国家高技术研究发展计划(2006AA10Z317)
- 作品数：15 被引量：78H指数：6
- 相关作者：田洪涛罗云波李晨谷新晰郭兴华更多>>
- 相关机构：中国农业大学河北农业大学中国科学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划河北省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程生物学医药卫生更多>>
- 植物乳杆菌LB-B1产细菌素发酵条件的优化被引量：6
- 2010年
- 为提高分离自新疆传统发酵乳制品酸马奶中植物乳杆菌LB—B1产细菌素的能力，对其产细菌素的发酵条件进行了优化，分别研究了培养条件（时问、温度、培养基初始pH值）和培养基成分对细菌素产量的影响。通过单因素试验和正交试验，确定产植物乳杆菌LB-B1的最佳培养条件为37℃静置培养20h，培养基初始pH值为6～7；最佳培养基成分组合为葡萄糖30g／L、胰蛋白胨10g／L、牛肉膏10g／L、酵母粉5g／L、无水乙酸钠5g／L、柠檬酸铵2g／L、磷酸氢二钾2g／L、硫酸镁0．28g／L、硫酸锰0．25g／L、吐温－804mL／L。在优化发酵条件下，植物乳杆菌LB－B1产细菌素高达10240AU／mL，提高了3倍。
- 谢英覃倩倩张京声张列兵郝彦玲
- 关键词：细菌素发酵条件
- 1种快速高效提取乳酸菌质粒的方法被引量：8
- 2014年
- 根据碱裂解提取大肠杆菌质粒的原理与程序,借鉴Anderson和O’Sullivan的乳酸菌质粒提取方法,使酶解破壁和碱破膜变性相结合,通过优化乳酸菌质粒提取中酶浓度、酶解时间、质粒沉淀条件,提出1种高效提取乳酸菌质粒的方法。在此基础上,分析并检验该方法提取乳酸菌质粒的适用性、效率和质粒质量。结果表明：采用该方法可提取乳球菌及乳杆菌中的质粒,所提取的乳酸菌质粒不受质粒大小及拷贝数高低的影响,乳酸菌质粒的检出率和提取的成功率显著提高;提取的乳酸菌质粒达到DNA纯化后的水平,可用于酶切等分子生物学操作。操作实践表明：该方法适合乳酸菌质粒的小量提取（1.5~2 mL菌液）到中量提取（10 mL菌液）;其操作周期与大肠杆菌质粒提取检测彼此相当,而比Anderson和O’Sullivan提取检测乳酸菌质粒缩短3~4 h。本文还就乳酸菌质粒提取中的主要原理及注意事项进行探讨,以期为进一步开发乳酸菌质粒分离纯化试剂盒提供理论依据。
- 张波李晨董慧寇田田许文涛田洪涛罗云波
- 关键词：乳酸菌
- 利用组成型表达载体pMG36e电转化德式乳杆菌保加利亚亚种的研究被引量：8
- 2011年
- 以典型的乳酸菌组成型表达质粒pMG36e为载体,德式乳杆菌保加利亚亚种为受体,采用电转化方法研究受体菌株的生长状态与细胞壁处理方式、质粒浓度、电转化参数、复苏培养基组成与复苏培养时间、受体菌株的限制修饰作用对电转化效率的影响,探讨电转化的最适条件,以提高电转化效率。结果表明:选择含2.5%甘氨酸的SMRS培养基培养受体细胞至对数中期,收获制成感受态细胞,在电场强度12kV/cm、电阻200Ω、电容25μF条件下电击转化,以含20mmol/LMgCl2、CaCl2的SMRS培养基复苏培养2h,涂板筛选得到较高的电转化效率。特别是采用受体菌株修饰的质粒进行电转化,转化效率提高30倍以上,达到6.3×104cfu/μgDNA。本研究结果为进一步构建乳酸菌组成型高效表达系统和食品级基因工程乳酸菌株提供试验依据。
- 郭红敏谷新晰张玉兰田洪涛郭兴华罗云波
- 关键词：电转化
- 德式乳杆菌保加利亚亚种thyA基因缺陷型菌株的构建被引量：4
- 2015年
