黑龙江省青年科学基金(QC03C04)
- 作品数：5 被引量：17H指数：3
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- 黑龙江省地区尖锐湿疣组织病原感染趋势及序列分析被引量：2
- 2011年
- 目的:分析黑龙江省尖锐湿疣组织中感染的人乳头瘤病毒(HPV)感染基因型分布趋势,并对HPV18 L1和L2序列进行分析,了解有无变异。方法:提取56例尖锐湿疣组织标本中DNA,用HPV L1区通用引物及HPV 6b、HPV11、HPV16、HPV18型L1区特异引物进行PCR扩增,分析尖锐湿疣组织中感染的HPV型别分布并进一步将筛选出的1例HPV18型阳性标本中的L1、L2基因进行克隆,构建克隆质粒pBluescript-HPV18 L1和pBluescript-HPV18 12,测序分析其基因变异情况。结果:56例标本中,HPV 6b和11型感染例数分别为15和28例,各占26.7%和50%;HPV 16型感染3例,占总例数5.4%;有2例合并HPV6b/11型混合感染,占3.6%;1例合并HPV11/18型的混合感染,占1.8%;HPV6b/11/16感染2例,占3.6%;其它型别5例,占8.9%。HPV18 L1开放读码框PCR扩增产物片段大小为1.7kb,与预期结果相同。重组质粒pBluescript-HPV18 L1克隆片段18 L1、基因测序后,与原始序列相比有一处点突变G74A,为氨基酸第二位密码子,属错义突变,氨基酸由精氨酸变为谷氨酰胺,重组质粒pBluescript-HPV18 L2克隆片段18 L1基因测序后,与原始序列相比存在三处同义突变,A345C,C904A,G1260A。存在三处错义突变,T509C,氨基酸由缬氨酸变为丙氨酸;G529T,氨基酸由丙氨酸变为丝氨酸;T1115C,氨基酸由苯丙氨酸变为丝氨酸。结论:黑龙江省地区尖锐湿疣组织HPV DNA检出率为100%,以低危型别11和6b型为主,偶见高危型别16、18型感染,黑龙江省地区HPV18分离株晚期基因L1经克隆测序后确认存在一处错义突变,G74A,氨基酸由精氨酸变为谷氨酰胺。HPV18分离株晚期基因L2经克隆测序后确认存在三处同义突变,A345C,C904A,G1260A。存在三处错义突变,T509C,氨基酸由缬氨酸变为丙氨酸;G529T,氨基酸由丙氨酸变为丝氨酸;T1115C,氨基酸由苯丙氨酸变为丝氨酸。
- 郭庆云庄敏李迪谷鸿喜
- 关键词：尖锐湿疣人乳头瘤病毒
- 尖锐湿疣组织中HPV型别检测及HPV11型L1基因的克隆与测序被引量：7
- 2005年
- 目的分析黑龙江地区尖锐湿疣组织感染的HPV型别分布情况,并对HPV11型流行株L1基因进行克隆和测序,检测序列变异情况。方法提取30例尖锐湿疣组织标本中的DNA,用HPVL1区通用引物及特异性HPV6b,11,16,18型引物进行PCR扩增,分析尖锐湿疣组织中感染的HPV型别分布。对其中4株HPV11型阳性标本L1基因,经酶切、连接,分别构建pSP73-HPV11L1重组质粒,并对其L1片段进行测序。结果30例标本中,HPV6b和11型感染数分别为11例,各占36.7%;有2例合并HPV6b/11/16型的混合感染,占总病例数的6.7%;1例HPV16型单独感染,未鉴定出HPV18型感染,其他型别5例。pSP73HPV11L1重组质粒测序后,4株HPV11L1基因序列完全一致,可认为是黑龙江省流行株。其序列与原始株序列相比,仅发现了两处同义点突变。结论黑龙江地区尖锐湿疣组织中HPVDNA检出率为100%,以6b和11型为主,偶见高危型别16型感染。克隆测序表明黑龙江省流行株HPV11型L1基因高度保守。
- 庄敏谷鸿喜魏兰兰刘希君李迪崔洪波孔卫兰
- 关键词：尖锐湿疣人乳头瘤病毒L1基因
- 人乳头瘤病毒11型L1基因原核表达系统的构建及鉴定被引量：3
- 2004年
