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辽宁省博士科研启动基金(20041053)

作品数：13 被引量：34H指数：4
相关作者：张强胡新华杨军刘程伟张志深更多>>
相关机构：中国医科大学附属第一医院佳木斯大学附属第一医院中国医科大学更多>>
发文基金：辽宁省博士科研启动基金国家自然科学基金辽宁省教育厅高等学校科学研究项目更多>>
相关领域：医药卫生生物学更多>>

文献类型

  • 13篇中文期刊文章

领域

  • 11篇医药卫生
  • 3篇生物学

主题

  • 9篇蛋白
  • 8篇血管
  • 8篇雷帕霉素
  • 8篇雷帕霉素靶蛋...
  • 8篇靶蛋白
  • 7篇移植静脉
  • 7篇静脉
  • 6篇反义
  • 5篇血管平滑肌
  • 5篇增生
  • 5篇平滑肌
  • 5篇细胞
  • 5篇内膜
  • 5篇基因
  • 4篇移植静脉内膜...
  • 4篇内膜增生
  • 4篇静脉内膜
  • 4篇静脉内膜增生
  • 3篇平滑肌细胞
  • 3篇自体

机构

  • 13篇中国医科大学...
  • 1篇中国医科大学
  • 1篇佳木斯大学附...

作者

  • 13篇杨军
  • 13篇胡新华
  • 13篇张强
  • 10篇刘程伟
  • 10篇张志深
  • 5篇杨德华
  • 2篇刘戈飞
  • 2篇段志泉
  • 1篇辛世杰
  • 1篇李铁民
  • 1篇于维东
  • 1篇张雪松
  • 1篇王军
  • 1篇范红杰

传媒

  • 3篇中华实验外科...
  • 3篇中国普通外科...
  • 2篇中国动脉硬化...
  • 2篇中国医科大学...
  • 1篇中华医学杂志
  • 1篇中华外科杂志
  • 1篇中国现代普通...

