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三维培养条件下电离辐射诱导适应性反应研究被引量：1: 2007年; 目的研究在三维细胞培养条件下,电离辐射诱导人成纤维细胞发生适应性反应。方法采用人成纤维细胞进行三维条件培养,以60Co进行照射（诱导剂量D1为0.1Gy,攻击剂量D2为2Gy）,以Western blot检测生长相关基因p53和p21的表达,免疫荧光染色及共聚焦法观察形态学变化。结果三维培养条件下,细胞生长与二维（单层）培养形态学表现明显不同,细胞形态伸展,呈现伪足和多微丝状,细胞正常∶异常∶中间态比例为87.05%∶6.1%∶6.85%。经过2Gy（D2）照射后细胞明显收缩,伪足和微丝消失,与对照组比较,细胞变为正常∶异常∶中间态比例30.4%∶67.45%∶2.15%;预先给以0.1Gy即D1＋D2照射后则出现异常细胞数量减少,正常细胞有所增加,同时不典型的中间态细胞比例增加,细胞比例为正常∶异常∶中间态35.5%∶34.7%∶30.4%。结论人成纤维细胞在三维培养条件下,预先低剂量60Co照射可以降低随后高剂量照射引起的形态学改变,诱导产生适应性反应。; 刘晓冬刘扬赵银龙马淑梅; 关键词：电离辐射

电离辐射作用后p53对核仁素的调控作用研究: 2008年; 核仁素（Nucleolin），是细胞核仁中的一种磷酸化蛋白，主要定位于真核细胞核仁的颗粒区和致密纤维组分。研究发现Nucleolin除了在核仁中发挥作用外，还具有在核仁、细胞核、细胞质之间穿梭的特性。文献报道，电离辐射和抗肿瘤药物喜树碱可以使Nucleolin活化，Nucleolin和p53可以在体外直接相互作用，Nucleolin的穿梭功能依赖于p53和应激条件。; 赵银龙马淑梅罗云霄刘扬张洁琼易贺庆施丹刘晓冬; 关键词：电离辐射核仁素 P53 磷酸化蛋白抗肿瘤药物

p53基因突变子175 H、248 W和273 H的定点突变及表达载体的构建被引量：1: 2006年; 目的:定点诱变合成p53基因突变子进而构建表达载体。方法:以野生型p53基因为模板,采用PCR体外定点突变技术,设计2对引物,将突变位点设计在引物上,通过重叠延伸法2次PCR扩增,扩增片段上含有所需要的突变位点,最后将扩增片段克隆入pcDNA3.1载体中。结果:在预期位点已经发生突变,p53基因第175位密码子由精氨酸(cgc)突变为组氨酸(cac),第248位密码子由精氨酸(cgg)突变为色氨酸(tgg),第273位密码子由精氨酸(cgt)突变为组氨酸(cat)。p53基因突变子表达载体成功构建。结论:PCR技术诱导定点突变准确、高效。基因突变体的成功构建,为进一步研究该突变位点奠定了基础。; 刘扬赵银龙刘晓冬马淑梅龚守良刘树铮

逆转录病毒载体介导shRNA对人胚胎肾细胞中p53基因的沉默作用被引量：3: 2006年; 目的:检测逆转录病毒载体介导的小发夹环RNA(small hairpin RNA,shRNA)对人胚胎肾细胞(HEK293)中p53基因的干扰作用。方法:将人H1启动子由XholⅠ和EcoRⅠ酶切位点插入CMV启动子上游,人CD4基因替代匀霉素抗性基因,作为检测标志。针对人野生型p53基因设计的shRNA被连接在H1启动子的下游,构建含有shRNA的逆转录病毒载体LTRH1-p53,即RNAi表达载体;利用流式细胞术检测逆转录病毒感染HEK293细胞72 h后细胞内P53蛋白水平的变化。结果:成功构建LTRH1-p53载体,该载体感染HEK293细胞后72 h,与感染空病毒载体LTRH1组相比,P53蛋白表达降至空病毒载体LTRH1组的69%(P<0.01)。结论:LTRH1-p53表达载体成功使p53基因沉默,shRNA表达载体的使用为基因功能研究提供有力工具。; 刘扬马淑梅刘晓冬金顺子徐瑞明武宁赵银龙龚守良刘树铮; 关键词：RNA干扰逆转录病毒载体 SHRNA

P53在电离辐射诱导的细胞周期解耦联中的作用: 2008年; 目的探讨p53基因在电离辐射（IR）诱导的MCF-7细胞周期解耦联中的作用。方法构建RNAi表达载体，经磷酸钙共沉淀法转染293T细胞形成病毒包装颗粒，感染MCF-7后采用Western blot检测P53蛋白的表达，建立p53基因沉默模型。将p53野生型（＋／＋）和沉默模型（-／-）经电离辐射处理后，采用流式细胞术分别测定细胞周期并分析细胞多倍体的变化。结果与p53^＋/＋组比较，p53^-/-模型组G0/G1期细胞百分数减少，S期、G2期增加（P〈0．01），倍体分析表明二倍体数减少，四倍体、八倍体均增加（P〈0．01）。在p53^＋/＋和p53^-/-细胞中，与假照射组比较，4Gy照射后G0／G1期、S期细胞百分数减少，而G2期增多（P〈0．01）；倍体分析表明，照射后二倍体数减少，四倍体、八倍体均增加（P〈0．01）。与p53^＋/＋IR组比较，p53^-/-＋IR组发生G0／G1期、S期细胞百分数减少，G2＋M期增多（P〈0．01），二倍体数减少，四倍体增多（P〈0．01），八倍体无明显差别。结论电离辐射可以诱导细胞发生G2期阻滞和细胞周期解耦联；P53在电离辐射诱导的MCF-7细胞G2期阻滞中发挥作用，而在细胞周期解耦联中可能不发挥作用。; 马淑梅吴丽珉刘扬施丹易贺庆张洁琼汪海娇刘晓冬; 关键词：P53基因 RNA干扰电离辐射

电离辐射对三维培养条件下人前列腺细胞形态学表现的影响被引量：1: 2006年; 目的研究在三维细胞培养条件下前列腺细胞(RWPE-1)腺泡样结构的形成及电离辐射的影响。方法采用三维培养RWPE-1细胞,Westernblot检测自噬相关基因Beclin1及p53、p21的变化,制备Beclin1RNAi表达载体并感染细胞,免疫荧光染色和共聚焦法检测电离辐射作用后细胞形态学变化。结果三维培养条件下RWPE-1细胞聚积形成腺泡样结构(Acini),Acini组成细胞出现明显极化,2和5Gy照射后,Acini结构破坏,少量细胞发生死亡;经Beclin1基因沉默后,对照组细胞仍呈聚积趋势,2和5Gy照射后,Acini结构不再形成,细胞发生广泛性死亡。结论电离辐射抑制RWPE-1细胞Acini结构形成,Beclin1基因可能在其中发挥一定作用。; 刘晓冬刘扬赵银龙陈大伟; 关键词：电离辐射

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国家自然科学基金(30500142)