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桑树MuPR1a基因的克隆及启动子活性分析被引量：1: 2013年; 病程相关蛋白(PR)在植物对病原物的防卫反应过程中具有重要作用。从桑树叶片中克隆得到桑树病程相关蛋白基因MuPR1a(GenBank登录号:KC453993)。该基因编码区全长为516 bp,共编码171个氨基酸,编码蛋白质具有一个典型的分泌型信号肽序列和多个PRs蛋白保守结构域,其氨基酸序列与其它植物的PR1a蛋白具有很高的同源性。利用巢式PCR(Tail-PCR)技术克隆得到MuPR1a的启动子,并将其命名为MPRp(GenBank登录号:KC849423),该启动子序列含有CAATbox、TATA-box、TCA-element、GCC box等正常转录起始必需的顺式作用元件。农杆菌介导的烟草叶片瞬时表达分析显示,MPRp具有启动子的功能,能够驱动下游报告基因的表达并且具有一定的被病原菌诱导表达的活性。; 袁传忠莫瑶瑶李轶群郭方月李卫国盖英萍冀宪领; 关键词：桑树启动子克隆巢式PCR

桑树乳汁蛋白基因MLX56的克隆及生物学功能分析被引量：1: 2014年; MLX56是一种分子质量为56 k D,对多种鳞翅目昆虫具有毒性的桑树韧皮部汁液蛋白。利用PCR技术从桑品种湖桑32号的桑树叶片中克隆了MLX56基因,命名为Ma MLX56(Gen Bank登录号:JX432966)。该基因编码区全长为1 203 bp,编码蛋白质含有400个氨基酸,有3个典型的保守结构域,具有信号肽序列,是一种分泌型蛋白质。将克隆得到的Ma MLX56编码区片段插入植物表达载体p BI121,构建植物表达载体p BI121-Ma MLX56,并转化拟南芥获得了转基因植株。转基因拟南芥分别接种甘蓝蚜(Brevicoryne brassicae)和丁香假单胞菌番茄致病变种(Pseudomonas syringae pv.Tomato DC3000,Pst DC3000)后,植株呈现出较强的抗虫性和抗Pst DC3000侵染能力,推测Ma MLX56在桑树响应生物胁迫过程中具有重要作用。; 莫瑶瑶张华梁郭方月王红刘琪袁传忠盖英萍冀宪领; 关键词：桑树 MA 转基因拟南芥抗性

桑树景天庚酮糖-1,7-二磷酸酶基因的遗传转化及生物学功能分析被引量：8: 2013年; 景天庚酮糖-1,7-二磷酸酶(SBPase)在植物光合作用卡尔文循环过程中控制着碳的流入和再生,在碳固定的基本途径中起着重要作用。利用已克隆到的桑树景天庚酮糖-1,7-二磷酸酶基因(MSBPase)cDNA全长序列,构建其植物表达载体转化拟南芥,检测结果表明转基因植株中MSBPase在转录水平和蛋白质水平上成功表达。对转基因拟南芥植株的表型观察发现,转基因植株与野生型植株相比叶色较绿,叶片数较多,株型较大,生长旺盛,且营养生长期明显缩短,呈现早花现象;对转基因拟南芥植株的生理生化特性分析发现,转基因株系叶片中SBPase的活性和净光合速率显著增强,叶片中的淀粉和可溶性糖含量及植株干质量增加。因此,MSBPase具有提高植株光合固定CO2的效率和光合能力,促进植株生长的作用,可以作为桑树基因工程育种的候选基因。研究结果也为进一步研究MSBPase的代谢调控机制奠定了基础。; 袁传忠韩雪娟李轶群莫瑶瑶郭方月李卫国盖英萍冀宪领; 关键词：桑树生物学功能转基因植株卡尔文循环

桑树黄化型萎缩病植原体溶血素基因MDPH的克隆及生物信息学分析和原核表达: 2012年; 溶血素为细菌分泌的能够使细胞溶解的毒素,是病原菌重要的毒力因子。利用同源克隆技术得到桑树黄化型萎缩病植原体溶血素全长基因,命名为MDPH(GenBank登录号:HQ891118)。MDPH全长717 bp,编码238个氨基酸,预测蛋白质分子质量为27.3 kD,等电点为9.29,氨基酸序列与其它植原体中已分离的溶血素有很高的同源性。蛋白质序列结构预测表明:MDPH的二级结构中富含α-螺旋,其次为β-折叠和无规卷曲,而β-转角仅占5.46%。对蛋白质序列的理化特征预测表明:MDPH有多个亲水和疏水区域,且疏水性强于亲水性;易形成跨膜螺旋,具有7个显著跨膜结构区;蛋白的抗原性较强,不含有明显的信号肽序列,为非经典分泌蛋白。将MDPH的编码区插入原核表达载体pET30a(+),并转化到E.coli BL21中,经过IPTG诱导,MDPH在BL21菌株中成功表达。研究结果为深入探讨MDPH的功能及植原体的致病机制奠定了基础。; 卢宝云韩雪娟袁传忠李轶群盖英萍冀宪领; 关键词：桑树溶血素基因克隆原核表达

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中国博士后科学基金(20100471564)