国家高技术研究发展计划(Z20-01-02)
- 作品数：8 被引量：20H指数：3
- 相关作者：林晨陈洁平张雪艳陈龙吴旻更多>>
- 相关机构：中国医学科学院北京协和医学院第三军医大学西南医院北京军区总医院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Ad-p53与Ad-p16联合对人肺腺癌GLC-82细胞作用的研究被引量：3
- 2000年
- 目的：探讨腺病毒介导的ｐ５３与ｐ１６基因联合对人肺腺癌ＧＬＣ－８２疗效提高的可能性。方法：将分别携有ｐ５３基因、ｐ１６基因重组腺病毒（Ａｄ－ｐ５３与 Ａｄ－ｐ１６）联合使用，通过细胞生长和存活实验、克隆形成实验、流式细胞分析、ＴＵＮＥＬ检测、ＲＴ－ＰＣＲ分析、免疫组织化学实验，观察其对人肺腺癌ＧＬＣ－８２细胞的作用。结果：在总感染强度相同的前提下，Ａｄ－ｐ５３与Ａｄ－ｐ１６联合导入ＧＬＣ－８２细胞，对细胞生长存活及克隆形成能力的抑制、以及所造成的凋亡效果比施用单种基因的效果强，表明ｐ５３基因与ｐ１６基因在体外疗效上互为协同。结论：Ａｄ－ｐ５３与Ａｄ－ｐ１６联合，可以提高对人肺腺癌ＧＬＣ－８２细胞的疗效。
- 徐敏毅林晨梁萧付明张雪艳吴旻
- 关键词：基因治疗肺腺癌AD-P53GLC-82细胞
- 维甲酸诱导基因RA538诱导人胃癌细胞系凋亡及其分子机制的研究被引量：3
- 2000年
- 目的 研究全反式维甲酸 (retinoicacid ,RA)RA5 38诱导胃癌细胞的凋亡作用及其分子机制。方法 采用MTT、DNA梯度降解试验、原位末端标记、RT PCR、Westernblot等方法 ,对RA5 38重组腺病毒 (Ad)在人胃癌细胞系中生物学作用及其分子机制进行体内外研究。结果 Ad RA5 38对SGC790 1细胞能产生明显的生长抑制效应 ,诱导SGC790 1细胞凋亡。Ad RA5 38生长抑制率为 76 3%。Ad RA5 38对SGC790 1细胞产生的抑瘤效应及诱导凋亡作用是c myc、bcl 2、bax、cyclinD1等一系列基因表达变化及其相互作用的结果 ,其中对c myc及bax表达的调节作用是在RNA和蛋白水平。而对p5 3、p16、TGase、ras基因的表达没有明显影响。经Ad RA5 38处理的SGC790 1细胞致瘤性消失。Ad RA5 38对裸鼠皮下移植瘤模型瘤内注射能有效降低肿瘤的生长速度 ,生长抑制率为 6 0 7%。结论 Ad RA5 38对胃癌细胞具有显著的生长抑制及凋亡诱导作用。其作用可能与抑制c myc、bcl 2、cyclinD1基因及刺激bax基因表达的机制相关。与p5 3、p16、TGase及ras基因的表达无明显关系。
- 陈洁平林晨徐采朴邓友平张雪艳付明程金科吴旻
- 关键词：腺病毒维甲酸胃癌
- 多聚阳离子对重组腺病毒载体体外转染血液肿瘤细胞效率的影响被引量：4
- 2005年
- 目的:检测多聚阳离子复合物(Polycation)对腺病毒载体转染血液肿瘤细胞效率的影响。方法:重组LacZ腺病毒(Ad-LacZ)联合Polycation分别转染HL-60、K562、Jurkat及Raji细胞,观察阳性细胞百分率。结果:Ad-LacZ单独转染肿瘤细胞时转染率较低。联合Polycation共同转染可明显提高腺病毒载体的转染率。结论:多聚阳离子复合物可做为提高Ad-LacZ转染HL-60、K562、Jurkat及Raji细胞的辅助工具。
- 陈龙陈洁平林晨张芳
- 关键词：基因治疗转染效率
- 重组腺病毒介导反义c-myc诱导HL-60细胞粒系分化的作用被引量：2
- 2006年
- 目的:研究重组反义c-myc腺病毒(Ad-AS-c-myc)诱导人急性早幼粒HL-60细胞系粒系分化及作用分子机制。方法:采用重组腺病毒Lac-Z(Ad-LacZ)及Ad-AS-c-myc联合硫酸鱼精蛋白转染HL-60细胞,X-gal染色判断转染效率。采用形态学、RT-PCR、流式细胞仪、四唑氮蓝(NBT)还原试验、非特异酯酶染色等方法进行研究。结果:Ad-AS-c-myc能抑制HL-60细胞c-myc基因在转录水平的表达。被转染HL-60细胞在形态上趋向成熟粒细胞,Ad-AS-c-myc使HL-60细胞周期G0/G1阻滞,过氧化物酶、非特异性酯酶活性增强。结论:Ad-AS-c-myc对HL-60细胞具有诱导粒系分化作用。其生物学作用与HL-60细胞c-myc的表达受抑、HL-60细胞出现一些成熟粒细胞的生理功能有关。
- 陈龙陈洁平林晨
- 关键词：重组腺病毒C-MYC基因分化HL-60细胞
