北京市自然科学基金(7093115)
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
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- 相关机构：首都儿科研究所中南大学北京大学首都儿科研究所教学医院更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金国家自然科学基金北京市卫生局青年科学研究资助项目更多>>
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- 短双链RNA在病毒性心肌炎小鼠模型中的抗病毒研究
- 2010年
- 目的:通过在小鼠病毒性心肌炎动物模型研究短双链小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对病毒感染和复制的抑制作用,研究RNAi在治疗病毒性疾病的可行性。方法:利用质粒载体将siRNA转染至HeLa细胞和Balb-c小鼠后感染病毒,荧光显微镜观察GFP表达量观察细胞内质粒转染效率和持续时间,通过病毒致细胞病变作用(CPE)保护实验病毒空斑形成实验检测病毒受抑制程度,动物模型中观察动物死亡率和易感组织病理变化评价siRNA的保护作用。结果:在HeLa细胞中针对CVB3 2B区的siRNA能显著抑制柯萨奇病毒B3的感染和复制,抑制率可达90%。动物模型中siRNA质粒可改善动物存活率(30%),并降低易感脏器中病毒含量,减轻病理反应。结论:针对CVB3基因组2B区的siRNA在病毒性心肌炎动物模型中具有保护作用。
- 王彩虹姚海兰刘哲伟
- 关键词：质粒载体COXSACKIEVIRUS抗病毒作用
- 抑制Itk表达对Jurkat细胞分泌细胞因子的影响被引量：2
- 2010年
- 目的 研究在Jurkat细胞上敲减Itk蛋白的表达对细胞增殖及炎症相关的细胞因子产生的影响,为Itk作为小分子药物靶标提供可行性实验依据.方法 针对Itk基因设计合成三个shRNAs,通过与pEGFP-C1-hItk质粒共转染,观察其抑制Itk-GFP融合蛋白的表达情况,筛选有效序列包装成慢病毒颗粒.将慢病毒颗粒感染Jurkat细胞,观测Itk蛋白的表达水平、细胞增殖情况及细胞因子的变化.结果 Itk-shRNA1感染Jurkat细胞后Itk基因的mRNA水平与细胞对照组及感染shRNAnon的对照组相比,敲减率约55%,差异有统计学意义P＜0.05.Itk蛋白的敲减导致Jurkat细胞在受刺激时增殖降低,以未感染病毒的Jurkat细胞受刺激后酶标仪检测的A值为1,Itk-shRNA1感染组平均比值为0.54,shRNAnon对照组平均比值为0.83,两组差异有统计学意义,P＜0.05.Itk-shRNA1感染组中IL-2、IL-5、IL-10及IFN-γ等细胞因子水平均较shRNAnon对照组低,差异有统计学意义,提示Itk蛋白的表达减少导致Jurkat细胞产生细胞因子减少.结论 抑制Itk表达能有效降低淋巴细胞的增殖,同时减少与炎症相关细胞因子分泌.
- 姚海兰何峰肖宗慧韩继生张阳德黄伯云刘哲伟
- 关键词：蛋白质酪氨酸激酶RNA慢病毒属
- Itk蛋白在人PBMC增殖和细胞因子产生中的作用研究被引量：1
- 2010年
- 利用RNA干扰的方法抑制人外周血单个核细胞(PBMC)中Itk基因的表达,探讨其抑制Itk后对人PBMC增殖和炎症性相关细胞因子产生的影响。设计针对Itk基因的siRNA序列,与外源表达Itk的pEGFP-C1-hItk质粒共转染至HeLa细胞,筛选出有效的干扰序列;利用电转染的方法将有抑制Itk作用的siRNA转染至人PBMC,检测Itk抑制状态,同时观察细胞增殖率及炎症性细胞因子产生水平的变化。实验表明,Itk-siRNA有效地抑制了Itk蛋白的表达;Itk受到抑制后细胞增殖率明显低于对照组(P<0.05);几种重要炎性细胞因子IL-2、IFN-γ、IL-5、IL-10和IL-4产生水平下降。实验验证了Itk蛋白在人PBMC增殖和炎性细胞因子产生方面的重要作用。
- 何峰姚海兰肖宗慧韩继生刘哲伟
- 关键词：ITKRNAI人PBMC
