癌吉非替尼获得性耐药中的作用及其分子机制提供了实验依据和理论基础。
- 秦学博刘彬李洋尤嘉琮周清华
- 关键词：肺肿瘤MICRORNA吉非替尼获得性耐药
- 人大细胞肺癌干细胞样细胞的富集及其功能研究被引量：10
- 2011年
- 背景与目的目前国内外还没有确切的、得到公认的肺癌干细胞的筛选标记分子、指标和方法,常用方法为通过流式细胞技术,借鉴其他肿瘤干细胞分选标记来分选肺癌干细胞,但其筛选特异性低、工作量巨大。本研究采用无血清悬浮培养法富集肺癌干细胞,对肺癌干细胞的筛选方法进行探索。方法采用添加生长因子的无血清培养基对人大细胞肺癌细胞株L9981进行悬浮培养,获得肺癌细胞球体。对含血清培养贴壁L9981细胞和无血清培养成球后的L9981细胞,通过显微镜下观察比较二者的生物学形态,应用Vi-cell细胞活力分析仪计数细胞并绘制生长曲线比较二者的增殖能力,通过Transwell实验研究它们的侵袭能力差异,并通过接种裸鼠观察二者在体内的成瘤性来研究肺癌细胞球体的生物学功能。结果与血清贴壁培养L9981细胞相比,无血清培养L9981细胞成球形生长,贴壁L9981和L9981球体细胞的倍增时间分别为(56.05±1.95)h和(33.00±1.44)h,球体细胞的侵袭和成瘤能力分别为贴壁L9981细胞的5倍和20倍。结论通过无血清悬浮培养的L9981细胞可以形成肺癌球体细胞群,L9981球体细胞的侵袭和成瘤能力均明显高于贴壁L9981细胞,显示L9981球体细胞中富集了肺癌干细胞样的细胞。无血清悬浮培养肺癌球体细胞可作为富集肺癌干细胞样细胞的一种候选方法。
- 月文科焦锋刘彬尤嘉琮周清华
- 关键词：肺肿瘤肺癌干细胞
- 不同级别人胶质瘤组织中miR-10b表达变化的研究被引量：1
- 2011年
- 背景与目的:人miR-10b编码基因位于染色体2q31HOXD8基因之间,有研究显示其特异性地高表达于多种肿瘤中,并与肿瘤的侵袭、迁移和远距离转移有关。本研究对不同级别胶质瘤组织及非肿瘤对照脑组织中miR-10b的表达水平进行检测和比较。方法:采用组织微阵列及锁定寡核苷酸原位杂交技术检测56例不同级别胶质瘤及10例非肿瘤对照脑组织中miR-10b的表达水平。结果:对照脑组织及WHOⅠ~Ⅱ级、Ⅲ级及Ⅳ级胶质瘤组织中miR-10b阳性标记指数(LI%)分别为36.87±20.63、18.86±14.04、12.13±11.56及4.93±6.45,4组间差异均有显著性(P<0.05~0.001),miR-10b LI%与肿瘤的良恶性分级呈显著负相关(rs=-0.61,P<0.001)。结论:miR-10b的表达水平与胶质瘤病理分级呈负相关。
- 孔妍玲于士柱孙翠云王虔李艳艳张景敏安同岭温艳军
- 关键词：胶质瘤微小RNA迁移
- 不同转移潜能人大细胞肺癌细胞株转移相关microRNAs的筛选研究被引量：2
- 2011年
- 背景与目的微小RNA(microRNAs,miRNAs)参与调节肿瘤发生发展的多个过程,包括细胞的分裂增殖、细胞周期、凋亡、血管形成、侵袭和转移等。本研究应用miRNA芯片检测具有高低不同转移潜能人大细胞肺癌细胞株L9981和NL9980的miRNA表达谱,从中筛选出与大细胞肺癌转移相关的miRNAs。方法收集L9981和NL9980细胞,抽提总RNA进行CY3标记,将标记RNA在miRNA芯片上进行杂交反应。通过数据统计分析,筛选出表达明显差异的miRNAs。应用Real-timePCR验证芯片结果,并应用生物信息学方法预测靶基因。结果在不同转移潜能人大细胞肺癌L9981和NL9980细胞株中共筛选到22个表达明显差异的miRNAs。与NL9980相比,在L9981中有13个miRNAs表达上调,9个表达下调。Real-timePCR验证miR-125a-3p在细胞中的表达水平与芯片结果趋势一致,预测其靶基因可能为胰岛素样生长因子2。结论筛选得到与大细胞肺癌转移相关的miRNA表达谱。
- 鲁为山李书军刘彬李洋罗猛孙丽亚尤嘉琮周清华
- 关键词：肺肿瘤细胞系微小RNA
- 上皮间质转化与肿瘤耐药被引量：5
- 2013年
- 肿瘤药物治疗过程中常常要面临肿瘤细胞耐药的问题。上皮间质转化(epithelial-mesenchymaltransition,EMT)在肿瘤耐药方面的作用为解决该问题提供了可能。该文围绕EMT基本特征、EMT与肿瘤耐药的关系、EMT在肿瘤耐药过程中机制的研究进展进行详细综述。
- 张琳琳吴志浩周清华
- 关键词：上皮间质转化肿瘤耐药
- 反义封闭hTERT基因对人TJ905胶质瘤细胞端粒长度及p33ING1b表达的影响
- 2010年
- 目的 探讨反义封闭胶质瘤细胞端粒酶逆转录酶（hTERT）基因表达,对其端粒长度及p33ING1b表达的影响.方法 用真核表达质粒（pcDNA3.0）构建hTERT正义和反义RNA表达载体.经脂质体介导,将空载体peDNA3.0及正义和反义RNA表达载体分别导人人胶质母细胞瘤细胞株（TJ905细胞）,经G418筛选获得分别携带空载体、hTERT正义或反义RNA表达载体的三种TJ905细胞亚克隆.用Western blot、Tolo TAGGG端粒长度分析和RT-PCR方法,检测各对照组和反义封闭组不同代数TJ905细胞的hTERT蛋白表达、端粒长度及p33ING1b mRNA转录.结果 空白对照组、空载体组及正义RNA组TJ905细胞均有hTERT蛋白异常表达、端粒缩短迟缓及p33ING1b mRNA表达异常减少,以上三个对照组间这些指标的差异均无统计学意义（P〉0.05）.与以上三组相比,反义封闭组TJ905细胞的hTERT蛋白表达水平明显降低（P〈0.01）,端粒长度明显缩短（P〈0.01）,而p33ING1b mRNA表达水平则明显升高（P〈0.01）,它们各自与三个对照组相同指标之间的差异均有统计学意义.结论 胶质瘤细胞hTERT过表达导致的端粒酶异常再活化,可通过维持有效端粒长度抑制其抑癌因子p33ING1b表达,反义封闭hTERT基因表达可矫正该异常过程,提示hTERT是胶质瘤分子靶向治疗的重要靶点.
- 赵林珊于士柱孙翠云王虔安同岭
- 关键词：神经胶质瘤人端粒酶逆转录酶端粒ING1
