国家高技术研究发展计划(2004AA213050)
- 作品数：2 被引量：7H指数：2
- 相关作者：于康震孟庆文陈化兰刘娣童光志更多>>
- 相关机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所东北林业大学新疆农业大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 表达带His-tag的禽流感病毒HA基因杆状病毒转移载体的构建及重组病毒的鉴定被引量：4
- 2005年
- 经RT-PCR扩增了禽流感病毒A/Goose/GuangDong/1/96(H5N1)1.7kb HA基因的cDNA将其克隆到pMD18-T中并测序。在去除编码HA信号肽的核苷酸序列后,亚克隆到杆状病毒转移载体pBlueBacHis4.5,筛选到重组质粒命名为rpBacHisH5HA。测序正确后,在脂质体介导下,与线性化的杆状病毒DNA(Bac-N-BlueTMDNA)共转染Sf9昆虫细胞,挑取蓝色蚀斑,经3轮蚀斑纯化,获得数株重组杆状病毒rBacHisH5HA。提取重组病毒DNA经PCR证明目的基因片段已插入杆状病毒基因组。
- 李永强孟庆文冉多良于康震陈化兰李贺吴东来
- 关键词：禽流感HA基因杆状病毒
- H5亚型禽流感病毒HA基因昆虫／杆状病毒系统的表达及对BALB/c小鼠的免疫保护被引量：4
- 2006年
- 经RT-PCR扩增了禽流感病毒A/Goose/Guangdong/1／96 H5N1亚型1．7kb HA基因的cDNA,将其克隆到pMD18-T中并测序。亚克隆到杆状病毒转移载体pMelBacA的蜜蜂蜂毒素分泌信号下游中,测序正确后与线性化的杆状病毒DNA(Bac-N-BlueTM DNA)共转染Sf9昆虫细胞。将重组杆状病毒感染HFive细胞,72h左右收获细胞,超声波裂解,SDS—PAGE结果表明HA基因在重组杆状病毒感染的HFive细胞中获得表达。蛋白胶薄层扫描分析显示:表达的HA蛋白占重组杆状病毒感染细胞总蛋白含量的17．1％。Western-blot 及血凝实验结果显示,表达的禽流感H5N1亚型病毒HA蛋白具有生物学活性。表达的H5 HA蛋白定量乳化后,皮下多点注射免疫SPF 级BALB/c雌性小鼠,免疫后产生了H5 HA特异抗体,并在三免前后达到并保持较高水平。用致死剂量的HPAIV H5N1攻击小鼠,免疫组小鼠提供了100％的保护力,而对照组小鼠先后发病且死亡:为研制禽流感H5N1亚型病毒亚单位疫苗,防制禽流感奠定了基础。
- 孟庆文刘光亮于康震童光志刘娣施建忠陈化兰
- 关键词：禽流感病毒血凝素重组杆状病毒免疫保护