- 目的:获得由插入序列ISS1构建的德式乳杆菌保加利亚亚种胸腺嘧啶合成酶thy A基因缺陷型菌株。方法:利用两端带有ISS1的载体p Ghost9:ISS1,经复制型转座构建突变体,以50μg/m L脱氧胸苷、梯度浓度三甲氧苄胺嘧啶(TMP)连续富集传代培养,以添加终质量浓度50μg/m L脱氧胸苷的SA平板以及未添加脱氧胸苷的SA平板筛选thy A基因缺陷型菌株。结果:获得生物学性状稳定,回复突变率低的thy A基因插入突变株。
- 李晨郭鑫卢海强田晶晶谷新晰田洪涛罗云波
- 关键词：PTHYA基因插入突变
- 鼠李糖乳杆菌原生质体制备与再生被引量：3
- 2015年
- 目的:以鼠李糖乳杆菌为试验菌株,探究其原生质体制备和再生的影响因素。方法:从菌龄、前处理、溶菌酶浓度及酶解时间等方面研究其对鼠李糖乳杆菌原生质体制备的影响。通过正交试验获得鼠李糖乳杆菌原生质体制备的最优组合,通过添加不同再生稳定剂确定鼠李糖乳杆菌原生质体再生的最适条件。结果:菌龄7 h,以1.5%的甘氨酸和0.5 mol/L蔗糖进行前处理,溶菌酶浓度30 mg/m L、酶解时间60 min,在此条件下进行试验原生质体形成率可达97%;同时,以蔗糖作为再生稳定剂的RM1再生培养基,可实现33.8%的原生质体再生率。结论:为实现鼠李糖乳杆菌原生质体转化以及乳酸菌遗传育种提供了技术支持。
- 杨子萱李晨卢海强田晶晶谷新晰田洪涛罗云波
- 关键词：鼠李糖乳杆菌原生质体
- 利用内源性插入序列IS1构建thyA缺陷型大肠杆菌
- 2014年
- 为获得由大肠杆菌内源性IS1序列插入胸腺嘧啶合成酶基因thyA而产生的胸腺嘧啶营养缺陷型的菌株,利用4%的葡萄糖和1.25μg/mL链霉素的培养基提高IS1的插入频率,以三甲氧苄胺嘧啶(TMP)法定向筛选thyA缺陷型菌株。通过PCR扩增与DNA测序分析突变基因的结构;测定thyA缺陷型菌株在含或不含胸腺嘧啶的基础培养基上的生长曲线以研究其生长特性;转化大肠杆菌-乳酸菌穿梭载体衍生的含外源thyA基因的互补质粒pMG36e-thyA,采用抗生素抗性基因与质粒上互补的thyA基因两种方法筛选转化子,检测突变菌株在基础培养基上的恢复生长情况。诱导增加IS1的转座频率后,以含3μg/mL的TMP的GSCTt筛选培养基得到thyA缺陷型菌株,将该菌株命名为D8。PCR扩增结果显示,该突变株的thyA基因比正常基因长约800bp,测序结果显示该基因内部插入了完整的IS1序列。D8菌株需依赖外源胸腺嘧啶才能在基础培养基上生长,当转化入pMG36e-thyA后,可利用质粒上的互补基因恢复在基础培养基上的生长性能。大肠杆菌内源性插入序列IS1可插入thyA内部使该基因沉默,为利用内源性插入序列构建缺陷型菌株提供了科学基础。
- 董慧李晨谷新晰寇田田郭鑫田洪涛罗云波
- 关键词：大肠杆菌突变
- 利用组成型表达载体pMG36e电转化乳酸乳球菌ML23的研究被引量：7
- 2010年
- 为了探明乳酸菌电转化的最适条件,提高电转化效率,本试验以大肠杆菌-乳酸菌穿梭型质粒pMG36e为载体,以乳酸乳球菌ML23为受体,利用电转化方法研究了受体菌株的生长状态与细胞壁处理方式、质粒浓度、电场强度、复苏培养基组成与复苏培养时间、受体菌株的限制修饰作用对电转化效率的影响。结果表明:含2%甘氨酸和0.5 mol/L蔗糖的MRS培养基培养至对数生长中期的细胞,在电场强度11.0 kV/cm、电阻200Ω、电容25μF下电击转化,转化后细胞在SMRS培养基中培养2 h,获得了较高的电转化效率。采用受体菌株修饰的质粒进行电转化,转化效率又提高了15倍以上,达1.05×105CFU/μg DNA。
- 张玉兰柯晓静郭红敏谷新晰田洪涛郭兴华罗云波
- 关键词：电转化
- 保加利亚乳杆菌异源表达纳豆激酶的性质研究被引量：3
- 2017年
