博士科研启动基金(JQ201002)
- 作品数：5 被引量：32H指数：3
- 相关作者：唐梦君张小燕高玉时周生蒲俊华更多>>
- 相关机构：中国农业科学院家禽研究所中华人民共和国农业部更多>>
- 发文基金：博士科研启动基金江苏省自然科学基金江苏省省级科技创新与成果转化专项引导资金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学轻工技术与工程更多>>
- 鸡胚肠上皮细胞体外分离及原代培养研究
- 以18日龄的鸡胚为试验材料,应用嗜热菌蛋白酶消化法分离和体外培养肠上皮细胞。采用低速离心、差速贴壁对上皮细胞进行纯化,通过形态学观察及免疫细胞化学法进行鉴定。结果表明:应用嗜热菌蛋白酶消化法得到的鸡胚肠上皮细胞生长状况良...
- 唐梦君高玉时张小燕陆俊贤蒲俊华顾荣
- 关键词：鸡胚肠上皮细胞体外培养
- 文献传递
- 空肠弯曲杆菌ERIC-PCR分型技术研究被引量：2
- 2013年
- 目的建立空肠弯曲杆菌肠杆菌科基因间重复一致序列PCR(ERIC-PCR)的分子分型技术,快速分析空肠弯曲杆菌指纹谱。方法本研究提取空肠弯曲杆菌ATCC33560的基因组DNA作为模板,采用对优化项目设置梯度其它条件不变的方法,对ERIC-PCR反应中的模板量、引物浓度和退火温度等进行优化,建立空肠弯曲杆菌的ERIC-PCR分型技术,并采用该技术对20株空肠弯曲杆菌的指纹图谱进行了分析。结果 ERIC-PCR反应体系中DNA模板量96ng/25μL,ERIC1、ERIC2引物浓度各0.8μmol/L,退火温度40℃时,指纹图谱条带清晰、明亮;20株空肠弯曲杆菌临床分离株ERIC-PCR指纹图谱差异较大,可在160bp^32000bp范围内出现2条~13条条带,分为14型。结论研究显示成功建立了空肠弯曲杆菌ERIC-PCR指纹图谱分型技术,应用该方法可从分子水平上对空肠弯曲杆菌基因组DNA进行快速指纹图谱分析,具有简便和快速等优点,能够为空肠弯曲杆菌流行病学调查提供科学依据。
- 唐梦君高玉时张小燕陆俊贤施祖灏唐修君陈大伟
- 关键词：空肠弯曲杆菌ERIC-PCR
- 空肠弯曲杆菌LAMP检测方法的建立及初步应用被引量：5
- 2012年
- 目的建立一种灵敏的环介导等温扩增方法(Loop-mediated Isothermal Amplification,LAMP)用于空肠弯曲杆菌(Campylobacter jejuni)的快速检测。方法根据已公布的空肠弯曲杆菌旋转酶基因(gyrA)设计引物,建立并优化LAMP反应体系,对检测方法的特异性和灵敏度进行验证,并运用该方法对我国不同地方鸡种空肠弯曲杆菌的携带率进行调查。结果该方法能扩增出典型的梯形条带,且扩增产物的酶切鉴定结果与理论值相符;对单增李斯特菌等8株实验菌株进行检测,仅空肠弯曲杆菌的LAMP结果为阳性;该方法检测空肠弯曲杆菌纯培养物的灵敏度为20cfu/mL,高于常规PCR;不同地方鸡种空肠弯曲杆菌携带率介于6%～90%之间,差异显著。结论本试验建立的空肠弯曲杆菌LAMP检测方法特异性强、灵敏度高,有望在临床样品检测中发挥作用。
- 唐梦君周生张小燕唐修君顾荣高玉时
- 关键词：空肠弯曲杆菌环介导等温扩增技术
- 空肠弯曲杆菌PCR-ELISA检测方法的建立被引量：7
- 2013年
- 针对空肠弯曲杆菌(Campylobacter jejuni)旋转酶基因(gyrA gene)设计特异性引物和探针,将生物素和地高辛分别标记上游引物5′端和核酸探针3′端,并对反应条件进行优化,建立空肠弯曲杆菌PCR-ELISA检测方法。结果表明:该方法能特异的检测空肠弯曲杆菌基因组DNA,检测阈值为2 fg,敏感性是常规PCR的10倍。对模拟泄殖腔样本进行检测,检测限为50 cfu/mL。对100份临床样品进行检测,PCR和PCR-ELISA方法阳性检出率分别为60%和69%。
- 唐梦君周生张小燕唐修君蒲俊华高玉时
- 关键词：空肠弯曲杆菌PCR-ELISA
- 应用LAMP快速检测金黄色葡萄球菌的研究被引量：18
- 2011年
- 建立环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)快速检测金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)。根据金黄色葡萄球菌nuc基因序列中的保守区域设计了4条特异性引物,在65℃等温条件下,45 min即可扩增出梯形条带。LAMP检测金黄色葡萄球菌纯培养物的灵敏度为54 CFU/mL。对11株细菌进行LAMP扩增,仅3株金黄色葡萄球菌得到阳性结果。应用该方法对240份鸡蛋样品进行检测,检测结果与国标方法相符合,12份蛋壳金黄色葡萄球菌检测阳性,蛋内容物均未检出。LAMP检测金黄色葡萄球菌灵敏度高,特异性强,耗时短,方法简便,有望发展成为快速检测食品中金黄色葡萄球菌的有效手段。
- 唐梦君周生葛庆联张小燕蒲俊华高玉时
- 关键词：金黄色葡萄球菌环介导等温扩增技术
- 鸡胚肠上皮细胞Toll样受体的表达谱研究被引量：2
- 2013年
- 为明确鸡胚肠上皮细胞中Toll样受体(Toll-like receptors,TLR)的表达情况,本研究采用嗜热菌蛋白酶分离培养18日龄鸡胚的肠上皮细胞,在形态学观察及免疫细胞化学法鉴定基础上,采用RT-PCR方法检测其TLR表达谱,并对不同品种鸡胚肠上皮细胞TLR表达谱进行了比较研究。结果表明,应用嗜热菌蛋白酶消化法得到的鸡胚肠上皮细胞生长状况良好;采用低速离心和差速贴壁进行纯化,得到90%以上纯度的鸡胚肠上皮细胞;纯化后的细胞经形态学观察及细胞角蛋白单克隆抗体鉴定为阳性;10种TLR在鸡胚肠上皮细胞上均有mRNA表达,但其丰度存在明显差异;不同品种鸡胚肠上皮细胞TLR表达谱均无显著差异。
- 唐梦君高玉时张小燕陆俊贤蒲俊华顾荣
- 关键词：TOLL样受体表达谱
- 高温条件下涂膜保存对鸡蛋品质的影响
- 选用具有抑菌作用的保鲜剂壳聚糖+苯甲酸钠对产后12h内的褐壳鸡蛋进行涂膜处理,研究其在夏季的保鲜效果。将鸡蛋的感官评价、品质变化及部分微生物变化作为衡量鸡蛋新鲜度变化的各种指标。结果表明:保存32d,对照组蛋壳表面的菌落...
- 葛庆联张小燕吴敏唐梦君蒲俊华高玉时
- 关键词：鸡蛋壳聚糖
- 文献传递
