中国水产科学研究院科研基金(2003-4-4)
- 作品数：2 被引量：23H指数：2
- 相关作者：刘问钱冬于涟潘晓艺曹铮更多>>
- 相关机构：浙江省淡水水产研究所浙江大学更多>>
- 发文基金：浙江省自然科学基金中国水产科学研究院科研基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 罗氏沼虾诺达病毒TAS-ELISA检测法的建立及应用研究被引量：18
- 2006年
- 罗氏沼虾肌肉白浊病(Whitish muscle diseases ofMacrobrachium rosenbergii)是近年来流行于罗氏沼虾苗种阶段的严重疾病,该病病原已确定为罗氏沼虾诺达病毒(Macrobrachium rosenbergiiNodavirus,MrNV).作者在病毒超离提纯的基础上,制备了罗氏沼虾诺达病毒兔抗血清,并应用抗罗氏沼虾诺达病毒单克隆抗体2B5,建立了三抗体夹心酶联免疫检测方法(TAS-ELISA).TAS-ELISA最适反应条件为:兔抗体以1μg/mL包板,小鼠单抗2B5的工作浓度为1∶50000,该法检测MrNV的灵敏度达0.98 ng,对WSSV、TSV及其他细菌感染死亡的罗氏沼虾苗没有非特异性反应.通过对2000—2002年病虾及疑似病虾的病毒检测,表明TAS-ELISA法比间接ELISA法和核酸电泳法有更高的阳性检出率和符合率;此外还摸索了降低孵育温度和缩短孵育时间对病毒检测的影响,表明各步孵育温度和时间分别为25℃和20 min对于白浊症状的病苗检测无明显影响,使得本法更加适合于生产实践.
- 钱冬刘问潘晓艺曹铮于涟
- 关键词：TAS-ELISA
- 罗氏沼虾诺达病毒单克隆抗体的制备及应用被引量：10
- 2005年
- 罗氏沼虾肌肉白浊病(whitish muscle disease of Macrobrachium rosenbergii)是一种发生在罗氏沼虾苗种阶段的流行病,发病虾苗出现肌肉白浊、白斑或白尾症状,死亡率高达60%以上。作者所在实验室在确定其病原是罗氏沼虾诺达病毒(Macrobrachium rosenbergii Nodavirus,MrNV)的基础上,用MrNV免疫BALB/c小鼠,取小鼠脾细胞与SP2/0鼠骨髓瘤细胞融合,用间接ELISA筛选阳性孔,经有限稀释法克隆,得到12株能特异分泌抗MrNV的单克隆抗体(Mab)的杂交瘤细胞。注射小鼠,制备腹水单克隆抗体,ELISA效价为1∶105～106。亚型鉴定结果表明,有6株单抗为IgG1型,4株单抗为IgG2a型,2株单抗为IgG2b型。12株单抗与对虾白斑综合征病毒(WSSV)和桃拉综合征病毒(TSV)均无交叉反应。挑选效价高的腹水单抗2B5,建立了检测罗氏沼虾诺达病毒的三抗体夹心酶联免疫吸附测定(TAS-ELISA)法,该方法检测灵敏度达0.98ng左右。Wesrternblot分析表明,2B5能与MrNV43kD的外膜蛋白特异性结合。
- 刘问钱冬吴建翔邵健忠
- 关键词：罗氏沼虾肌肉白浊病单克隆抗体