- 目的构建人乳头瘤病毒11型(HPV11)L1原核表达系统pBAD(B)鄄HPV11L1,表达HPVL1蛋白,为进一步制备基因工程疫苗奠定基础。方法PCR法从尖锐湿疣组织标本中扩增人乳头瘤病毒11型L1基因片段,克隆至pBluescript质粒,并测序。将其从克隆重组质粒中切下连入表达载体,建立pBAD(B)鄄HPV11L1原核表达重组质粒,在大肠杆菌宿主菌Top10中,经阿拉伯糖诱导,表达融合蛋白L1,经SDS鄄PAGE电泳和Westernblot进行鉴定。结果3株HPV11L1经测序发现变异一致,每株均有2个核苷酸变异,但未影响氨基酸变化。经SDS鄄PAGE鉴定L1蛋白相对分子质量为59×103,与预期值相同,Westernblot证明表达蛋白能与单克隆抗体反应,成功构建了pBAD(B)鄄HPV11L1原核表达系统。结论所构建的pBAD(B)鄄HPV11L1原核表达系统能够高效表达HPV11L1蛋白。
- 庄敏谷鸿喜孔卫兰李迪魏兰兰李金梁林道红
- 关键词：人乳头瘤病毒11型L1基因原核表达系统HPV11基因表达疫苗
- HPV-16-11 L1双价重组杆状病毒的构建及VLP形成被引量：4
- 2006年
- 目的将本地区流行株HPV-16 L1基因与HPV-11 L1基因双表达于杆状病毒昆虫细胞表达系统,组装成类病毒颗粒(virus like particles,VLP)。为研制同时预防宫颈癌和尖锐湿疣等多种疾病的HPV-16-11型基因工程疫苗奠定基础。方法对本地流行株HPV-16 L1基因进行亚克隆,构建pBluescript-HPV-16L1克隆质粒,并对其测序。再将质粒中HPV-16 L1基因切下,连接到pFastBacDual的强启动子phol后;从克隆质粒pSP73-HPV-11 L1切下HPV-11 L1,连接到pFastBacDual的弱启动子p10后,利用Bac to Bac系统在昆虫细胞Sf9中表达外源蛋白。SDS-PAGE和Western blot鉴定HPV-16 L1和HPV-11 L1蛋白的表达量及特异性,电镜观察昆虫细胞内VLP的存在。结果酶切和PCR法证实pFastBacDual-HPV-16 L1-HPV-11 L1转移质粒连接正确,转染昆虫细胞Sf9后,检测到HPV-16和HPV-11 L1特异蛋白,两种蛋白的相对分子质量(Mr)相近,约56×103;电镜观察到了VLP。结论本研究利用Bac to Bac系统构建Bacmid／HPV-16-HPV-11 L1,转染到Sf9昆虫细胞后重组外源蛋白得到高效表达,并经电镜证实昆虫细胞内存在较大量VLP,用此VLP免疫BALB／c小鼠后产生抗L1蛋白的抗体。共表达HPV L1蛋白可能为预防多型别HPV感染提供新途径。
- 庄敏谷鸿喜李迪崔洪波刘希君魏兰兰凌虹
- 关键词：人乳头状瘤病毒16型L1基因杆状病毒
- 黑龙江省尖锐湿疣组织HPV感染的型别分析被引量：1
- 2008年
- 目的分析黑龙江省尖锐湿疣组织中感染的人乳头瘤病毒(HPV)基因型分布情况,比较保守引物和序列特异引物PCR扩增方法。方法提取26例尖锐湿疣组织标本中DNA,用HPV L1区通用引物及HPV 6b、HPV11、HPV16、HPV18型L1区特异引物进行PCR扩增,分析尖锐湿疣组织中感染的HPV型别分布并比较两种扩增方法的结果。结果26例标本中,HPV 6b和11型感染例数分别为4和11例,各占15.4%和65.4%;HPV 16型感染2例,占总例数7.7%;有2例合并HPV6b/11型混合感染,占7.7%;1例合并HPV11/16/18型的混合感染,占3.8%。用通用引物扩增后26例标本中1例为阴性。结论黑龙江省地区尖锐湿疣组织HPV DNA检出率为100%,以低危型别11和6b型为主,偶见高危型别16、18型感染。鉴定HPV感染保守引物与型别特异性引物PCR方法相比,前者可导致少量假阴性产生。
- 郭庆云于智明李迪谷鸿喜庄敏
- 关键词：尖锐湿疣人乳头瘤病毒
