浙江省自然科学基金(R303145)
- 作品数：7 被引量：25H指数：3
- 相关作者：周继勇陈吉刚王金勇齐静吴建祥更多>>
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- 抗重组鸡IL-2单克隆抗体的制备与鉴定
- 2004年
- 以纯化的重组鸡IL-2蛋白(rchIL-2)为免疫原,按常规方法免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,对杂交瘤细胞进行筛选,阳性孔经3次有限稀释法克隆,最终获得4株持续且稳定分泌抗鸡IL-2单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞株,分别命名为:1A12、4A3、3E7和4E1.4株MAb的抗体类型均为IgG1,轻链为κ;MAb的ELISA效价分别为5.12×105、1.02×106、2.56×105和4.09×106.Western-blot分析表明,所获得的1A12、4A3、3E7和4E14株单克隆抗体与rchIL-2均有反应.MAb的制备成功为进一步开展chIL-2的功能研究奠定了基础.
- 李增魁龚辉陈吉刚吴建祥周继勇
- 关键词：IL-2单克隆抗体
- 重组鸡白细胞介素2的诱导表达与生物学活性测定被引量：12
- 2005年
- 将去除信号肽的鸡IL-2基因编码框克隆到原核表达载体pBAD/HisB,实现了重组鸡IL-2(rchIL-2)蛋白在大肠杆菌中的高效表达。SDS-PAGE分析显示,表达蛋白的分子量约为18kD。用rchIL-2为抗原制备了单克隆抗体和多克隆抗体,建立了检测rchIL-2含量的抗原捕获ELISA,探讨了天然chIL-2蛋白的体外表达动力学。非变性条件下纯化的rchIL-2(0.4ng)对ConA活化的鸡T淋巴细胞具有明显的增殖活性,而对鸭及鹅的T淋巴细胞无增殖活性。抗chIL-2多克隆抗体可完全中和rchIL-2和天然chIL-2蛋白的生物学活性,而单克隆抗体无中和rchIL-2和天然chIL-2蛋白生物学活性的功能。这些研究结果证实,大肠杆菌表达的rchIL-2及其多克隆抗体拥有生物学功能,而获得的单克隆抗体不具有chIL-2的中和特性。
- 陈吉刚陈维虎周继勇王金勇齐静郑肖娟俞照正孙红霞
- 关键词：生物学活性单克隆抗体多克隆抗体淋巴因子
- 禽传染性支气管炎病毒结构蛋白在Vero细胞中的表达效果分析
- 2008年
- 将IBV的S1基因、N基因分别构建到pCI-neo等真核表达载体中,并转染了Vero细胞.通过间接免疫荧光实验及细胞免疫化学实验证实了IBV的S1蛋白、N蛋白均可在Vero细胞中进行表达,24h^72h间均检测到蛋白的表达.结果显示S1蛋白在Vero细胞中的表达量低于N蛋白,pCI-neo载体的表达效果优于pcDNA3载体.此外,还探讨了S1基因与具有免疫调节作用的鸡白细胞介素-2基因在Vero细胞中串联方式共表达,成功检测到两种蛋白,为探讨DNA疫苗使用方法提供了一条潜在的途径.
