国家现代农业产业技术体系建设项目(CARS-42-G11)
- 作品数：36 被引量：133H指数：6
- 相关作者：邵华斌罗青平张腾飞王红琳温国元更多>>
- 相关机构：湖北省农业科学院长江大学华中农业大学更多>>
- 发文基金：国家现代农业产业技术体系建设项目公益性行业(农业)科研专项湖北省农业科技创新中心资助项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- MPN-PCR法定量检测武汉鸡肉制品中的空肠弯曲菌被引量：1
- 2015年
- 空肠弯曲菌（Campylobacter jejuni）是引起人类细菌性腹泻的主要人畜共患病原菌之一,严重时可导致人类格林-巴利综合征。其中鸡肉污染导致的食源性传播是人类感染的重要原因。为了调查武汉市鸡肉制品的空肠弯曲菌污染情况,运用最可能数法（MPN）及聚合酶链式反应（PCR）技术结合,即MPNPCR方法 ,对市场采集的128份鸡肉样品进行了空肠弯曲菌的定量检测,结果阳性检出率为18.75%,其中鲜鸡肉检出率为28.26%,冻鸡肉检出率为13.41%,含菌量范围为3.6-92.0 MPN/g。
- 韩梅董俊邵华斌罗玲罗青平潘玲张腾飞
- 新城疫活疫苗(V4/HB92克隆株)对鹌鹑、鸽临床试验被引量：1
- 2014年
- 应用兽药GMP车间生产的3批新城疫活疫苗(V4/HB92克隆株)中试产品分别在安陆和云梦对7 500只鹌鹑和4 500只鸽进行了临床效力试验。安全试验结果表明,3批疫苗用10倍剂量分别对30日龄的鹌鹑和鸽滴鼻,观察10 d,无任何毒副反应。免疫效力试验分为滴鼻和饮水2种方法,3批疫苗滴鼻免疫3 000只鹌鹑,免疫后2周抗体开始上升,ND-HI达3.9 log2,抗体持续16周;饮水免疫的3 000只鹌鹑,2周抗体为3.1 log2,抗体持续8周。三批疫苗滴鼻免疫1 500只鸽,免疫2周ND-HI抗体达4.1log2,抗体持续8周;饮水免疫的1 500只鸽,免疫后2周抗体为3.8 log2,持续8周抗体仍然为4.1 log2。试验攻毒保护力测定结果与ND-HI抗体水平呈正相关。
- 杨峻王红琳温国元罗青平汪宏才艾地云张蓉蓉罗玲张腾飞邵华斌
- 关键词：新城疫活疫苗鹌鹑
- 致禽肾脏、肠道病变大肠杆菌菌影的制备及其裂解效率的测定
- 2017年
- 为制备高裂解效率的致禽肾脏、肠道病变大肠杆菌菌影,本研究通过编码15个柔性氨基酸linker采用融合PCR法将噬菌体中Φ174的裂解蛋白E基因和金黄色葡萄球菌核酸酶A基因(SN)串联(E-15L-SN),插入温控表达质粒pBV220,构建重组温控双裂解表达质粒(pBV-ES),采用PCR扩增其温控双基因裂解表达盒(DLS-ES)插入E.coli-Pasteurella(大肠杆菌和巴氏杆菌)穿梭质粒pBA1100,构建重组温控双基因裂解穿梭质粒pBA1100-DLS-ES。该质粒可以通过温控制备高裂解率的E.coli和Pasteurella两种菌的菌影。本实验将构建的pBA1100-DLS-ES电转化至致禽肾脏、肠道病变E.coli中,28℃集菌,42℃温控诱导裂解蛋白E和核酸酶A表达。OD_(600nm)值及电镜结果表明,双基因裂解率高于单基因,同时收集菌影时间也比单基因裂解短,42℃诱导2 h含双裂解基因的菌液处理菌体裂解率达到99.9999%,本实验利用菌影形成机制将含青霉素抗性的致禽肾脏、肠道病变E.coli制备成菌影,为新型菌影疫苗的制备提供实验依据。
- 赵星程伊洛卢琴邵华斌杨玉莹罗青平
