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山东省猪群TTV感染情况及分子流行病学分析被引量：6: 2011年; 为了确定Torque teno virus(TTV)在山东省猪群中是否存在及其感染情况,本研究利用套式PCR方法检测了来自山东省不同地区10个猪场的230份血液样品和组织样品。结果表明猪群中TTV1和TTV2感染总阳性率分别为45.2%和85.7%。两者的混合感染率为39.3%。用套式PCR引物扩增出TTV1和TTV2的部分片段,并将扩增出的部分基因与已报道的TTV1和TTV2病毒序列进行比较分析。分析结果显示TTV可分为TTV1和TTV2两大分支,其TTV1和TTV2与参考株相比同源性分别为88.0%～92.8%和91.9%～94.1%。本研究证实在山东省猪群中存在TTV感染,由于TTV可以感染人,其在公共卫生学方面的意义应当引起我们的重视。; 李俊时建立刘洋吴家强丛晓燕徐绍建孙文博王金宝; 关键词：TTV

PCV2Rep蛋白N-糖基化位点突变及其真核表达载体的构建被引量：3: 2014年; 根据GenBank发表的猪圆环病毒2型(PCV2)基因序列设计并合成引物,通过点突变的方法对其进行单点、两点和3点突变,成功获得含单点、两点和3点的突变体。设计引物扩增突变体的ORF1片段,将目的片段分别经KpnI和XbaI双酶切进而将其连接到真核表达载体pVAX1中,成功构建PCV2-pVAX1-Rep真核表达载体。此重组表达载体的成功构建为进一步研究PCV2 ORF1编码蛋白的生物学活性打下了基础。; 王鹏张熙艳时建立徐绍建丛晓燕刘畅彭喆孙文博杜以军吴家强王金宝李俊; 关键词：猪圆环病毒2型突变

PCV2 Rep、截短Cap蛋白原核表达条件的优化及纯化蛋白的免疫原性被引量：3: 2011年; 为得到纯化的Rep、截短Cap蛋白并确定其免疫原性,通过对前期构建的Rep、截短Cap蛋白原核表达载体进行原核表达条件的优化,最终确定诱导5 hI、PTG终浓度为1.5 mmol/L作为最佳的诱导条件,诱导表达Rep、截短Cap蛋白,用纯化试剂盒进行纯化,包被ELISA板和已经检测过的血清阳性样品符合率达到90%以上。; 时建立李俊吴家强丛晓燕孙文博杜以军王金宝周顺; 关键词：PCV2 ORF2 纯化免疫原性

SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测猪圆环病毒2型方法的建立: 2010年; 李俊丁鹏时建立徐绍建孙文博吴家强王金宝周顺; 关键词：猪圆环病毒2型荧光定量PCR检测 SYBR 猪繁殖与呼吸综合征病毒猪伪狂犬病病毒

猪圆环病毒2型特异性荧光定量PCR检测方法的建立与应用被引量：6: 2011年; 研究旨在建立基于SYBR Green I荧光定量PCR检测PCV 2的技术方法。根据GenBank中的猪圆环病毒2型(PCV 2)的基因序列(HQ148879),设计一对特异性引物,利用普通PCR技术扩增出PCV 2的ORF2基因702bp片段,并克隆到pVAX1载体,以纯化的质粒作为PCR检测的标准模板,以10倍梯度稀释质粒为阳性标准品,摸索荧光定量PCR试验,并绘制标准曲线,以此建立一种荧光定量PCR特异性检测猪圆环病毒的方法。结果表明,该方法对PCV 2有很好的特异性,其敏感性比常规PCR高100倍,批间与批内重复试验变异系数均小于2.5%。经临床应用表明荧光定量PCR方法的建立实现了对PCV 2特异性的快速诊断和定量检测。; 吴晓燕刘涛李俊时建立韩偲刘洋吴家强周顺王金宝; 关键词：猪圆环病毒2型 SYBR I 荧光定量PCR 特异性

山东地区猪繁殖与呼吸综合征病毒分子特征: 2011年; 为揭示2009~2010年山东地区流行的猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）的分子特征,通过RT-PCR扩增采自山东地区不同猪场病猪组织样本中PRRSV的Nsp2、ORF5、ORF6、ORF7序列,用DNAStar软件分析所测序列,并与北美洲型VR-2332株、欧洲型LV株及国内分离株进行核苷酸和推导的氨基酸同源性比较。结果表明,Nsp2、ORF5、ORF6、ORF7核苷酸与北美洲型VR-2332的同源性分别为77%~79.9%、88.3%~89.6%、94.9%~95.8%、93.3%~94.1%,与欧洲型LV株的同源性分别为29.6%~31.6%2、64.1%~64.8%、68.3%~68.6%、66.2%~67.3%,证明山东地区的PRRSV毒株仍属北美洲型。系统进化分析表明它们与国内2006~2010年间的分离株（变异株）亲缘关系较近,而与更早的分离株和疫苗MLV株亲缘关系较远,未发现传统毒株。在Nsp2、ORF5、ORF6、ORF7基因上均有不同程度的点突变。本研究揭示了山东地区流行的PRRSV各基因的变异特征,为PRRSV的综合防控提供理论依据。; 战翔李娟张熙艳刘洋李俊; 关键词：PRRSV NSP2基因 ORF5基因 ORF6基因 ORF7基因

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山东省自然科学基金(ZR2010CQ003)