年份

  • 2篇2007
  • 8篇2006
  • 3篇2005
共 13 条 记 录，以下是 1-10
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排序方式：
早期生长反应基因-1及其相关基因在大鼠自体移植静脉中的表达及意义被引量：2
2005年
目的探讨移植静脉中早期生长反应基因(Egr)-1、血小板源性生长因子(PDGF)-B、转化生长因子(TGF)-β1的表达之间的关系及其在内膜增生(IH)中的作用。方法Wistar大鼠90只,建立自体静脉移植模型,将大鼠右颈总静脉端-端吻合于肾下腹主动脉。术后随机分为1、2、6、24h,3、7d,2、4、6周组,分别在相应时点静脉取材。应用原位杂交和RT-PCR方法检测Egr-1、PDGF-B、TGF-β1mRNA的表达,联合应用Western蛋白印迹和免疫组织化学方法检测Egr-1、PDGF-B、TGF-β1蛋白表达情况,同时进行组织形态学研究。结果正常静脉中未检测到Egr-1、PDGF-B、TGF-β1mRNA和蛋白的表达,在移植静脉中Egr-1mRNA和蛋白的表达具有双相变化。应用原位杂交方法检测mRNA阳性细胞百分比Egr-1mRNA在移植4周达高峰(45%±6%);PDGF-B mRNA在移植2周达高峰(48%±6%);TGF-β1mRNA在移植1周达高峰(46%±9%)。应用免疫组织化学方法检测蛋白阳性细胞百分比Egr-1蛋白在移植4周达高峰(40%±9%);PDGF-B蛋白在移植4周达高峰(45%±4%);TGF-β1蛋白在移植2周达高峰(41%±7%)。移植早期Egr-1、PDGF-B、TGF-β1主要在中膜血管平滑肌细胞表达,而移植后期Egr-1、PDGF-B、TGF-β1则主要在新生内膜血管平滑肌细胞表达。结论移植静脉内膜增生与Egr-1、PDGF-B、TGF-β1的表达关系密切;PDGF-B和TGF-β1的激活及表达可能受Egr-1的调节,同时也可能通过反馈机制促进Egr-1的高表达。
刘程伟胡新华杨军张强张雪松段志泉
关键词：移植物闭塞血管血管内膜自体移植静脉
反义mTOR逆转录病毒载体对血管平滑肌细胞增殖的抑制作用被引量：4
2006年
目的观察反义雷帕霉素靶蛋白(mTOR)逆转录病毒载体对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖活性的影响。方法采用脂质体介导转染包装细胞后构建mTOR的反义重组逆转录病毒载体(pLX IN-AmTOR)感染VSMC,检测mTOR及其下游底物包括真核细胞启动子4 E结合蛋白1(4 E-BP 1)和核糖体蛋白S6激酶(p 7 0 S6 k)的表达变化,以及VSMC细胞增殖周期和增殖活性的改变。结果反义逆转录病毒载体转染PT6 7细胞后感染VSMC,能显著抑制mTOR的mRNA和蛋白产物表达,mTOR通路下游p 7 0 S6 k表达相应减少,而4 E-BP 1的表达却显著增强;感染后的VSMC的分裂、增殖过程受阻,更多细胞停滞在G1期。结论成功构建反义mTOR逆转录病毒载体;感染VSMC后能明显抑制VSMC的分裂、分化和增殖。
胡新华张强杨军刘程伟张志深
关键词：雷帕霉素靶蛋白细胞分裂
RNA干扰沉默雷帕霉素靶蛋白基因表达对血管平滑肌细胞增殖活性的影响被引量：10
2006年
目的构建靶向雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的RNA干扰表达载体,观察其对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖活性的影响。方法根据大鼠mTOR基因序列设计2个短发夹环RNA (shRNA)序列,化学法合成单链寡核苷酸序列,将cDNA序列插入逆转录病毒载体pLXIN,脂质体介导转染包装细胞PT67后获得mTOR的重组逆转录病毒shRNA表达载体,感染VSMC,Northern blot和Western blot法检测mTOR及其下游底物真核细胞启动子4E结合蛋白(4E-BP1)、p70s6k等表达的变化,流式细胞仪检测VSMC细胞周期的变化,噻唑蓝(MTT)法检测VSMC增殖活性的改变。结果shRNA序列插入pLXIN载体并感染VSMC,证实其能够显著抑制mTOR的mRNA和蛋白产物表达,mTOR通路下游的核糖体蛋白S6激酶(p70s6k)表达相应减少,而4E-BP1的表达却显著增强；感染前VSMC细胞G_1/G_0,期比例为71%,S期为15%,凋亡细胞为2%；转染后72 h,G_1/ G_0期比例为87%,S期为6%,凋亡细胞为6%(P＜0．01)；表明G_0/G_1μ→S过程受阻,VSMC的分裂、增殖受到抑制,凋亡机制启动,更多细胞停滞在G_0/G_1期。结论成功构建靶向mTOR基因的shRNA表达载体,能够明显抑制VSMC分裂、分化和增殖。
