国家自然科学基金(30870515) 作品数:6 被引量:11 H指数:2 相关作者: 黄河清 胡晓慧 林青 金宏伟 季学涛 更多>> 相关机构: 厦门大学 香港浸会大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家重点基础研究发展计划 更多>> 相关领域: 生物学 理学 更多>>
不同等电点的魟鱼肝铁蛋白释放铁速率的比较研究 2008年 选用热变性法、离子交换层析技术和聚丙烯酰胺凝胶电泳技术(PAGE)小批量制备电泳纯魟鱼肝铁蛋白(Liverferritin ofDasyatis akajei,DALF)和黄牛胰脏铁蛋白(Scalper pancreas ferritin,SPF).等电聚胶电泳技术指出,DALF和SPF分别显示3和2条不同等电点铁蛋白层析带,推测这一现象与铁蛋白含铁量无关,与各自蛋白壳H和L亚基分布不同且形成不同表面电荷有关.不同等电点且相同含铁量的DALF,表现出不同的释放铁速率,其释放铁全过程均可分为快速和慢速阶段,符合一级反应动力学规律.铁蛋白可通过自身蛋白壳H和L亚基分布和相互作用强度的差异性,产生不同的柔性调节作用,控制不同释放铁的速率. 朱锋 陈盈盈 胡晓慧 林志超 王群力 黄河清关键词:等电点 动力学 反应温度和pH影响魟鱼肝铁蛋白释放铁速率的研究 被引量:2 2008年 小批量制备电泳纯魟鱼肝铁蛋白(liver ferritin of Daryatisakajel,DALF).在不同反应温度和pH条件下,研究温度和pH对DALF释放铁速率、动力学和级数转换特性的影响.实验结果表明,随着反应温度递增(30-45℃),DALF释放铁的速率明显不同,但DALF释放铁的全过程均呈复杂途径.通过提高反应温度和增加释放铁的速率途径均无法使DALF释放铁的途径由复杂转换为简单.不同pH的反应介质直接影响DALF释放铁的速率,在弱酸介质中,DALF释放铁的速率明显高于在弱碱介质中.在pH5.0条件下,DALF以一级反应动力学的全过程途径释放铁,使释放铁的复杂途径趋于简单化.在生理pH或中性介质条件下,铁蛋白亚基之间相互作用强度起着控释DALF释放铁速率且表现出复杂动力学特性. 胡晓慧 陈旭 黄清育 金宏伟 黄河清关键词:铁蛋白 PH 动力学 鲨鱼肝铁蛋白亚基解离与组装机理的研究 被引量:2 2010年 小批量制备质谱纯鲨鱼肝铁蛋白(Liver Ferritin of Sphyrna zygaena,SZLF)。在弱酸介质(pH1.0)中,天然电泳结果显示,SZLF蛋白质亚基20 min后开始解离。选用透射电子显微镜跟踪SZLF亚基解离与重组装全过程和蛋白壳与铁核尺寸变化,发现SZLF在亚基酸解离过程中,随着pH值的降低,铁核和蛋白壳的尺寸呈现相同的变化趋势,这种变化趋势可能与铁核内层铁的释放和蛋白壳的解离与去折叠有关。SZLF蛋白壳的重组装过程则是一个快速过程,并且是由松散熔球态向紧密态转变的过程。SZLF由单类型亚基组成,而马脾铁蛋白(Horse Spleen Ferritin,HSF)由H和L两种亚基类型组成。在基质pH3.0条件和激光辅助下,混合HSF和SZLF仍然可释放各自的亚基且形成准亚基离子,供基质辅助激光解析电离飞行时间质谱分析,说明此时SZLF的亚基间相互作用强度减弱但并没有去折叠。TEM技术在铁蛋白解离和重组装过程中的应用,为进一步研究铁蛋白纳米包装的过程和机理提供新颖的、可行的和更加直观的研究手段。 林青 陈平 季学涛 柯才焕 黄河清关键词:铁蛋白 电子显微镜 人胎盘膜铁蛋白同类型双亚基功能、铁核结构和释放铁动力学研究 被引量:2 2011年 以人胎盘组织为实验材料,小批量制备电泳纯人胎盘膜铁蛋白(HPMF),对其结构与功能进行研究。