湖北省自然科学基金(2007ABA141)
- 作品数：3 被引量：8H指数：1
- 相关作者：祁超李伟国梅芳向海艳张艳芳更多>>
- 相关机构：华中师范大学南方医科大学更多>>
- 发文基金：湖北省自然科学基金国家自然科学基金教育部科学技术研究重点项目更多>>
- 相关领域：生物学理学更多>>
- D1蛋白酶的克隆表达、纯化、生物活性测定及多克隆抗体的制备被引量：1
- 2010年
- 为了开发以D1蛋白酶作为靶标的新型除草剂,需要对先导化合物的生物活性进行检测和筛选。从菠菜中提取总RNA,逆转录合成cDNA,采用PCR扩增了CtpA的基因,连接至表达载体pET-28a中,构建了重组表达质粒,并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行高效表达,通过降低IPTG和诱导温度获得了可溶性表达的重组蛋白酶。采用Ni-NTA亲和层析和凝胶过滤柱层析对重组蛋白进行了纯化,SDS-PAGE和Western blotting结果证实目的蛋白为含有His-tag的融合蛋白。以合成的D1前体蛋白羧基端24肽作为模拟底物,采用高效液相色谱法测定了其水解活性,结果表明活性可达1.10nmol/(mg·min),为文献报道数据的15倍。纯化后的CtpA蛋白免疫日本的长耳大白兔制备多克隆抗体,ELISA法测定其血清抗体的效价高达1:100000。该结果为抑制剂先导化合物的筛选和酶蛋白与化合物的作用机理研究提供了必要的基础。
- 李慧张巍申明霞李伟国刘艳丽刘素芳祁超
- 关键词：纯化生物活性多克隆抗体
- 反式白藜芦醇分子印迹复合膜的制备及其选择性被引量：7
- 2009年
- 以反式白藜芦醇为模板分子,聚偏氟乙烯微孔滤膜为支撑膜,丙烯酰胺为功能单体,乙二醇二甲基丙烯酸脂(EDMA)为交联剂,采用热引发原位聚合方法制备了白藜芦醇分子印迹聚合物膜。研究了分子印迹膜对白藜芦醇及其结构类似物(2-萘酚、白藜芦醇甙和双酚A)的结合和透过性,并用扫描电子显微镜对膜的形貌进行了观察。结果表明,印迹复合膜对模板分子白藜芦醇的吸附量远远大于其它结构类似物,其饱和吸附量达1.72μmol/g,为非印迹膜的3倍;尺寸比模板分子小的2-萘酚最先透过,而相对于尺寸接近或大于模板分子的双酚A或白藜芦醇甙,则模板分子优先透过,而且模板分子在印迹膜上的透过量大于非印迹膜。
- 向海艳张艳芳祁超梅芳李伟国
- 关键词：白藜芦醇选择性
- 重组蛋白Fpr3的原核表达、纯化与多克隆抗体的制备
- 2010年
- 为了从分子水平上进一步研究PPIase与PP1的相互作用,将构建好的pGEX-5X-1重组表达质粒转化于受体菌BL21(DE3)感受态细胞中,用IPTG诱导后得到了可溶形式表达的融合蛋白.采用GST亲和层析法对重组蛋白进行了纯化,并用Factor Xa对融合蛋白进行柱上酶切,SDSPAGE检测表明可获得较高纯度的GST-Fpr3融合蛋白以及去除GST标签的目的蛋白.用其免疫日本雄性大耳白兔,成功制备了抗GST-Fpr3的多克隆抗体,为Fpr3的空间结构的解析和相应的分子识别过程奠定了基础.
- 伍翔祁超李伟国刘中来
- 关键词：纯化多克隆抗体
