背景与目的:有研究发现,肝癌缺失基因1(DLC1)在多种肿瘤中低表达或不表达,其通过调节黏着斑激酶(FAK)、促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)等影响肿瘤细胞的凋亡。而对于DLC1在卵巢癌中的表达及作用等的研究甚少,本实验采用DLC1基因转染该基因表达缺失的人卵巢癌多药耐药细胞系OVCAR-3,观察转染前后该细胞对顺铂耐药性及FAK、p38MAPK的变化。方法:将OVCAR-3细胞分为3组,空白组为未经处理的OVCAR-3细胞,阴性对照组转染空质粒pEGFP-C3,实验组转染重组质粒pEGFP-C3-DLC1。RT-PCR和Western blot检测各组细胞中DLC1基因和蛋白的表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定各组细胞对顺铂的半数抑制浓度(IC50),Western blot观察FAK、p38蛋白及其磷酸化水平的变化,流式细胞仪测定顺铂处理前后各组细胞凋亡率及周期分布改变。结果:DLC1基因和蛋白在实验组表达而空白对照组和阴性对照组均未见表达,实验组细胞与其他两组细胞相比,对顺铂的IC50较低(4.02 vs 4.99/4.90μmol/L,P<0.01),p-p38蛋白表达上升而p-FAK蛋白表达下降(3.02 vs 1.52/1.61,3.13 vs 9.03/8.99,P<0.01),顺铂处理前后实验组与其他两组细胞相比凋亡率增加(8.97%vs 1.81%/1.95%,30.68%vs 18.03%/20.33%,P<0.01),G1期细胞比例增加(65.80%vs 60.82%/59.80%,66.48%vs 55.42%/53.94%,P<0.05)。结论:转染DLC1基因可使OVCAR-3G1期细胞比例及凋亡率升高,对顺铂敏感性增加,该作用可能依赖于细胞内外源性DLC1基因的表达、p-FAK表达降低和p-p38表达增强。
肝癌缺失基因(deleted in liver cancer genes,DLCs)家族存在于人体多种组织中,其表达产物为RhoGTP酶活化蛋白。该基因家族在多种肿瘤中低表达或不表达,主要通过负性调控Rho蛋白(RhoA,Cdc42)和黏着斑蛋白及两者下游效应因子的活性,抑制细胞骨架形成、黏着斑重组,在肿瘤细胞生长、增殖、侵袭和转移过程中发挥重要作用。雌、孕激素和胰岛素可通过转录后修饰途径调控DLCs蛋白活性,在此类激素相关肿瘤的发生发展中发挥作用。