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)技术揭示,HPMF蛋白壳由分子量分别为15 kDa(MF15)和20 kDa(MF20)的亚基组成,其中MF15蛋白含量约为MF20的3倍。经肽质量指纹图谱(PMF)技术鉴定,发现PHMF的MF15和MF20亚基与人铁蛋白(HF)L亚基均具有较高的同源性,提出HPMF由单类型但分子量不同的双亚基组成的新观点。在选用基质辅助电离激光解吸飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术直接分析HPMF亚基稳定性过程中,获得5个质荷比(m/z)值为5071.25,9962.51,15131.55(MF15),19936.40(MF20)和20147.61的特征质谱峰,其对应的亚基分子式分别为[MF15]3+,[MF20]2+,[MF15]+,[MF20]+和[MF20+Fe]+。ICP-MS分析发现,HPMF铁核中的铁和无机磷酸盐(Pi)含量仅为85Fe3+/HPMF和15Pi/HPMF,其中Fe3+/Pi比值约为5.72,明显低于绝大多数哺乳动物铁蛋白,但却高于细菌铁蛋白(BF)。在释放铁动力学方面,HPMF以一级反应动力学途径释放完整铁核中的铁量,其释放时间约需750 min,其释放铁的速率慢于马脾铁蛋白(HSF)和猪胰铁蛋白(PPF)(约60 min)。根据HPMF完全不同于大部分哺乳动物、植物和细菌铁蛋白的新颖结构与功能,提出HPMF在母体和胎儿之间中起着释放、储存和转运铁的复合生理功能的铁转运模型。 罗联忠 金宏伟 蔡宗苇 黄河清MALDI-TOF质谱、电泳和透射电子显微镜技术研究魟鱼肝铁蛋白H和L亚基特性 被引量:3 2009年 小批量制备质谱纯魟鱼肝铁蛋白(liver ferritin of Dasyatis akajei,DALF),以透射电子显微镜术(TEM)测定DALF、蛋白壳和铁核的分子尺寸。SDS-PAGE技术指出,DALF由H和L两种不同类型的亚基组成。采用肽质量指纹图谱(PMF)技术进一步佐证H和L亚基类型和同源性。氧化还原剂中性红、劳氏紫、甲基紫精和pH1.5酸度均无法削弱DALF的H-L和L-L亚基之间的相互作用强度、并解吸出L亚基离子,供MALDI-TOF质谱仪分析。通过增加激光强度和降低基质pH途径,可直接分析DALF的H和L亚基的分子量,指出DALF中H-L和L-L亚基之间的相互作用强度明显高于H-H亚基类型。 黄河清 胡晓慧 方雪萍 曹廷明 孔波关键词:铁蛋白 电镜 质谱 电泳 用圆二色性和荧光光谱技术研究纳米吡啰红G核-铁蛋白的构建机理 被引量:2 2010年 小批量制备了电泳纯鲨鱼肝铁蛋白(Liver ferritin ofSphyrna zygaena,SZLF),对SZLF的结构与功能进行了研究.在pH=2.0~10.0条件下,选用圆二色性(Circular dichroism,CD)光谱技术研究了SZLF和脱铁核SZLF(apoSZLF)二级结构转换的基本特征和变化趋势,揭示了SZLF蛋白壳的亚基稳定性、相互作用强度和去折叠现象.利用酸碱中和方法,解离SZLF蛋白壳亚基,并再次构建成完整SZLF.用紫外-可见分光光度法和荧光光度法研究了构建纳米吡啰红G核-铁蛋白的途径.定量分析结果表明,每分子apoSZLF可捕获12分子吡啰红G于蛋白壳内,构建纳米吡啰红G核-铁蛋白.分析了apoSZLF直接捕获和释放吡啰红G的途径与速率,为后续构建高存量纳米顺铂核-铁蛋白药物载体提供了可行性技术. 陈盈盈 黄琳 季学涛 林青 陈平 柯才焕 黄河清关键词:铁蛋白 光谱分析