- 目的:研究保加利亚乳杆菌中异源表达来自纳豆芽孢杆菌的纳豆激酶酶学性质及其体外溶栓作用。方法:从纳豆激酶的最适温度、热稳定性、最适pH值、pH值稳定性和金属离子及化学试剂等方面研究该酶的酶学性质,通过体外试验研究其溶血栓作用,并通过灭活纤溶酶原的方法分析其溶解纤维蛋白的作用方式。结果:保加利亚乳杆菌异源表达纳豆激酶的最适温度为40℃,在低于40℃时热稳定性较好,最适pH 7.0,pH值在6.0~8.0范围内较稳定。Ca^(2+)、Mn^(2+)、Fe^(2+)促进酶活的效果随浓度的变化而不同,其中Cu^(2+)、Hg^(2+)对该酶起明显的抑制作用,Ag+随浓度的增加抑制效果逐渐显著,而蛋白抑制剂PSMF对纳豆激酶具有明显的抑制作用,说明纳豆激酶为丝氨酸蛋白酶。体外试验表明:该酶溶解纤维蛋白的方式是直接溶解,而非通过激活纤溶酶原,且该酶具有明显的体外溶栓作用。结论:为纳豆激酶的应用及开发新型功能性乳制品提供了理论基础。
- 齐少卿李晨卢海强李英军田洪涛罗云波
- 关键词：保加利亚乳杆菌纳豆激酶酶学性质体外溶栓
- 鼠李糖乳杆菌电转化条件的研究被引量：6
- 2017年
- 目的:研究不同因素对鼠李糖乳杆菌电转化效率的影响,探讨电转化的最适条件,提高电转化效率。方法:以鼠李糖乳杆菌05-28为受体菌株,大肠杆菌-乳酸菌穿梭型质粒p MG36e为载体,通过原生质体电转化的方法研究了质粒浓度、电击缓冲液、电转化参数、复苏培养基组成及复苏培养时间对电转化效率的影响。结果:利用1μL质量浓度为1μg/μL的质粒p MG36e,在电场强度8 k V/cm,电阻200Ω,电容25μF的条件下进行电击转化,以含有0.5 mol/L蔗糖和20 mmol/L的MgCl_2、CaCl_2且无吐温80的MRS再生培养基复苏培养2.5 h,并采用添加红霉素的筛选培养基,获得1.66×105CFU/μg DNA的电转化效率。结论 :实现了鼠李糖乳杆菌的高效遗传转化,为遗传育种提供了技术支持。
- 北婷婷李晨谷新晰张会彦田洪涛罗云波
- 关键词：鼠李糖乳杆菌电转化
- 不同来源食品级乳酸菌及双歧杆菌对乳酸链球菌素敏感性的研究被引量：3
- 2009年
- 目的:研究不同来源的食品级乳酸菌和双歧杆菌对乳酸链球菌素(nisin)的敏感性,为构建以nisin作为食品级筛选标记的受体乳酸菌表达系统以及筛选食品发酵、保鲜与贮藏过程中的nisin抗性乳酸菌提供科学依据。方法:采用试管稀释法研究不同来源的食品级的18株乳酸球菌、15株乳酸杆菌和5株双歧杆菌对nisin的敏感性。结果:大部分乳球菌和部分乳杆菌对nisin不敏感,但乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)ML0230、99210,肠膜明串珠菌葡聚糖亚种(Leuconostoc mesenteroides subsp dextranicum)AS1.2141T,嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)La1,德氏乳杆菌保加利亚亚种(Lactobacillus delbrueckii subsp bulgaricus)S-1、DR、LD、AS1.2625T,长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)Blm对nisin非常敏感,在nisin质量浓度为5μg/mL(IU/mL)时即可抑制其生长。结论:初步筛选出17株以nisin作为食品级筛选标记的受体乳酸菌,同时筛选出21株食品发酵、保鲜与贮藏过程中的nisin抗性乳酸菌。
- 马乐辉田洪涛张丽芳郭兴华罗云波
- 关键词：敏感性乳酸链球菌素乳酸菌双歧杆菌