- 关键词：穿梭质粒
- 新城疫病毒TS09耐热株在BHK细胞上的传代培养被引量：7
- 2012年
- 以新城疫病毒(Newcastle Disease Virus,NDV)TS09耐热株为研究对象,研究了该毒株在幼仓鼠肾传代细胞(BHK细胞)上的培养适应性。通过培养条件的优化、连续传代培养和极限稀释法纯化,获得了一株新的、纯化的、适应BHK细胞的NDV耐热株,命名为TS09-C株。TS09-C株的生物学特性测定结果表明,TS09-C株在BHK细胞中的增殖滴度为107.9TCID50/mL,平均鸡胚致死时间(MDT)大于120 h,脑内致病指数(ICPI)为0。与亲本株TS09株相比,TS09-C株的基因序列发生了较为明显的改变,但TS09-C株与亲本株仍保持着较近的遗传进化关系。
- 温国元商雨郭静杨峻王红琳罗青平张蓉蓉邵华斌
- 关键词：耐热BHK细胞传代
- 禽巴氏杆菌四环素耐药株转录组测序与分析被引量：2
- 2019年
- 为鉴定禽源多杀性巴氏杆菌(avian Pasteurella multocida,Pm)四环素(Tetracycline,Tet)敏感株与耐药株(MIC=32μg/mL)在转录组水平上的差异,本研究采用RNA-seq技术对Tet敏感株与耐药株进行双向测序,通过GO、KEGG和ARDB数据库对表达差异基因进行注释和富集性分析。结果显示,共筛选出442个差异表达基因,其中包括103个上调基因和339个下调基因。通过GO功能富集分析显示差异表达基因多数富集于核糖体结构成分、rRNA结合、跨膜运输和离子转运等生物过程;对差异表达基因进行信号通路富集性分析,大多数差异表达基因分布在ABC转运蛋白与核糖体代谢途径中;对差异表达基因进行耐药基因注释(ARDB),发现其中的耐药基因主要为核糖体保护蛋白和外排系统两类。本研究表明禽源Pm对四环素耐药的耐药机制可能与细胞膜上ABC转运蛋白的过量表达以及核糖体保护蛋白有关。
- 孔令严汪最邵华斌邵华斌卢琴张腾飞
- 关键词：转录组测序
- 新城疫病毒耐热弱毒TS09-C株反向遗传操作系统的建立被引量：3
- 2014年
- 为了建立新城疫病毒(NDV)耐热弱毒株的反向遗传操作平台,以NDV TS09-C耐热弱毒株为研究对象,构建了TS09-C株的全长c DNA克隆质粒和3个分别表达NP、P和L的辅助质粒。通过4个质粒共转染预感染有表达T7 RNA聚合酶的痘病毒的BHK-21细胞,拯救出了重组病毒r TS09-C株。生物学特性试验结果表明,重组病毒r TS09-C株具有与亲本株相似的耐热、弱毒和细胞增殖特性。NDV耐热毒株反向遗传操作系统的建立为耐热活疫苗载体的研究,进一步研发新型多联(多价)耐热禽用活疫苗提供了技术平台,也为耐热机理的研究打下基础。
- 温国元郭静商雨陈晨王红琳罗青平张蓉蓉王宏才张腾飞杨峻程国富邵华斌
- 关键词：耐热反向遗传操作
- 不同品种鸡源J亚群禽白血病毒株致肿瘤差异性研究
- 2014年
- 选取不同品种鸡群的J亚群白血病病毒代表毒株分别感染SPF鸡和地方鸡,记录分析感染鸡的临床症状、产生肿瘤时间。结果表明,商品蛋鸡源毒株对SPF鸡和地方鸡致肿瘤时间均早于地方鸡源毒株,感染SPF鸡后出现肿瘤症状比例和死亡率分别为42.7%和11.3%,远高于地方鸡源毒株的19.3%和4.7%。感染地方鸡鸡后出现肿瘤症状比例和死亡率分别为26%和8%,远高于地方鸡源毒株的9%和3.3%。可见这两类不同来源毒株致肿瘤特性差异显著,商品蛋鸡源毒株致肿瘤性明显强于地方鸡源毒株。
