上海市现代生物与新药产业发展基金(024319206)
- 作品数：3 被引量：22H指数：2
- 相关作者：曾溢滔任兆瑞黄淑帧颜景斌陈美珏更多>>
- 相关机构：上海交通大学上海市儿童医院更多>>
- 发文基金：上海市现代生物与新药产业发展基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 外源基因在转基因小鼠中整合状况的分析被引量：1
- 2006年
- 目的研究外源基因在转基因小鼠及其家系中的整合状况。方法采用PCR、定量PCR和荧光原位杂交(FISH)的方法对原代转基因小鼠中外源人凝血因子Ⅸ(hFⅨ)基因的整合和嵌合情况进行分析。使用PCR、直接测序法鉴定整合的外源基因多拷贝的连接方向和连接方式。结果7个家系中F0-8、F0-10和F0-11的后代中阳性个体比例明显低于50%,3个原代小鼠DNA中hFⅨ基因拷贝数分别只有子代中的66.2%、18.8%和28.3%。F0-11小鼠各脏器中嵌合比差异极大,且未见胚系特异性分布。不同个体间整合拷贝数差异极大,最少的F0-69为单拷贝,最多的F0-10有43个拷贝。而整合位点分析发现外源基因在随机分布中仍呈现一定的趋向性。PCR和测序结果证明所有小鼠中外源基因多拷贝均为头尾连接,连接的机制以粘性末端介导的连接为主,F0-13中还存在同源序列配对、断裂、修复介导的头尾连接。结论在整合有hFⅨ基因的转基因小鼠中多拷贝外源基因多以粘性末端介导的头尾连接方式整合在染色体的某些特定区域。
- 颜景斌朱怡文肖艳萍王舒任兆瑞黄淑帧曾溢滔
- 关键词：转基因小鼠外源基因拷贝数嵌合体
- 山羊β酪蛋白基因克隆及序列分析被引量：15
- 2003年
- 用LongPCR技术克隆山羊 β酪蛋白 (CSN2 )全基因 13.7kb的序列 (GenBank登录号 :AF4 0 90 96 ) .利用PCR RFLP方法鉴定第 14和 192位氨基酸残基相应的核苷酸序列中出现的 2个多态性位点 ,其中第 192位氨基酸残基处的TspRⅠ位点是Saanen奶山羊CSN2基因中新发现的 1个多态性位点 .生物信息学方法分析山羊CSN2基因可见 ,非编码区中的SINE和LINE序列内含多种乳蛋白基因表达调控元件 。
- 王强陈美珏任兆瑞黄淑帧曾溢滔
- 关键词：山羊基因克隆PCR-RFLP
- 山羊β乳球蛋白基因的克隆及其在转基因小鼠乳汁中的高效表达被引量：6
- 2003年
- 通过长距离PCR从山羊基因组DNA分两段扩增山羊β乳球蛋白(β lactoglobulin,BLG)基因,扩增出的两个片段分别克隆到T载体上,利用BLG基因序列自身存在的NarI单酶切位点进行拼接,获得了全长为7.2kb的山羊BLG基因克隆,并构建了它的真核表达载体,经酶切鉴定和序列分析证实了克隆的正确性。用线性化的BLG基因显微注射小鼠受精卵以建立转基因鼠,经PCR和Southern印迹分析证实获得了6只首建者(Founder)转基因小鼠(3♀,3♂),在泌乳期采集两只F0代转基因雌鼠乳汁并用ELISA测定山羊β乳球蛋白的含量,其表达水平分别为23.49mg/mL和2.19mg/mL。
- 高建军颜景斌黄英曾溢滔
- 关键词：转基因小鼠乳腺表达
