温州市科技计划项目(Y20090044)
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 相关作者：吴丽萍方潇碧黄振校廖志苏张春鸿更多>>
- 相关机构：温州医学院附属第一医院更多>>
- 发文基金：温州市鹿城区科技计划项目温州市科技计划项目浙江省科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Hsa-miR-15a/16-1靶向抑制Bcl-2基因对鼻咽癌CNE-2细胞的抑制作用被引量：2
- 2011年
- 目的观察Hsa-miR-15a/16-1靶向抑制B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(B-cell lymphoma gene 2,Bcl-2gene)表达对鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)CNE-2细胞的生长抑制作用。方法将构建成功的重组质粒pENTR-CMV-EGFP-hsa-mir-15a/16-1经Lipofectamine 2000转染CNE-2细胞,RT-qPCR检测miR-15a/16-1、Bcl-2 mRNA表达水平,流式细胞术和WesternBlot检测Bcl-2、caspase-3蛋白表达水平,CCK-8法分析细胞生长抑制情况,4,6-二脒基-2-苯基吲哚(4,6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)染色观察细胞凋亡状况。结果转染后miR-15a表达增高(F=547.525,P均<0.001);miR-16-1表达增高(F=99.979,P均<0.001);Bcl-2 mRNA表达无明显差别(F=0.220,P>0.05);Bcl-2蛋白表达下调,caspase-3蛋白表达增高;细胞在体外凋亡明显;细胞增殖受到抑制,作用呈明显的时效关系。结论 Hsa-miR-15a/16-1对Bcl-2基因的靶向抑制,可体外对CNE-2细胞产生增殖抑制和促进凋亡作用。
- 张春鸿方潇碧林森黄亚施清圆吴丽萍黄振校蒋磊谭映霞廖志苏
- 关键词：鼻咽肿瘤转染流式细胞术
- 重组质粒pENTR-CMV-EGFP-hsa-mir-16-1/15a的构建与表达
- 2011年
- 目的:构建针对人鼻咽癌CNE-2Z细胞Bcl-2基因pENTR-CMV-EGFP-hsa-mir-16-1/15a真核表达质粒,转染至CNE-2Z细胞并检测其表达。方法:采用PCR法从重组质粒PGH-16-1/15a中获得16-1/15a-X2370G全长序列,在T4DNALigase连接酶作用下连接入重组载体pENTR-CMV-EGFP。重组质粒经酶切及测序鉴定。将构建成功的重组质粒转染入人鼻咽癌细胞株CNE-2Z,用荧光显微镜观察转染结果。结果:重组质粒pENTR-CMV-EGFP-hsa-mir-16-1/15a经酶切与测序证实构建成功,转染至鼻咽癌CNE-2Z细胞后,荧光显微镜观察证实该重组质粒能在CNE-2Z中表达。结论:成功构建真核表达质粒pENTR-CMV-EGFP-hsa-mir-16-1/15a,并在鼻咽癌CNE-2Z细胞中得到表达,可用于进一步检测其抗肿瘤机制。
- 方潇碧张春鸿黄亚林森黄振校吴丽萍施清圆李文峰廖志苏
- 关键词：质粒CNE-2Z
