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仿刺参profilin基因全长cDNA的克隆及表达分析被引量：3: 2013年; 仿刺参(Apostichopus japonicus)是我国北方沿海重要养殖品种之一。克隆了仿刺参profilin基因全长cDNA序列,并分析了基因的表达规律。该基因cDNA序列全长787 bp,5'-非翻译区(5'-untranslated region,UTR)长205 bp,3'-UTR长204 bp,开放阅读框378 bp,编码125个氨基酸,预测蛋白分子量13.4 kDa。仿刺参Profilin蛋白的PROF保守结构域中含有肌动蛋白互作位点、多聚脯氨酸结合位点和PIP2互作位点。氨基酸序列比对结果显示,仿刺参Profilin与丝盘虫(Trichoplax adhaerens)和囊舌虫(Saccoglossus kowalevskii)相似度最高,为46%。Quantitative real-time PCR结果显示,profilin mRNA在仿刺参未受精卵、受精卵、多细胞期、囊胚期、原肠期、小耳状幼体、中耳状幼体、大耳状幼体、樽型幼体、五触手幼体和稚参11个发育阶段及幼参的体壁、体腔细胞、肠道和呼吸树中均有表达;在仿刺参的不同发育阶段中,未受精卵至原肠期profilin mRNA表达量低,从小耳状幼体至稚参表达量增高;在仿刺参的不同组织中,profilin mRNA在体腔细胞中的表达量最高。经过棘皮动物免疫系统有效激活物脂多糖LPS的刺激,体腔细胞中profilin mRNA表达量显著升高,为仿刺参养殖病害的防控提供科学依据。; 董颖高杉陈仲杨爱馥姜北关晓燕王摆周遵春; 关键词：仿刺参 PROFILIN 基因表达 LPS刺激

仿刺参过氧化氢酶基因全长cDNA的克隆及表达分析被引量：8: 2014年; 研究仿刺参(Apostichopus japonicus)免疫相关基因的功能和作用机制可为仿刺参养殖病害的防控提供科学依据。克隆了仿刺参过氧化氢酶(catalase)基因的全长cDNA序列,全长1 885 bp,其中5'-非翻译区(5'-untranslated region,UTR)长76 bp,3'-UTR长306 bp,开放阅读框(open reading frame,ORF)1 503 bp,编码500个氨基酸,预测蛋白分子量为56.56 kDa。氨基酸序列比对结果显示,仿刺参Catalase与三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)和紫海胆(Strongylocentrotus purpuratus)的相似度最高,为75%。仿刺参catalase cDNA推导的氨基酸序列具有过氧化物酶定位信号PTS2、与还原型辅酶Ⅱ(NADPH)结合的氨基酸残基及与其它物种高度保守的Catalase近端血红素配体签名序列(351RLFSYSDTH359)。系统进化分析显示仿刺参处于无脊椎动物分支中,和紫海胆位于同一小支上。实时定量PCR结果显示,catalase mRNA在仿刺参肠、体壁、肌肉、呼吸树、体腔细胞和管足中均有表达,在肠中表达量最高。在细菌脂多糖LPS刺激后4 h,体腔细胞中catalase mRNA表达量显著升高,表明仿刺参的catalase基因在应对外来病原菌刺激的免疫应答中发挥了重要作用。; 高杉周遵春董颖杨爱馥陈仲王摆关晓燕蒋经伟姜北; 关键词：仿刺参过氧化氢酶基因 LPS刺激

仿刺参铜锌超氧化物歧化酶基因全长cDNA的克隆及表达分析被引量：3: 2014年; 采用cDNA末端快速克隆技术首次克隆了仿刺参铜锌超氧化物歧化酶基因的全长cDNA序列，该基因cDNA全长1500 bp ，其中包含5′-非翻译区长129 bp ，3′-UTR长912 bp ，开放阅读框459 bp ，编码152个氨基酸，预测蛋白分子量为15．47 ku。仿刺参铜锌超氧化物歧化酶基因 cDNA推导的氨基酸序列具有保守的铜锌超氧化物歧化酶蛋白家族标签序列42 GFHIHQFGDNT52及136 GNAGGRAACGVI147，4个Cu2＋结合位点（His-44，-46，-61，-118）和4个Zn2＋结合位点（His-61，-69，-78，Asp-81），一对二硫键（Cys-55，-144）。氨基酸序列比对结果显示，仿刺参铜锌超氧化物歧化酶与匙胸瘿蜂和烟粉虱相似度最高，为71％。系统进化分析显示仿刺参处于无脊椎动物分支中，与紫海胆位于同一小支上。实时定量 PCR结果显示，铜锌超氧化物歧化酶基因 mRNA在仿刺参肠、体壁、肌肉、呼吸树、体腔细胞和管足中均有表达，在管足中表达量最高。在细菌脂多糖刺激后4～12 h ，体腔细胞中铜锌超氧化物歧化酶基因 mRNA表达量显著下降，表明仿刺参的铜锌超氧化物歧化酶基因对细菌脂多糖刺激有免疫应答。; 高杉董颖王摆杨爱馥陈仲关晓燕蒋经伟姜北孙红娟周遵春; 关键词：仿刺参铜锌超氧化物歧化酶基因表达

仿刺参甘露聚糖结合凝集素基因对脂多糖刺激的免疫应答: 2012年; 甘露聚糖结合凝集素是天然免疫系统中重要的模式识别分子。分析了仿刺参甘露聚糖结合凝集素在仿刺参不同组织及脂多糖刺激前后的表达规律,结果显示仿刺参甘露聚糖结合凝集素mRNA在仿刺参的肠道、呼吸树、体腔细胞和体壁均有组成型表达,且体壁的表达量最高;细菌脂多糖刺激后,4个组织的仿刺参甘露聚糖结合凝集素表达量均得到上调,且以肠道和体腔细胞表达量的变化最为显著;另外,肠道、体腔细胞、体壁中仿刺参甘露聚糖结合凝集素表达量峰值的出现具有明显的时序性,而呼吸树自刺激后6h直至取样结束,其表达量呈稳步上升趋势。; 杨爱馥周遵春于喆董颖陈仲王摆关晓燕姜北; 关键词：仿刺参甘露糖结合凝集素基因表达脂多糖刺激

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辽宁省博士科研启动基金(20111072)

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