国家自然科学基金(81270298)
- 作品数：4 被引量：3H指数：1
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- 人SMOC1重组腺病毒载体的构建及其在主动脉瓣间质细胞中的表达
- 2012年
- 目的 :利用AdEasyTMvector system构建携带人SMOC1基因的重组腺病毒表达载体,感染人主动脉瓣间质细胞(hAVICs)并检测外源性SMOC1在细胞中的表达和对细胞增殖的影响。方法:用PCR的方法扩增SMOC1 cDNA,将其克隆到pGEM-T Easy载体中并测序鉴定。经NotⅠ和XhoⅠ双酶切后接入pShuttle-CMV穿梭载体,构建重组腺病毒的穿梭质粒pShuttle-CMV-SMOC1。将经PmeⅠ线性化的pShuttle-CMV穿梭载体与pAdEasyTMDNA电穿孔共转化BJ5183重组细菌,获取重组腺病毒质粒pAdEasy-SMOC1,再将经PacⅠ线性化的重组病毒骨架质粒转染HEK293A包装细胞,包装并扩增重组腺病毒(Ad-SMOC1)。用Ad-SMOC1感染hAVICs,以Western blot法和免疫荧光染色法检测重组SMOC1在hAVICs中的表达与定位,用MTS法检测SMOC1对主动脉瓣间质细胞增殖的影响。结果:成功构建并包装表达SMOC1蛋白的重组腺病毒,该重组腺病毒在体外能有效感染hAVICs并高表达SMOC1蛋白,且其介导表达的SMOC1蛋白主要定位于hAVICs的胞浆和胞膜上,MTS分析表明重组SMOC1能够显著促进主动脉瓣间质细胞的增殖。结论:成功地构建了携带人SMOC1基因的重组腺病毒,并证实SMOC1具有促进增殖的作用。本研究为进一步研究SMOC1在瓣膜间质细胞中的作用奠定了实验基础。
- 赵蓉王惠杨杨李名鹏孔祥清孙伟
- 关键词：腺病毒
- Toll样受体4在胃食管交界部腺癌发展中的作用及与血管密度的关系被引量：1
- 2015年
- 目的 :探讨Toll样受体4(TLR4)在胃食管交界部腺癌发展中的作用及其与血管生成之间的关系。方法 :采用回顾分析,通过免疫组化法检测43例(其中23例为随访证实已出现复发转移)经病理证实的胃食管交界部腺癌手术切除标本中TLR4蛋白的表达;采用CD34抗体标记微血管内皮细胞,计算微血管密度(MVD)。分析TLR4蛋白的表达、MVD与胃食管交界部腺癌主要临床病理参数以及预后的关系。结果:TLR4蛋白的阳性表达率为69.8%,其中A组(复发转移组)TLR4蛋白阳性率为82.6%,明显高于对照组B组(55.0%,P<0.05);有淋巴结转移者的TLR4蛋白阳性表达率(79.3%)高于无淋巴结转移者(50.0%,P=0.05);TNM分期为Ⅲ+Ⅳ期者的TLR4蛋白阳性表达率(82.8%),明显高于Ⅰ+Ⅱ期者(42.9%,P<0.01)。TLR4蛋白的表达与MVD呈正相关(P=0.008)。结论:TLR4的高表达与胃食管交界部腺癌的发生发展及患者的预后情况密切相关,可能与TLR4促进肿瘤微血管生成相关。
- 王炜吴延虎朱锦富刘翔张石江
- 关键词：TOLL样受体微血管密度
- microRNA-23b表达异常与心脏发育缺陷相关性分析被引量：1
- 2015年
- 目的:探讨microRNA-23b(miR-23b)表达异常与心脏发育缺陷的关系。方法 :收集人胚胎心肌组织和发育中的小鼠胚胎心肌组织,0.9%二甲亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)诱导P19细胞定向分化为心肌细胞,定量PCR检测人胚胎心肌组织、小鼠胚胎心肌组织和P19细胞分化过程中miR-23b的表达特点,运用在线数据库对miR-23b进行生物信息学分析,分析其可能的靶基因以及涉及的信号通路,综合分析miR-23b表达异常与心脏发育缺陷的关系。结果:miR-23b在孕早期人室间隔缺损(ventricular septal defect,VSD)胚胎心肌组织中上调4.4倍,在孕中期VSD组下调3.5倍;小鼠胚胎发育d12.5、d14.5、d16.5、d18.5的4个时间点miR-23b的表达量逐渐增高,d14.5后各组间差异具有显著性(P<0.05);P19细胞定向分化过程中miR-23b的表达量逐渐下降,d4后各组间有显著差异(P<0.05);生物信息学分析提示miR-23b可能涉及转化生长因子β(TGF-β)、Notch、Wnt信号通路。结论 :miR-23b表达异常可能通过影响心肌细胞的增殖、凋亡、迁移、分化等细胞功能,导致心脏发育缺陷。
- 陈斌顾海涛顾群刘鸿张石江
- 关键词：心脏发育生物信息学
- 荜茇明碱抑制BMP2/pSmad1/5信号减轻高钙高磷诱导的主动脉瓣膜间质细胞钙化被引量：1
- 2020年
- 目的:探究荜茇明碱对高钙高磷诱导的主动脉瓣膜间质细胞(aortic valve interstitial cell,AVIC)钙化的保护作用及其机制。方法:体外培养原代猪AVIC,通过高钙高磷诱导钙化并给予不同浓度荜茇明碱处理16 h后,流式细胞仪分析检测凋亡水平;AVIC在高钙高磷条件下,以2.5 mmol/L荜茇明碱或100 ng/mL骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP2)处理,通过检测钙浓度、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性、茜素红染色反映钙化程度;Western blot、real-time PCR检测成骨相关蛋白和m RNA的表达。结果:①流式细胞分析发现,高钙高磷条件下,荜茇明碱低于5 mmol/L无明显促凋亡作用;②钙浓度、ALP活性、茜素红染色显示,2.5 mmol/L荜茇明碱显著抑制高钙高磷诱导的AVIC钙化;③Western blot、real-time PCR显示,2.5 mmol/L荜茇明碱抑制BMP2、p Smad1/5、RUNX2蛋白和mRNA的表达;④外源性重组BMP2可逆转荜茇明碱抗钙化的作用。结论:荜茇明碱通过抑制BMP2/pSmad1/5/RUNX2信号,减轻高钙高磷诱导的AVIC钙化。
- 唐诗孙伟孔祥清盛燕辉
- 关键词：瓣膜钙化
