国家自然科学基金(30771994)
- 作品数：21 被引量：32H指数：4
- 相关作者：周建华赵立平姜成刚林跃智吕晓玲更多>>
- 相关机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所东北农业大学东北林业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金哈尔滨市科技攻关计划项目黑龙江省发展高新技术产业专项资金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 马传染性贫血病毒白细胞弱毒疫苗株及其亲本毒驴强毒株前病毒基因组比较分析被引量：7
- 2008年
- 为阐明马传染性贫血白细胞弱毒疫苗株(EIAVDLV)的致弱和免疫保护机理,对EIAVDLV121及其亲本驴强毒株(EIAVDV117)前病毒全基因组序列进行了测定,并结合准种理论,分析了EIAV疫苗致弱过程中基因组进化特点。利用LA-PCR技术对EIAVDV117和EIAVDLV121的前病毒基因组分两段进行扩增,分别获得4个和10个前病毒全基因组序列。EIAVDV117前病毒基因组平均为8236bp,G+C含量38.0。EIAVDLV121前病毒基因组平均8249bp,G+C含量37.3。两者的前病毒基因组平均差异率为2.8。其中S2、LTR和env基因差异较大,分别为4.1、3.9和3.1。此外,S2、S3和env推导的氨基酸的差异明显,分别为10.4、5.6和4.8(gp90为6.8)。EIAVDLV121各基因的异质性均显著高于EIAVDV117。研究发现体外培养的EIAVDLV121至少有5种类型的LTR混合存在。在gp90推导的氨基酸序列上,EIAVDV117比EIAVDLV121平均多2个N-糖基化位点,总数为19,其中3个为EIAVDV117特有。EIAVDLV121有1个疫苗株特有N-糖基化位点。研究结果为进一步探讨马传染性贫血弱毒疫苗生物学特性提供信息。
- 王雪峰姜成刚郭巍项伟吕晓玲赵立平王凤龙孔宪刚张晓燕邵一鸣周建华
- 关键词：马传染性贫血病毒弱毒疫苗株准种
- 流式细胞术在免疫学上的应用及其发展前景被引量：9
- 2009年
- 近些年来流式细胞术(FCM)发展迅速,除了用于科学研究以外,FCM己广泛用于基础医学及临床医学的相关领域之中。文章阐述了FCM组成及作用机理并与其他免疫检测方法进行比较,着重介绍了FCM在免疫学中的应用,并展示了FCM在免疫学上应用的广阔前景。
- 邓喜林林跃智李蕊刘皙洁
- 关键词：FCM免疫学
- 中国株马传染性贫血病病毒S2基因的原核表达及其多克隆抗体制备被引量：1
- 2009年
- 本实验为表达马传染性贫血病病毒(EIAV)S2蛋白和制备其抗血清,以EIAV感染性分子克隆pFDDV3-8为模板扩增S2基因,将其克隆于pMD18-T载体中,测序验证后,将S2基因亚克隆于pET-30a表达载体,构建S2基因的重组表达质粒(pET-EIAV-S2),并转化DH5α受体菌。以终浓度为0.6mmol/L的IPTG诱导,表达的重组蛋白约20ku。Westernblot分析表明,该蛋白可与EIAV的阳性血清反应,具有免疫原性。该重组蛋白通过镍离子亲和层析进行纯化后,免疫新西兰兔。ELISA及westernblot分析表明,制备的兔多克隆抗体与EIAV的S2蛋白发生特异性反应。EIAVS2蛋白的重组表达及其抗体的制备为进一步研究S2辅助蛋白在EIAV复制与致病中的作用,以及S2基因反向遗传研究奠定了基础。
- 高华高旭姜成刚赵立平马学恩周建华
- 关键词：马传染性贫血病毒S2基因原核表达多克隆抗体
- 跨膜蛋白截短突变对马传染性贫血弱毒疫苗株体内复制特性和免疫诱导能力的影响
- 本实验室前期研究发现马传染性贫血病毒(EIAV)疫苗株EIAV的跨膜蛋白gp45在马体内发生高频率W261位点翻译终止突变,使该蛋白C末端出现154个氨基酸的截短。为探讨该突变对病毒特性和机体免疫应答的影响,本研究构建了...
