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脂肪酶的特异性折叠酶: 2011年; 以Pseudomonas aeruginosa为代表的I.1亚家族脂肪酶和以Burkholderia cepacia为代表的I.2亚家族脂肪酶具有优良的手性化合物拆分性能,在绿色化工领域具有良好的开发潜力及其应用前景。I.1亚家族脂肪酶和I.2亚家族脂肪酶均采用II型分泌机制进行分泌,其分泌依赖于一种分子伴侣——脂肪酶的特异性折叠酶(lipase specific foldase,Lif)的协助。从Lif蛋白的分类、结构特点、介导对应脂肪酶折叠的特异性及机制、lif基因表达调控机制及尚待探讨的问题等方面系统介绍Lif蛋白的研究进展。; 程蓝骍舒正玉吴继光陈的蒋咏梅李欣黄建忠; 关键词：脂肪酶

黑曲霉脂肪酶盖子结构域突变对其活性的影响被引量：2: 2010年; 比较黑曲霉脂肪酶与黑曲霉酯酶的3-D结构发现二者在盖子结构域存在显著差异。根据已解析的酯酶的3-D结构信息,运用重叠延伸PCR技术,对黑曲霉脂肪酶的4个位点进行突变,以期获得开盖型黑曲霉脂肪酶。4个突变位点分别为形成黑曲霉脂肪酶盖子结构的α-螺旋与酯酶对应区域的α-螺旋相互置换;Ser84突变为Gly;Asp99突变为Pro;Lys108突变为Glu。4个重组质粒导入毕赤酵母GS115菌株进行异源表达后,仅pPCI9K-anl-D99P和pPCI9K-anl-K108E实现了活性表达。; 薛龙吟林瑞凤舒正玉黄建忠; 关键词：黑曲霉脂肪酶突变活性

黑曲霉脂肪酶分子结构预测被引量：2: 2009年; 根据克隆到的黑曲霉脂肪酶基因序列,概念性翻译出其编码的氨基酸序列。利用BioEdit、PSIPRED和Swiss-Model等软件及服务器对黑曲霉脂肪酶的一级结构、二级结构和三级结构进行分子结构模型的预测与模拟。预测结果显示,黑曲霉脂肪酶分子的一级结构、二级结构及三级结构的结构特点与丝氨酸水解酶高度吻合。预测的黑曲霉脂肪酶各种二级结构成分含量与实际测定的重组黑曲霉脂肪酶二级结构成分相符。在三级结构水平上,黑曲霉脂肪酶"盖子"结构域所在的位置与已解析的黑曲霉阿魏酸酯酶对应结构域所在的位置存在显著差异。盖子结构域位置的差异预示一种开盖型脂肪酶分子设计和构建的可能。; 舒正玉段漠杰闫云君黄建忠; 关键词：黑曲霉脂肪酶阿魏酸酯酶分子结构

耐有机溶剂极端微生物的耐受机制及应用被引量：5: 2009年; 耐有机溶剂微生物是一类新颖的极端微生物,直到20世纪80年代才被系统地研究。它们通过各种耐受机制,有效抵御或降低有机溶剂对其细胞产生的毒害作用。因此,在全细胞催化、环境污染治理等领域,耐有机溶剂极端微生物具有广阔的工业应用前景。此外,深入透彻地了解耐有机溶剂极端微生物的各种耐受机制,有助于利用基因工程技术改造和优化现有耐有机溶剂极端微生物的各种性能,进一步拓展其工业应用领域。本文将从囊泡外排、改变细胞膜磷脂结构和组成等4个方面概述近年来耐有机溶剂极端微生物的耐受机制研究新进展,并介绍它们在全细胞催化等领域的应用。; 江欢舒正玉吴继光黄平黄建忠; 关键词：极端微生物

响应面法优化有机溶剂极端耐受性菌株 Burkholderia sp.ZYB002产脂肪酶条件: 2009年; Burkholderia sp.脂肪酶具有较高的有机溶剂耐受性和转酯活性,广泛应用于手性化合物的拆分。本研究利用统计学方法对一株具有有机溶剂极端耐受性的脂肪酶高产菌株Burkholderia sp.ZYB002在摇瓶培养条件下产脂肪酶条件进行了优化。通过单因素实验,首先确定了最适碳源、氮源、诱导剂等。以Plackett-Burrman设计筛选影响Burkholderia sp.ZYB002产酶的主要因素,通过最陡爬坡实验和响应面分析法确定产酶最适条件。K_2HPO_4、大豆油乳化液和起始pH确定为影响菌株产酶的3个主效因素。最佳产酶条件为:糊精0.3%(W/V),牛肉膏2.0%(W/V),MgSO_4.7H_2O 0.075%(W/V),K_2HPO_40.14%(W/V),大豆油乳化液4.89%(V/V),pH 8.11,玻璃珠10颗/瓶,接种量2.0%(V/V),30℃,250r/min,发酵时间22h。在此条件下,发酵液脂肪酶酶活最高达45.6U/mL,较发酵基本培养基发酵液的脂肪酶酶活提高了3.44倍。; 张岩峰舒正玉张欢欢田宝玉江贤章黄建忠; 关键词：BURKHOLDERIA 脂肪酶

