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Hfq对霍乱弧菌环境适应能力的影响及相关基因的转录调控被引量：2: 2013年; 目的通过表型实验分析Hfq蛋白对霍乱弧菌环境适应能力的影响，并通过分子实验验证Hfq对环境生存及致病相关基因转录的调控。方法基于自杀质粒缺失霍乱弧菌的hfq基因，并构建相应回补株；通过表型实验，比较霍乱弧菌野生株和hfq突变株在细菌运动能力、生物膜形成、外膜抗性和氧化应激能力上的差异；应用逆转录荧光定量PCR（RT-qPCR）技术对Hfq可能调控的相关基因的转录水平进行比较。结果成功构建霍乱弧菌hfq缺失株及回补株，表型实验表明hfq突变株的菌株游动性降低，生物膜形成能力增强，对十二烷基磺酸钠（SDS）和庆大霉素的耐受性显著下降，并且与野生株相比，hfq突变株对H2O2刺激更为敏感。RT-qPCR实验证明Hfq对霍乱弧菌鞭毛合成、胞外多糖合成、外膜蛋白以及氧化应激相关基因的转录有调控作用。结论Hfq蛋白作为RNA伴侣分子，能够通过调控一些生存及致病相关基因的转录进而影响霍乱弧菌的生物膜形成、氧化应激反应、抗生素抗性等能力，表明Hfq可能与其他调控子一起，在霍乱弧菌的生存、代谢以及致病因子转录的协调控制上起关键作用。; 陈秀琴闫志勇李杰王瑞白闫梅英阚飙高鹤; 关键词：霍乱弧菌 HFQ 环境适应转录调控

利用优化的5′-RACE实验定位副溶血弧菌基因的转录起始位点被引量：2: 2014年; 目的:优化5′-cDNA末端快速扩增(5′-RACE)实验平台,用于定位副溶血弧菌(VP)基因的转录起始位点。方法:提取VP的总RNA,用rDNaseⅠ消化去除可能污染的基因组DNA;利用T4 RNA连接酶将已知序列的寡核苷酸片段连接至RNA的5′端,进而将其逆转录成cDNA;以cDNA为模板,采用巢式PCR技术扩增目的基因DNA片段,并将其直接克隆入T载体;最后通过测序比对的方法确定靶基因的转录起始位点。利用引物延伸实验进一步研究VPA1027的转录起始位点,以检验5′-RACE实验结果的可靠性。结果:5′-RACE实验结果表明,VPA1027、scrG、scrA、cpsA及VPA0198的转录起始位点分别为G(-103)、G(-70)、T(-205)、C(-129)和G(-238)(翻译起始位点为+1);引物延伸结果显示,VPA1027的转录起始位点也为G(-103)。结论:优化后的5′-RACE实验可以精确定位VP基因的转录起始位点。; 李杰张义全高鹤王丽胡小许周冬生; 关键词：副溶血弧菌转录起始位点

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中国疾病预防控制中心青年科研基金(2012A103)