国家自然科学基金(31371174)
- 作品数：17 被引量：46H指数：4
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- 兔抗小鼠含SET结构域(赖氨酸甲基转移酶)8(Setd8)多克隆抗体制备和应用被引量：8
- 2017年
- 目的在大肠杆菌表达小鼠含SET结构域(赖氨酸甲基转移酶)8(Setd8)蛋白并制备兔抗Setd8多克隆抗体。方法将p GADT7-Setd8质粒和p ET-30a载体分别双酶切后连接、转化和鉴定,构建p ET-30a-Setd8原核表达质粒。将p ET-30a-Setd8质粒转化到E.coli BL21中,用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达,通过镍亲和层析柱进行蛋白纯化。应用纯化的Setd8蛋白免疫新西兰大白兔,获得Setd8多克隆抗体。利用ELISA、Western blot法及免疫组织化学染色法对所得多克隆抗体进行效价测定及特异性鉴定。结果应用限制性内切酶双酶切后电泳及序列测定法,成功构建的p ET-30a-Setd8重组质粒在大肠杆菌中IPTG诱导下能够高效表达重组Setd8蛋白。免疫获得的多克隆抗体经ELISA检测其抗体效价为1∶1 000 000,Western blot法结果显示制备的多克隆抗体能特异性识别细胞和组织中的Setd8蛋白,免疫组织化学染色法显示多克隆抗体识别的Setd8主要表达于成年小鼠睾丸组织中的精原细胞。结论成功获得较高纯度Setd8蛋白,制备的Setd8多克隆抗体具有较高反应性和特异性。
- 马海涛郭佳倩夏静牛长敏申雪沂孙红亚郑英
- 关键词：多克隆抗体
- 生精细胞发育相关lncRNA的研究进展被引量：2
- 2016年
- 精子发生包括精原细胞的增殖分化、精母细胞减数分裂及圆形精子细胞形态学改变。每一个过程都受到各种转录因子、基因或信号通路的高度调控。近年来，由于深度测序技术的进步，使我们对转录复杂性的认识从以mRNA为中心跳跃到一个高度保守的非翻译转录组——非编码RNA（ncRNA）。
- 夏静郑英
- 关键词：生精上皮精子发生
- mTOR信号通路在生精细胞发育中的作用
- 2016年
- 精子发生是指精原细胞经过一系列分裂分化演变为精子的过程,包括精原干细胞的增殖及其子细胞分化、精母细胞的减数分裂和精子形成三个阶段。许多研究表明mTOR信号通路参与精子发生的各个阶段。本文主要就mTOR信号通路在生精细胞发育的不同阶段中的作用做一综述。
- 夏静牛长敏马海涛申雪沂王建军郑英
- 关键词：哺乳动物雷帕霉素靶蛋白生精细胞信号通路精子发生
- 小鼠Setd8截短片段真核表达载体的构建及鉴定被引量：1
- 2015年
- 目的构建小鼠Setd8第1-214aa的截短片段p CMV-HA-Setd8NO.214真核表达载体,并在293T细胞中验证其表达。方法利用PCR方法扩增出Setd8的截短片段Setd8NO.214基因片段,通过酶切将其定向插入到p CMV-HA载体中,构建真核表达质粒p CMV-HA-Setd8NO.214,通过限制性内切酶酶切和DNA测序鉴定正确后,应用脂质体转染法转染入293T细胞中,应用Western blot鉴定蛋白的表达。结果酶切电泳及测序结果证明,构建的真核表达质粒p CMAHA-Setd8NO.214序列正确无误,Western blot法证明了Setd8NO.214蛋白能够高效表达。结论成功构建了p CMV-HASetd8NO.214真核表达载体,并证明了其在真核细胞293T中的表达,为进一步研究Setd8在真核细胞中的功能提供了前提基础。
- 郭佳倩牛长敏马海涛马仕昆郑英
- 关键词：真核表达
- SET8在细胞周期中的研究进展被引量：1
- 2015年
- SET8是现今发现唯一能够特异性单甲基化组蛋白H4第20位赖氨酸(H4K20)的赖氨酸甲基转移酶。单甲基化H4K20和SET8的含量在细胞周期的不同时相中发生动态变化,这种动态变化调节了细胞周期的进程。在G1/S过渡期SET8通过泛素E3连接酶SCF/skp2复合物泛素化而降解。SET8和单甲基化H4K20在S期处于低表达,这与E3泛素连接酶复合物CRL4cdt2高活性有关。SET8和单甲基化H4K20的表达在G2/M期达到高峰。主要是由于SET8的S29磷酸化抑制了SET8的降解。SET8的异常表达会导致细胞周期阻滞。
