天津市自然科学基金(06YFJZJC00800)
- 作品数：3 被引量：5H指数：2
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- 可磷酸化短肽偶联壳聚糖促进CS/DNA转染效率被引量：3
- 2010年
- 合成基序为LLLRRRDNEY*FY*VRRLL的短肽(pSP),其中含有两个可被JaK2蛋白激酶磷酸化的酪氨酸残基.将此短肽与壳聚糖(CS)相偶联,体外磷酸化及DNA释放实验检测哺乳动物细胞裂解液对短肽的磷酸化及pSP-CS/DNA复合物中DNA释放的影响.放射性标记DNA转移实验验证pSP-CS/DNA复合物的入胞能力后,将荷荧光素酶或GFP报告基因的质粒与pSP-CS制成pSP-CS/DNA复合物,转染体外培养的C2C12小鼠成肌细胞,观察GFP的分布及细胞裂解液中的荧光素酶活性以表征转染效率.继而进行多种细胞系的转染,衡量pSP偶联的壳聚糖对不同种属细胞的转染效率.结果表明,哺乳动物细胞裂解液可有效地使短肽发生磷酸化,并藉此促进DNA与壳聚糖载体的解离.以pSP修饰的壳聚糖进行转染时,细胞裂解液的荧光素酶活性可达普通壳聚糖转染的两倍,细胞中GFP的含量也明显增加.据此推论,短肽被磷酸化后产生电荷属性的改变,促进DNA与壳聚糖载体的解离从而显著提高壳聚糖的转染效率.
- 任玉平赵荣兰孙蓓孙蓓梁东春
- 关键词：短肽磷酸化壳聚糖解离转染效率
- 可磷酸化底物肽促进基因转染效率的研究
- 2010年
- 目的进一步探讨可磷酸化碱性短肽提高短肽作为基因转移载体的转染效率。方法合成基序为LLL-RRRDNEY*FY*VRRLL的短肽(SP),以体外磷酸化实验观察哺乳动物细胞裂解液使SP磷酸化并促进SP/DNA复合物种DNA的释放。以荷荧光素酶报告基因的SP/DNA复合物转染C2C12细胞,观察转染效率。结果细胞裂解液可有效地使可磷酸化短肽发生磷酸化,并促进DNA与SP的解离。可磷酸化短肽对C2C12细胞的转染效率显著高于不可磷酸化短肽。结论可磷酸化短肽可以显著提高短肽的转染效率,外源DNA与SP载体在细胞内的解离情况对SP/DNA复合物的转染效率具有重要影响。
- 曹晓娜任玉萍赵荣兰梁东春
- 关键词：短肽磷酸化解离转染
- CS/igf-1基因复合物促骨髓基质细胞增殖及分化的研究被引量：2
- 2008年
- 目的:研究壳聚糖/igf-1基因(CS/igf-1)复合物对体外培养的骨髓基质细胞(MSC)分化及增殖的影响。方法:自大鼠股骨及胫骨组织中分离培养大鼠骨髓基质细胞,以含有人igf-1基因cDNA的哺乳动物表达载体pTRacer-igf-1与壳聚糖制备成CS/igf-1复合物加入细胞培养基中进行干预;另设空白细胞组、CS/空质粒干预组及单纯CS干预组作为对照。3H-TdR掺入法、甲苯胺兰染色分别检测细胞的增殖情况及成软骨活性。结果:与空白对照细胞相比,壳聚糖可使所培养的骨髓基质细胞表现出明显的成软骨活性。igf-1基因的参与则可显著促进细胞的增殖。结论:CS/igf-1复合物可促进对体外培养的骨髓基质细胞增殖并向成软骨细胞分化。
- 赵荣兰左爱军梁东春张镜宇
- 关键词：骨髓细胞细胞分化软骨细胞