- 经犬肝动/静脉输入反义c-myc重组腺病毒的安全性研究被引量：6
- 2004年
- 目的:经Beagle犬肝脏血管注射重组腺病毒介导反义c—myc基因(Ad-ASmye)载体,观测其体内分布及毒副作用,以评价Ad-ASmye治疗肝癌的临床前期安全性。方法:选择4只体重8-10 kg健康Beagle犬,全麻后开腹,经肝动脉或门静脉注射Ad-ASmyc,注射Ad-ASmye前及注射后第3,7,14,21天取肝组织及抽取静脉血化验,PCR检测Ad-ASmyc在各器官组织中的分布,常规切片观察各器官病理变化,ELISA方法检测血中抗腺病毒抗体的产生。结果:经Beagle犬肝脏血管注射后,Ad-ASmyc可持续转导正常肝细胞达3周,实验犬一般情况好,血、肝、肾功能无明显异常,在肝脏、脾脏、肾脏、胃、心脏、皮肤中可检测到重组腺病毒的分布,镜下可见Ad-ASmyc剂量依赖性的肝组织轻微的炎症反应,注射后7 d血中有抗腺病毒载体的抗体产生,14 d达高峰,21 d开始下降。结论:经Beagle犬肝动脉或门静脉途径注射Ad—ASmyc均可转导至肝细胞,Ad-AS-myc对实验犬的毒副作用较轻。
- 余昌中林晨张海增查圆圆梁萧付明张雪艳吴旻
- 关键词：腺病毒载体基因治疗安全性
- 腺病毒介导RA538基因转移及其对肿瘤的抑制作用
- 1999年
- 目的:RA538是从维甲酸诱导终末分化的人食管癌细胞系中分离出的一个与分化相关的基因,本研究探讨了其抗癌作用.方法:利用腺病毒介导基因转移观察对肿瘤细胞的抑制效应.结果:通过重组体腺病毒将RA538基因转导到人肺腺癌细胞系(GLC-82)和人结肠癌细胞系(HCY)中,获得较高的转导效率,显示出较明显的抑制肿瘤生长作用,抑制率分别为77.2%和77.9%,并能降低两细胞系体内肿瘤形成能力.流式细胞计数、DNA片段化分析及TUNEL检测证实RA538可诱导肿瘤细胞发生凋亡.Westem blot分析表明,RA538具有明显下调c-myc基因表达的作用,结论:研究结果提示,RA538是一个较广谱的抑癌基因,可以作为肿瘤基因治疗的一个新目的基因,具有良好的应用前景.
- 邢嵘林晨牟巨伟程金科张雪艳付明吴旻
- 关键词：RA538腺病毒载体肿瘤基因治疗细胞凋亡
- 腺病毒介导的RA538基因转移及其对人结肠癌细胞HCT的抑瘤作用
- 2000年
- 目的 进一步研究ＲＡ５３８ 对人结肠癌细胞系的生物学效应，选用介导ＲＡ５３８ 重组体腺病毒，观察其对人结肠癌细胞系ＨＣＴ 的作用。方法 通过重组体腺病毒将ＲＡ５３８ 基因转导到人结肠癌细胞系ＨＣＴ 中，观察转染ＲＡ５３８ 基因后的肿瘤细胞生长情况。经流式细胞仪、ＤＮＡ 片段化分析及ＴＵＮＥＬ 检测分析抑瘤机制。结果 由重组体腺病毒ＡｄＲＡ５３８ 介导基因ＲＡ５３８ 转导在ＨＣＴ 获得较高的转导效率， ＭＯＩ 为１００ 时可使８０ ％ 细胞转染，并显示对肿瘤细胞生长有明显的抑制作用，抑制率为７４ ％ 。裸鼠皮下注射ＲＡ５３８ 处理的ＨＣＴ 细胞肿瘤形成能力为２０ ％ 。ＤＮＡ 片段化分析、ＴＵＮＥＬ 和流式细胞仪检测，结果证明ＲＡ５３８诱导肿瘤细胞发生凋亡。Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 分析表明，ＲＡ５３８ 具有明显下调ｃｍ ｙｃ 基因表达的作用。结论 ＲＡ５３８ 对人结肠肿瘤细胞有抑制生长和诱导凋亡的作用，可以作为结肠肿瘤基因治疗的１ 种新的治疗基因。
- 邢嵘林晨程金科牟巨伟张雪艳付明吴日
- 关键词：腺病毒载体结肠癌
- 抑制c-myc基因表达对HL-60细胞表面分化抗原CD13、CD33的影响被引量：3
- 2011年
- 目的:利用重组反义c-myc腺病毒载体(Ad-AS-c-myc)抑制HL-60细胞c-myc基因表达,检测细胞表面分化抗原CD13、CD33变化,了解抑制HL-60细胞c-myc表达,对细胞分化及分化抗原的影响。方法:重组Ad-AS-c-myc病毒按感染强度(MOI)为100的转染剂量,转染HL-60细胞。RT-PCR检测c-myc表达。流式细胞仪检测CD13、CD33阳性细胞率。同时对转染细胞行Wright's染色,观察细胞形态变化。结果:Ad-AS-c-myc转染HL-60细胞后,c-myc基因表达降低,CD13阳性细胞率升高,CD33阳性细胞率降低。结论:抑制c-myc基因表达,使HL-60细胞CD13表达增强,CD33表达降低。细胞形态向成熟粒细胞方向分化。
- 陈龙王湘辉陈洁平
- 关键词：CD13CD33C-MYC基因分化