耐受有机溶剂洋葱伯克霍尔德菌ZYB002全细胞脂肪酶酶学性质被引量：3: 2010年; 一株对多种有机溶剂具有良好耐受能力的产脂肪酶菌株ZYB002经分子鉴定为洋葱伯克霍尔德菌。其产生的细胞结合脂肪酶最适温度为65°C,最适pH为8.0,在低于70°C和pH3-8.5的范围内,全细胞脂肪酶保持稳定。Ca2+、K+、Na+和NO3-等离子对脂肪酶活性有激活作用,而Zn2+有抑制效应。全细胞脂肪酶对正丁醇有较强的耐受能力,但曲拉通X-100对脂肪酶活性有强烈的抑制效应。洋葱伯克霍尔德菌ZYB002全细胞脂肪酶良好的碱稳定性、热稳定性和有机溶剂耐受性,表明该全细胞脂肪酶具有重要的工业应用潜力。; 吴继光舒正玉程蓝骍江欢祝昌飞黄建忠; 关键词：洋葱伯克霍尔德菌有机溶剂耐受性酶学性质

新型微生物脂肪酶资源开发被引量：4: 2009年; 微生物脂肪酶是一类重要的工业生物催化剂,广泛应用于工农业生产的诸多领域。筛选、挖掘和开发出具有新型催化活性或高稳定性的微生物脂肪酶一直是脂肪酶研究的重点。本文从极端微生物、宏基因组技术、基因组数据库挖掘、定向进化技术、固定化技术和化学修饰技术等方面介绍了当前新型脂肪酶开发的途径和方法。; 舒正玉薛龙吟林瑞凤蔡少丽黄建忠; 关键词：极端微生物宏基因组基因组数据库蛋白质工程化学修饰

微生物脂肪酶蛋白质工程被引量：3: 2009年; 微生物脂肪酶催化的化学反应具有严格的立体选择性、位点选择性等专一性,催化活性高而副反应少,催化反应不需要辅助因子等特点,因此广泛应用于工农业生产中的诸多领域。利用蛋白质工程技术,提高微生物脂肪酶的特异性、活性和稳定性,对提高微生物脂肪酶制剂产品的市场竞争能力,扩大微生物脂肪酶的应用领域,具有重要的意义。综述了蛋白质工程技术在微生物脂肪酶改性方面的应用现状、存在问题及前景。; 林瑞凤舒正玉薛龙吟江欢黄建忠; 关键词：脂肪酶蛋白质工程

从植物根际定向批量筛选广谱有机溶剂耐受性脂肪酶产生菌被引量：4: 2009年; 洋葱伯克霍尔德菌脂肪酶是一类具有重要工业应用价值的优良脂肪酶之一。根据已公布的洋葱伯克霍尔德菌基因组信息,在传统的洋葱伯克霍尔德菌选择性培养基中添加适量的氨苄青霉素和卡那霉素,从植物根际的土壤中筛选洋葱伯克霍尔德菌。对获得的单菌落再用含罗丹明B指示剂的产脂肪酶定性检测平板检测,从4个根际土壤中筛选到35株产脂肪酶的洋葱伯克霍尔德菌,阳性率达到65%。其中15株对体积浓度为10%的苯、己烷和正庚烷同时具有耐受性。用recA基因分子鉴定上述15株菌种,全部属于洋葱伯克霍尔德菌菌群。; 舒正玉林瑞凤江欢张岩峰黄建忠; 关键词：脂肪酶洋葱伯克霍尔德菌有机溶剂耐受性根际

芽孢杆菌WF63脂肪酶分离纯化及酶学性质被引量：2: 2010年; 芽孢杆菌WF63脂肪酶发酵上清液经硫酸铵沉淀、Sephaeryl$200柱层析、CMSephrose FF柱层析，得到纯化的脂肪酶，纯化倍数为9．45倍，活性回收率为4．27％．对该酶性质研究表明：该酶水解橄榄油的最适温度为50℃，最适pH为8．0，在60℃以下和pH4～10之间有很好的稳定性．K^＋，Mgn对该脂肪酶的水解活性有促进作用，而Na^＋，Mn^2＋，Ca^2＋对脂肪酶则没有显著的促进作用，Fe^2＋对酶活的抑制作用不明显．浓度为0．1％时，Triton X-100对脂肪酶活力有明显促进作用；Brij 35，Tween-80对酶活力的影响不明显；离子型表面活性剂SDS则表现出抑制作用．; 黄鹭强谢必峰黄建忠吴松刚; 关键词：芽孢杆菌脂肪酶分离纯化

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