胡新华张强杨军杨德华刘程伟张志深
关键词：雷帕霉素RNA干扰血管平滑肌细胞
蛋白激酶B短发夹环RNA表达载体的构建及其对血管平滑肌细胞增殖活性的影响被引量：1
2007年
目的构建靶向蛋白激酶B基因的短发夹环RNA表达载体,观察其对血管平滑肌细胞增殖活性的影响。方法设计多个针对大鼠蛋白激酶B基因的短发夹环RNA序列,化学合成方法合成并经pGEM-T载体克隆后双酶切,将cDNA序列插入逆转录病毒载体pLXIN,包装后获得蛋白激酶B的逆转录表达载体,感染血管平滑肌细胞,Northern blot和Western blot法检测蛋白激酶B及其下游底物的表达变化,流式细胞仪检测细胞周期变化,MTT法检测血管平滑肌细胞增殖活性的改变。结果成功构建蛋白激酶B基因的逆转录病毒载体并包装,感染血管平滑肌细胞,证实其能显著抑制蛋白激酶B的mRNA和蛋白产物表达,下游的p70s6k表达相应减少;被感染血管平滑肌细胞的分裂、增殖过程受阻,更多细胞停滞在G0/G1期。结论成功构建蛋白激酶B基因逆转录病毒RNA干扰表达载体,感染血管平滑肌细胞能够明显抑制其分裂、分化和增殖。
于维东胡新华范红杰杨军张强
关键词：病理学与病理生理学增殖活性蛋白激酶B短发夹环RNA
缺血预适应减轻大鼠后肢缺血再灌注后肺损伤的研究被引量：3
2005年
目的:探讨缺血预适应(IPC)对大鼠后肢缺血再灌注(I/R)后肺损伤的影响。方法:阻断肾下腹主动脉建立大鼠双侧后肢I/R损伤模型。观察肺组织形态学、湿/干重比、丙二醛(MDA)及髓过氧化物酶(MPO)的变化。原位杂交和RT PCR检测胞间黏附分子1(ICAM1)mRNA,Western蛋白印迹检测ICAM1。结果:I/R组各项指标表达明显增加,与假手术组、缺血组比较差异显著(P<0.01)。IPC±I/R组的各项指标明显减少,与I/R组比较差异显著(P<0.01)。结论:IPC减轻大鼠双侧后肢缺血再灌注后肺损伤,其作用机制可能是通过抑制ICAM1介导的中性粒细胞在肺组织内的黏附、浸润而实现的。
杨军聂国利胡新华陈哲张强
关键词：缺血预适应缺血再灌注骨骼肌肺损伤
反义雷帕霉素靶蛋白基因局部转染对移植静脉内膜增生的影响
2006年
目的:观察以纳米粒子为载体的反义雷帕霉素靶蛋白(mTOR)基因局部转染对移植静脉内膜增生的影响。方法:应用聚乳酸聚乙醇酸共聚物(PLGA)和聚乙烯醇(PVA)包载mTOR基因,制备纳米级粒子混合物。检测其包埋率、体外释放情况及粒子大小。建立自体静脉移植模型,随机分成转基因组、空载体组、对照组。转基因组移植静脉转染以纳米粒子为载体的反义mTOR基因,空载体组单纯转染纳米粒子包载的空载体,对照组不予特殊处理。分别于术后3d、7d、14d、28d取材,常规HE、Verhoeff染色,RT-PCR、Westernblot检测mTOR基因的mRNA及蛋白的变化,TUNEL法观察血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡的动态变化。结果:转基因组内膜中mTOR基因的mRNA及蛋白产物表达较其他两组明显减少(P<0.05);转基因组内膜增生厚度7d、14d、28d较其他组明显减少(P<0.01);转基因组凋亡细胞较其他组明显增高(P<0.05)。结论:纳米粒子可以作为转基因载体,反义mTOR基因的表达能够有效抑制自体移植静脉内膜的增生,促进VSMC的凋亡。
胡新华张强杨军刘程伟张志深杨德华
纳米粒子包载反义雷帕霉素靶蛋白基因转染对移植静脉内膜增生的影响被引量：4
2006年
目的观察纳米粒子包载的反义雷帕霉素靶蛋白(mTOR)基因局部转染对移植静脉内膜增生的影响。方法应用聚乳酸聚乙醇酸共聚物(PLGA)和聚乙烯醇(PVA)包载mTOR基因。建立自体静脉移植模型,随机分成转基因组、空载体组、对照组。转基因组移植静脉转染纳米粒子包载的反义mTOR基因,空载体组单纯转染纳米粒子包载的空载体,对照组不予特殊处理。分别于移植3、7、14、28d取材,常规苏木素-伊红(HE)、Verhoeff染色,检测mTOR基因的mRNA及蛋白产物表达的变化,TUNEL法观察血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡的动态变化。结果转基因组内膜中mTOR基因的mRNA及蛋白产物表达明显减少(P＜0．01)；转基因组内膜增生程度在术后7、14、28 d较其他组明显减少(P＜0．01)；转基因组凋亡细胞明显增多(P＜0．01)。结论纳米粒子可以作为基因载体,反义mTOR基因的表达能够抑制移植静脉内膜的增生,促进VSMC凋亡。