- 罗青平张蓉蓉温国元张腾飞王红琳艾地云汪宏才罗玲李兰珍邵华斌
- 关键词：J亚群禽白血病病毒不同品种鸡
- 鸡源大肠杆菌喹诺酮类药物耐药基因的检测与分析被引量：1
- 2016年
- 为了解湖北地区鸡源大肠杆菌喹诺酮类耐药基因（PMQR）的流行现状与耐药表型的相关性，采用纸片扩散法对2014～2015年分离的54株鸡源大肠杆菌临床分离株进行7种喹诺酮类药物体外敏感性测定，通过PCR检测qnrA、qnrB、qnrS基因，对基因检测阳性株进行I类整合子检测。结果：54株鸡源大肠杆菌对萘啶酸、依诺沙星、洛美沙星、培氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星、左旋氧氟沙星耐药率分别为72．2％、53．7％、53．7％、51．8％、50．0％、44．4％和22．2％；54株鸡源大肠杆菌中，10株（18．5％）检出qnrA基因，未检出qnrB、qnrS基因，且qnrA基因阳性株I类整合子为阳性。结果表明，湖北地区鸡源大肠杆菌对兽医临床常用的喹诺酮类药物耐药严重，且存在质粒介导喹诺酮类耐药基因qnrA的流行，而qnrA基因与I类整合子具有相关性，应加强监测。
- 艾地云罗玲张腾飞王红琳温国元邵华斌
- 关键词：大肠杆菌喹诺酮耐药质粒介导
- 肠出血性大肠杆菌O157:H7 intimin蛋白单克隆抗体的制备与鉴定被引量：1
- 2013年
- 本试验选择肠出血性大肠杆菌O157∶H7 LEE毒力岛上的eae基因原核表达产物intimin作为抗原免疫BALB/c小鼠,经过细胞融合和4次亚克隆后获得了5株杂交瘤细胞,分别命名为1E8、2B11、3B6、4C10、5D5,效价均在1∶128 000以上.杂交瘤细胞的染色体结果显示5株杂交瘤细胞的染色体数目在90～100条之间.Western blotting鉴定结果表明所制备的单克隆抗体能特异性识别肠出血性大肠杆菌O157：H7 intimin蛋白.间接免疫荧光显示单抗能够与肠出血性大肠杆菌O157∶H7表面抗原结合,荧光镜下可见明显绿色荧光.交叉试验结果显示制备的5株单克隆抗体均不与鸡的其它血清型大肠杆菌（O1、O2、O78、O157）及鸡白痢沙门菌等发生交叉反应,确定为肠出血性大肠杆菌O157∶H7特异性单克隆抗体.
- 罗玲罗青平艾地云王红琳张腾飞邵华斌
- 关键词：肠出血性大肠杆菌单克隆抗体
- 47株空肠弯曲菌湖北禽源株的多位点序列分型被引量：5
- 2016年
- 【目的】为了解湖北地区家禽空肠弯曲菌的流行状况及其分子特征,应用多位点序列分型方法对2013–2014年的47株禽源空肠弯曲菌湖北分离株进行分子分型研究。【方法】以空肠弯曲菌的7个管家基因aspA、glnA、gltA、glyA、pgm、tkt和uncA为目的基因,提取样本基因组后PCR扩增,测序和分析。将测序结果上传数据库进行比对,制作成多位点序列分型(Multilocus sequence typing,MLST)遗传进化树。【结果】分离株共有38个ST型,10个克隆群,其中最多的克隆群为ST-353CC和ST-464CC,发现2个新的等位基因编号和25个新的ST型。遗传进化树显示,不同家禽宿主中空肠弯曲菌序列型存在一定的差异,不同地区和来源的空肠弯曲菌呈现出遗传多样性。【结论】本研究对湖北分离的47株禽源空肠弯曲菌进行了MLST分析,其结果显示菌株多样性较为丰富,将为我国家禽空肠弯曲菌的流行病学调查提供科学的数据。
- 董俊韩梅周康罗青平邵华斌张腾飞
- 关键词：空肠弯曲菌多位点序列分型