- 郭佳倩马仕昆郑英
- 关键词：细胞周期
- Stra8在精子发生中的研究进展被引量：5
- 2015年
- Stra8基因的表达具有发育阶段性,且仅表达于减数分裂前的生殖细胞,它在生殖细胞的胞质和胞核中进行穿梭。视黄酸是维生素A的一种代谢产物。视黄酸可促进生殖细胞中Stra8基因的表达。维生素A缺乏小鼠精子发生停滞,生殖细胞退化,雄性小鼠不能生育。目前对于Stra8表达调控的研究主要集中在其与视黄酸相互作用的机制,但Stra8在精子发生中的分子调控机制尚未完全阐明。
- 马仕昆郭佳倩郑哲王建军郑英
- 关键词：生殖细胞视黄酸
- 小鼠精子顶体形成相关基因研究进展被引量：4
- 2016年
- 精子变形是一个复杂的细胞分化和形态学变化过程,顶体形成是其中的一个步骤。顶体是精子头部的重要组成部分,其形成过程包含4个阶段:高尔基体阶段、顶帽阶段、顶体和成熟阶段,其每一步都受多种基因调控。高尔基体阶段的调控基因有GOPC、Hrb、SPATA16、PICK1、CK2α'等,顶帽阶段的调控基因有Fads2、syntaxin 2、Kdm3a及UBR7等;顶体及成熟阶段的调控基因有KIFC1、Rnf19a及DPY19L2等。这些基因的异常会影响核致密层以及顶体锚定体盘与核膜之间的连接,囊泡的融合及运输,最终影响男性的生育能力。本文着重对顶体形成各阶段相关基因的研究进展进行了综述。
- 牛长敏郭佳倩马海涛郑哲郑英
- 关键词：基因小鼠
- 黏蛋白在良、恶性子宫颈病变中的表达及其临床意义被引量：6
- 2015年
- 采用免疫组织化学技术检测黏蛋白(MUC)1、MUC2、MUC4、MUC5AC和MUC20在158例良、恶性宫颈病变中的表达,并探讨其临床意义。结果表明:1正常宫颈上皮高表达MUC1、MUC4和MUC5AC,部分表达MUC20,正常和良性宫颈组织不表达MUC2。2从慢性宫颈炎→宫颈上皮内瘤变→宫颈鳞癌,MUC1、MUC4和MUC20表达差异显著(P<0.05)。与正常宫颈相比,宫颈腺癌中MUC2表达增加(P<0.05),且MUC1和MUC5AC表达减少(P<0.05)。3在宫颈鳞癌中,MUC1的表达与癌组织的浸润深度和临床分期有关(P<0.05);MUC4和MUC20的表达与其分化程度和临床分期有关(MUC4,P<0.05;MUC20,P<0.01)。4 MUC1、MUC4和MUC20三者呈显著相关(P<0.05)。黏蛋白可能参与宫颈癌的发生发展,其在宫颈良性病变和宫颈癌的表达不同,有利于宫颈不同组织类型的鉴别诊断和预后判断。
- 丁丽娟贺莉娜郑英孔祥
- 关键词：黏蛋白宫颈上皮内瘤变宫颈鳞癌宫颈腺癌
- 雄性小鼠联会复合体的研究进展被引量：1
- 2016年
- 联会复合体（synaptonemal complex，SC）是同源染色体之间具有三级结构的阶梯状聚合亚蛋白复合体，大部分由减数分裂特异性蛋白组成，联会复合体的装配开始于第一次减数分裂前期早期。
- 申雪沂牛长敏郭佳倩马海涛夏静郑英
- 关键词：联会复合体减数分裂精子发生
- 子痫前期患者血浆YKL-40、IL-18和CRP水平变化及临床意义被引量：5
- 2013年
- 选近3年40例健康孕妇和35例子痫前期患者,其中轻度子痫前期20例,重度子痫前期15例。采用夹心酶联免疫法检测血浆甲壳质酶蛋白-40(YKL-40)和白细胞介素-18(IL-18)水平;透射比浊法检测血清C反应蛋白(CRP)水平。通过分析子痫前期患者及正常孕妇血浆YKL-40、IL-18及CRP水平,探讨子痫前期的发生及严重性与炎症关系。结果表明:血浆YKL-40、IL-18和CRP水平在子痫前期孕妇明显高于正常孕妇(P<0.05);血浆YKL-40和IL-18水平在重度子痫前期孕妇明显高于轻度子痫前期孕妇(P<0.05);在重度子痫前期孕妇CRP水平与轻度子痫前期孕妇相比无明显差异(P>0.05)。YKL-40、IL-18和CRP水平在子痫前期明显升高,YKL-40和IL-18水平与子痫前期疾病的严重性相关。
- 孔祥卢丹赵群王志学
- 关键词：子痫前期YKL-40IL-18CRP
