贵州省自然科学基金(J[2006]082)
- 作品数：2 被引量：5H指数：2
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- 兔角膜缘干细胞的形态学研究被引量：2
- 2009年
- 目的探讨兔角膜缘干细胞(limbal stem cells,LSCs)的形态学特征、数量及分布。方法健康成年新西兰大耳兔30只,体质量2.0～2.5kg,雌雄不分,取双侧眼球,常规石蜡切片,HE染色及免疫组化p63染色显示角膜缘一般特征及LSCs的分布,并用BioMias图像分析软件对LSCs进行计数。另外取3只兔眼角膜缘制作超薄切片,透射电镜观察。结果①角膜缘上皮细胞排列紧密,层数较多,基底层细胞呈矮柱状或立方形,核大而圆,位于细胞中央,着色较深。LSCs(p63阳性细胞)呈矮柱状或立方形,多位于角膜缘上皮基底层,在角膜缘浅层及角膜边缘有少量分布,在角膜中央上皮未见LSCs出现。②透射电镜观察LSCs核较大,形状不规则,核内常染色质较多,异染色质散在分布,未凝集成块。细胞质少,含较丰富的游离核糖体,其他细胞器少,细胞间可见较多的缝隙连接。③图像分析显示高倍镜视野下角膜缘上皮LSCs数量为(35.25±8.93)个。结论①LSCs具有原始细胞的超微结构特征,与其他干细胞形态相似。②LSCs主要位于角膜缘上皮基底层,在角膜缘浅层上皮及角膜边缘上皮内也有少量LSCs存在,在中央角膜上皮未见LSCs分布。
- 苏敏郑琳许庭良李红胡蓉黄悦
- 关键词：角膜缘干细胞形态学P63超微结构
- 兔角膜缘干细胞的体外培养、鉴定及形态学特点被引量：3
- 2010年
- 目的体外培养兔角膜缘干细胞(limbal stem cells,LSCs),观察其生物学特性。方法用含20%胎牛血清DMEM:F12(1:1)培养基对兔LSCs进行体外培养,倒置显微镜及HE染色观察培养细胞体外生长的形态,免疫细胞化学AE5和P63染色鉴定并进行图像分析,透射电镜观察超微结构特点。结果培养2～3d细胞从组织块游出,6～8d形成良好的单层,细胞多呈圆形或卵圆形。电镜观察,培养7dLSCs呈卵圆形,表面有少量微绒毛突起;胞质内细胞器少,核大,核仁明显,核浆比例大,部分细胞可见双核现象。免疫组化观察,培养第7天,大量细胞AE5免疫反应染色呈阴性,阳性细胞数量较少,大量细胞P63免疫反应染色呈阳性;培养第14天,AE5阳性细胞数明显增多,免疫反应染色增强,阳性细胞的平均灰度值显著降低(7d:184.30±9.85,14d:133.36±25.00,P<0.01)。P63免疫反应阳性细胞数第14天与第7天相比明显减少,而阳性细胞的平均灰度值显著增高(7d:108.13±17.96,14d:177.59±7.86,P<0.01)。结论应用组织培养方法获得的原始细胞具有与体内正常LSCs相一致的形态特征;培养第7天为LSCs生长的峰值期。
- 苏敏肖莉黄悦胡蓉李红
- 关键词：角膜缘干细胞细胞培养体外生物学特性