- 张德勇周继勇
- 关键词：S1基因N基因VERO细胞
- 鸭白细胞介素2全基因组结构分析
- 2008年
- 依据鸡白细胞介素2(chIL-2)全基因组序列设计引物探针,以简易基因组抽提法获得的鸭外周血单核细胞基因组DNA为模板,用长距离聚合酶链式反应(LD-PCR)扩增出鸭白细胞介素2(duIL-2)全基因片段。经序列测定,得到的duIL-2基因组DNA序列全长为3528bp。运用生物信息学方法对duIL-2的基因、启动子结构和cDNA序列编码的成熟蛋白进行系统分析,结果表明,duIL-2基因具有典型的4个外显子和3个内含子结构,和已知禽类及哺乳类同系物基因总体结构具有明显的相似性。鸭和鸡及其他哺乳动物IL-2基因的启动子序列具有显著的保守性,都具有AP-1、NF-AT、CD28RE、OCT、TATAbox转录起始因子结合位点和预测的转录起始位点。duIL-2cDNA序列编码的成熟蛋白进化分析表明,鸭和鹅的亲缘关系最近,和哺乳动物的亲缘关系较远,显示出明显的种属差异。
- 王金勇齐静方杰颜焰申会刚周继勇
- 关键词：启动子进化分析
- 抗鸭IL-2单克隆抗体的制备与鉴定被引量：8
- 2004年
- 用纯化的重组鸭IL-2蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,对杂交瘤细胞进行筛选,阳性孔经三次有限稀释法克隆,成功获得5株能稳定传代并分泌抗鸭IL-2单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞,分别命名为:1H4、2B3、4G12、5F6、5H6,其中一株对鸡IL-2具有交叉反应性.各单克隆抗体腹水间接ELISA效价在1∶32000～1∶512000之间,抗体类型除mAb5H6为IgG2a亚类外,其余4株mAb均为IgG1亚类,5株mAb的轻链都为κ链.经Western-blot分析表明,所获得的5株抗鸭IL-2单克隆抗体与鸭IL-2具有反应性,推测它们是针对序列决定簇的.
- 龚辉吴建祥王金勇陈吉刚周继勇
- 关键词：IL-2单克隆抗体杂交瘤细胞脾细胞骨髓瘤细胞白细胞介素-2
- 传染性支气管炎病毒S1蛋白在Vero细胞的表达与分布被引量：1
- 2007年
- 将传染性支气管炎病毒(IBV)ZJ971 S1基因亚克隆到绿色荧光蛋白(GFP)表达载体pEGFP-C2中,成功构建重组表达质粒pEGFP-ZJ971-S1。重组质粒在脂质体的介导下转染Vero细胞,借助荧光显微镜在转染后4h观察到S1-GFP融合蛋白的瞬时表达。免疫细胞化学染色(ICC)结果显示,抗ZJ971 S1D蛋白单克隆抗体和鸡抗IBV ZJ971全病毒血清特异性识别了S1基因转染细胞,表明S1蛋白在Vero细胞中得到有效表达。荧光显微镜观察和ICC均表明,S1表达蛋白主要分布在转染细胞的胞浆内,而胞核中未见分布,提示IBV S1蛋白内可能存在与病毒装配相关的细胞定位信号。
- 胡金强蔡月琴李益飞郭军庆孙文博周继勇
- 关键词：传染性支气管炎病毒S1蛋白VERO细胞
- 鹅白细胞介素2基因的克隆与分子模型被引量：6
- 2007年
- 对鸡、鸭、火鸡IL-2的核苷酸序列进行比较,在其保守区设计引物,通过RT-PCR方法扩增和克隆了鹅白介素2（goIL-2）的核苷酸序列。该序列由768nt组成,编码一条由141个氨基酸组成的前体蛋白。goIL-2核苷酸序列和氨基酸序列与鸭IL-2（duIL-2）核苷酸序列和氨基酸序列的同源性为90.1%和83.6%,与鸡、火鸡和鹌鹑IL-2的同源性为69.7%-75%和61.0%-63.1%,与哺乳动物IL-2的同源性为25%-30%和14%-17%。氨基酸序列分析表明,N端存在一长21个氨基酸的信号肽,含有形成2个链内二硫键的4个半胱氨酸。goIL-2 mRNA的体外表达动力学分析表明,脾脏T淋巴细胞经ConA诱导2-24h均可检测到goIL-2 mRNA的表达。三维结构预测表明,goIL-2蛋白由A、B、C、D4个α-螺旋和2个β-折叠构成。遗传进化分析表明,goIL-2和duIL-2的亲缘关系最近。
- 陈吉刚周继勇
- 关键词：白细胞介素-2