胡新华张强杨军杨德华张志深刘程伟
关键词：雷帕霉素靶蛋白内膜增生静脉
mTOR反义RNA真核表达载体的构建及其在血管平滑肌细胞中的表达
2006年
目的:构建哺乳类动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的反义RNA真核表达载体,观察其对血管平滑肌细胞(VSMC)功能的影响。方法:提取人VSMC总RNA,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增mTOR基因cDNA序列,经pGEM-T载体克隆后双酶切,将cDNA序列反向插入绿色荧光蛋白表达载体pEGP-C1,构建mTOR基因反义RNA真核表达载体。转染VSMC,采用W estern b lot法检验反义表达载体对mTOR蛋白表达的影响,流式细胞仪检测细胞周期的变化。结果:经RT-PCR获得664 bp产物,T载体克隆后,经DNA测序,确定该片段为mTOR基因cDNA,进而构建反义RNA真核表达载体pEGFP-C1-mTOR,测序证明序列正确后转染VSMC,证实其能够显著抑制mTOR蛋白产物表达,VSMC的分裂、增殖过程受阻。结论:已经成功构建mTOR基因的反义RNA真核表达载体。
胡新华杨军张志深刘程伟刘戈飞张强
关键词：雷帕霉素靶蛋白反义技术基因表达载体
雷帕霉素靶蛋白反义RNA真核表达载体的构建及其在血管平滑肌细胞中的表达被引量：5
2006年
目的构建雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的反义RNA真核表达载体,观察其对血管平滑肌细胞(VSMC)功能的影响。方法提取人VSMC总RNA,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增 mTOR基因cDNA序列,经pGEM-T载体克隆后双酶切,将cDNA序列反向插入绿色荧光蛋白表达载体pEGP-C1,转染VSMC,Western blot法检测反义表达载体对mTOR蛋白表达的影响,流式细胞仪检测细胞周期的变化。结果经RT-PCR获得664 bp产物,T载体克隆后,酶切确定该片段为 mTOR基因cDNA,进而构建反义RNA真核表达载体pEGFP-C1-mTOR,测序证明序列正确后转染 VSMC,证实其能够显著抑制mTOR蛋白产物表达,转染72 h的mTOR蛋白产物表达抑制率达 82％,S期细胞由15％降低为7％,凋亡细胞增至9％。VSMC增殖过程在G1／G0期→S期受阻。结论成功构建mTOR基因的反义RNA真核表达载体。
胡新华杨军张志深刘程伟李铁民张强
关键词：雷帕霉素血管平滑肌细胞
纳米粒子介导反义mTOR基因转染抑制移植静脉内膜增生被引量：2
2007年
目的观察以纳米粒子为载体的外源性反义雷帕霉素靶蛋白(mTOR)基因局部转染对移植静脉内膜增生的影响。方法应用聚乳酸聚乙醇酸共聚物(PLGA)和聚乙烯醇(PVA)包载mTOR基因,制备纳米级粒子混合物。建立自体静脉移植模型72只,随机分成转基因组(转染以纳米粒子为载体的反义mTOR基因),空载体组(单纯转染纳米粒子包载的空载体)和对照组(不予特殊处理)。分别于术后3,7,14,28d取材。检测mTOR基因的mRNA及蛋白产物表达,以及血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡的动态变化。结果转基因组内膜中mTOR基因的mRNA及蛋白产物表达较其他两组明显减少(P<0.05);转基因组内膜增生厚度于7,14,28d较其他组明显减少(P<0.01);转基因组凋亡细胞较其他组明显增高(P<0.05)。结论纳米粒子可以作为转基因载体。反义mTOR基因的表达能有效抑制自体移植静脉内膜的增生及促进VSMC凋亡。
胡新华张强杨军刘程伟张志深杨德华
关键词：雷帕霉素靶蛋白内膜增生转染
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