苏州市社会发展科技计划项目(SS08033)
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
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- 相关机构：苏州市立医院苏州大学南京医科大学更多>>
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- 信号转录激活子3基因shRNA慢病毒载体的构建与鉴定被引量：1
- 2010年
- 目的:构建人信号转录激活子3(STAT3)基因shRNA慢病毒载体。方法:从GenBank STAT3 mRNA上寻找到3条有效靶序列,合成3对针对靶序列的siRNA oligo,通过筛选获得最佳靶序列后合成相应的shRNA模板,将合成好的两条互补的DNA单链退火形成双链DNA,经与BamH Ⅰ和Xho I酶切的pRNAT-U6.2/Lenti载体连接后产生shRNA慢病毒载体,酶切和测序鉴定。结果:酶切和测序鉴证实合成STAT3shRNA慢病毒载体寡核甘酸链插入正确。结论:成功构建人STAT3基因shRNA慢病毒载体。
- 阮坚丽高源管文贤乔志明钱伟峰
- 关键词：RNA干扰慢病毒
- 慢病毒介导shRNA沉默STAT3表达对大肠癌HT-29细胞生长的影响
- 2010年
- 目的观察慢病毒介导shRNA沉默STAT3表达对大肠癌HT-29细胞生长的影响。方法将pRNAT-shSTAT3重组慢病毒质粒进行包装产生病毒液,测定其滴度,感染大肠癌HT-29细胞,筛选获得阳性细胞株,实时定量PCR和Westernblot检测shRNA对STAT3基因的沉默效率,MTT法检测细胞生长情况,流式细胞仪检测细胞周期变化。结果成功包装慢病毒,其病毒悬液的滴度为2×107TU/mL。病毒液感染大肠癌HT-29细胞,经G418筛选获得稳定细胞株,实时定量PCR和Western blot结果分别显示HT-29细胞STAT3mRNA表达和蛋白明显减弱,表达量分别为(16.9±2.1)%、(18.8±2.4)%(P<0.01)。MTT结果显示STAT3基因沉默后的大肠癌HT-29细胞生长明显减慢,G0/G1期细胞占(68.73±2.88)%,S期细胞占22.93±1.10%,与对照组相比差异显著(P<0.01)。结论慢病毒介导shRNA沉默STAT3表达对大肠癌HT-29细胞生长有明显的影响,细胞生长速度明显减慢,细胞阻滞于G0/G1期。
- 钱伟峰阮坚丽高源黄海
- 关键词：SHRNA大肠癌细胞
- 短发夹状干扰RNA沉默信号传导和转录激活子3基因表达对大肠癌细胞的影响被引量：2
- 2010年
- 目的构建携带信号传导和转录激活子3(STAT3)基因短发夹状干扰RNA(shRNA)的真核表达载体,观察干扰STAT3表达对大肠癌细胞HT-29细胞增殖的影响。方法从GenBank STAT3mRNA上寻找到3条符合特征的靶序列,合成靶序列的DNA寡核苷酸链,合成双链DNA,并和BamHⅠ和HindⅢ酶切后的pRNAT-U6.1/Neo载体质粒连接产生重组质粒,行PCR和测序鉴定。重组质粒瞬时转染大肠癌HT-29细胞,实时定量PCR、Western blot检测STAT3的表达。筛选出最佳重组质粒,转染大肠癌细胞后,MTT检测细胞的增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期变化。结果成功构建了携带有STAT3基因的shRNA的重组质粒,PCR和测序证实重组质粒构建正确。3种重组质粒对大肠癌HT-29细胞STAT3的表达有明显的抑制作用。筛选出的最佳重组质粒转染大肠癌细胞后,细胞增殖能力明显减弱;细胞周期分析显示,G0/G1期细胞占(74.80±1.85)%,S期细胞占(15.72±2.26)%,与对照组差异显著(P<0.01)。结论干扰STAT3基因的表达可以有效抑制大肠癌HT-29细胞的生长。
- 钱伟峰管文贤高源乔志明黄兴锐夏春林
- 关键词：RNA干扰SHRNASTAT3大肠癌
