国家自然科学基金(30771991)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
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- ANXA1的克隆,表达及对树突状细胞转染的方法
- 2009年
- 膜联蛋白1(ANXA1)是一种抗炎因子,但是ANXA1对单核细胞来源树突状细胞(monocyte-de-rived dendritic cells,MoDCs)功能成熟的影响还未见报道。首先以pShuttle-CMV为载体,通过一系列分子克隆技术,构建了ANXA1高表达质粒pShuttle-CMV-ANXA1。笔者将pShuttle-CMV-ANXA1转染细胞株293a,用western-blot法验证ANXA1高表达情况。结果表明,pShuttle-CMV-ANXA1可引起293a表达ANXA1增高;表明,pShuttle-CMV-ANXA1构建是成功的。然后,用脂质体转染试剂GenePorterⅡ将荧光对照质粒pShuttle-CMV-VNG-IRES转染TNF--αMoDCs。通过镜下荧光可知,GenePorterⅡ将对照质粒转染MoDCs的效率>80%;表明,GenePorterⅡ是一种较好的转染MoDCs的方法。用GenePorterⅡ将pShuttle-CMV及pShuttle-CMV-ANXA1转染TNF--αMoDCs,通过western-blot法检测ANXA1在TNF--αMoDCs中的高表达情况。结果表明,与pShuttle-CMV相比,pShuttle-CMV-ANXA1可引起TNF--αMoDCs高表达ANXA1;成功将pShut-tle-CMV-ANXA1转入MoDCs,并得到表达。GenePorterⅡ转染树突状细胞的新方法,简单高效,为进一步研究ANXA1对MoDCs的生物学功能奠定了基础。获得的高表达ANXA1的树突状细胞,可望在自身免疫病及移植排斥反应中得到应用。
- 闵彦田野苹
- 关键词：分子克隆转染树突状细胞
- ANXA1高表达对树突状细胞功能成熟的影响被引量：1
- 2009年
- 为了研究抗炎因子膜联蛋白1(ANXA1)高表达对单核细胞来源树突状细胞(MoDCs)功能成熟的影响,我们将构建的ANXA1高表达质粒(pShuttle-CMV-ANXA1)转染到TNF-α诱导成熟的MoDCs(TNF-α-MoDCs)中,用流式细胞术检测高表达ANXA1对MoDCs表面分子的影响,用ELISA法检测高表达ANXA1对MoDCs分泌细胞因子的影响。与对照质粒相比,ANXA1高表达质粒可引起TNF-α-MoDCs表达HLA-DR上调,分泌IL-12p40上调,吞噬能力及IL-10下调。ANXA1高表达质粒可以引起TNF-α-MoDCs进一步成熟,ANXA1可能在树突状细胞功能成熟过程中起着独特的作用。
- 闵彦田野苹
- 关键词：树突状细胞