- 姜成刚高旭马建林跃智赵立平吕晓玲周建华
- 关键词：马传染性贫血病毒跨膜蛋白
- 文献传递
- 马属动物cyclinT1基因的扩增与真核表达载体的构建
- 2009年
- 在慢病毒复制过程中cyclinT1(CycT1)是重要的辅助因子。为了揭示慢病毒的复制机理,试验使用RT-PCR方法扩增马和驴的cyclinT1基因,并进行克隆和序列分析,然后用DNASTAR(MegAlign)软件将测得的序列和国外发表的马属动物CycT1序列(GenBank中登录号为AF137509和AF190905)进行同源性比较。结果表明:马属动物CycT1大小为2184bp,编码727个氨基酸;4种CycT1基因氨基酸同源性在98%以上;将扩增出的马CycT1基因克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)中,经酶切及测序鉴定证实成功构建了pcDNA3.1(+)/eCycT1重组质粒。
- 史楠赵立平吕晓玲马建周建华
- 关键词：克隆真核表达载体
- EIAV弱毒疫苗株和强毒株诱导的特异性体液免疫应答差别被引量：2
- 2009年
- 目的:通过研究EIAV弱毒疫苗株和强毒株在诱导多种特异性抗体方面的差异,初步探讨特异性体液免疫应答在EIAV弱毒疫苗株保护性免疫中的作用。方法:试验马匹根据接种毒株分为疫苗组和强毒隐性感染组,应用ELISA方法对血清中病毒囊膜蛋白Env和衣壳蛋白P26结合抗体的滴度、亲和力及Env结合抗体的构象依赖性进行动态实相检测,同时采用细胞蚀斑染色和逆转录酶活性检测方法对中和抗体水平进行同期检测。结果:Env和P26结合抗体的滴度、亲和力、构象依赖性及中和抗体的中和活性均存在一个缓慢上升的过程。对于P26抗体滴度及Env抗体亲和力,疫苗组和强毒隐性感染组仅在病毒接种2个月内,表现为统计学差异(P<0.05)。疫苗组从接种后14d开始,Env抗体的构象依赖性高于强毒隐性感染组(P<0.05),并持续至最后一个监测点。最明显的是,疫苗组诱导产生具有中和强毒特性毒株(EIAVDLV34)和弱毒特性毒株(EIAVFDDV)活性的中和抗体均高于强毒隐性感染组(P<0.05)。结论:弱毒疫苗株和强毒株诱导机体产生结合抗体和中和抗体的时间、水平和性质均存在明显差异,其中中和抗体和构象依赖性抗体的差异,可能是EIAV弱毒疫苗诱导保护性免疫的主要因素之一。
- 朱振营林跃智王宇宏赵立平朱远茂周建华
- 关键词：马传染性贫血病毒弱毒疫苗株抗体亲和力中和抗体
- 慢病毒跨膜蛋白的研究进展被引量：1
- 2009年
- 姜成刚周建华华育平刘娣
- 关键词：慢病毒跨膜蛋白囊膜蛋白抗原变异基因变异氨基酸序列
- 中国马传染性贫血病毒DLV株前病毒gp90基因在马体内的变异分析
- 2008年
- 分别以EIAV辽宁马强毒株(EIAVliao)前病毒DNA和马传染性贫血驴白细胞弱毒疫苗株(EIAVDLV)前病毒DNA为模板,从免疫接种后不同时期马血清中利用nested-PCR技术,扩增了约1.4kb的gp90基因。将其克隆后进行了测序,测序结果表明,免疫EIAVDLV后的第1时期至第5时期,与EIAV-liao比较核苷酸序列平均差异率分别为3.2956%、3.1456%、3.36%、3.1856%和3.6456%。EIAVliao有20个N-连接糖基化位点,EIAVDLV平均是17.2个,其中有11个N-连接糖基化位点是高度保守的。
- 杨彬王雪峰周建华王凤龙
- 关键词：GP90基因突变
- 中国株EIAV S2基因逆向突变感染性克隆的构建及体外感染性评价被引量：3
- 2009年
- 以中国株EIAV的驴强毒株EIAVDV115与疫苗株EIAVFDDV15的S2基因变化规律为依据,利用反向遗传技术对EIAV弱毒疫苗株全基因组感染性克隆pFDDV3-8的S2基因区进行逆向突变,构建了含有强毒株EIAVDV115S2基因区内4个稳定点突变的克隆质粒pFDDVS2r1-3-4-5,将该质粒转染FDD后进行体外继代盲传,经RT-PCR、逆转录酶活性、间接免疫荧光等检测后,显示经EIAV克隆质粒pFDDVS2r1-3-4-5转染的FDD盲传3代后,可在转染的FDD细胞培养物的上清液中检测到EIAV逆转录酶活性;该细胞培养物经RT-PCR和间接免疫荧光检测均呈EIAV阳性;在电镜下可观察到典型EIAV粒子。证明已成功拯救经EIAVS2基因逆向突变后的衍生病毒vpFDDVS2r1-3-4-5。比较vpFDDVS2r1-3-4-5衍生病毒与亲本克隆衍生病毒的复制动力学,表明前者的复制比后者略滞后。以上结果提示,对疫苗株S2基因的突变未明显影响EIAV的体外复制。
- 高旭姜成刚韩秀娥赵立平沈荣显相文华周建华
- 关键词：马传染性贫血病毒S2基因感染性克隆
- 免疫抑制对EIAV弱毒疫苗免疫马体内疫苗弱毒株载量的影响被引量：4
- 2008年
- 为了研究马传染性贫血弱毒疫苗EIAVFDDV在体内的生物学特性,特别是在免疫马血浆中低拷贝存在状态的形成原因,使用连续给予地塞米松的方法,对EIAVFDDV免疫马匹进行了免疫功能抑制.连续给药10天后,以植物血凝素(PHA)作为刺激原的淋巴细胞非特异性增殖实验表明,实验马匹的免疫系统功能受到了明显抑制.使用实时RT-PCR对免疫抑制前后实验马匹体内EIAVFDDV的载量进行了定量检测.结果显示,EIAVFDDV免疫马匹体内的病毒载量在2匹马中未见升高,1匹马体内略有增高,但仍处于EIAVFDDV在免疫马匹体内载量的正常范围.作为对照,强毒株隐性携带马的病毒载量提高了约25000倍,并出现了典型的临床症状.实验结果提示,致弱后病毒特有的生物学特性,而非免疫压力,是EIAV疫苗株在宿主血浆中低拷贝存在的主要原因.同时,在免疫系统功能受抑制状态下,疫苗株在免疫马体内仍然表现出了相对稳定的低拷贝复制状态,进一步显示了EIAVFDDV在应用中的安全性.
- 马建姜成刚林跃智郭亮郭巍孔宪刚沈荣显邵一鸣张哓燕周建华
- 关键词：减毒疫苗免疫抑制病毒载量
