国家自然科学基金(81270224)
- 作品数：11 被引量：27H指数：3
- 相关作者：王红刘晓丽夏曦吕娟马阳更多>>
- 相关机构：成都军区昆明总医院昆明医科大学贵州医科大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 端粒长度对心血管疾病预测价值的研究进展被引量：2
- 2016年
- 端粒是DNA双螺旋末端的一段TTAGGG高度重复的碱基序列,在细胞分裂过程中具有保护线粒体末端的作用[1]。但随着细胞分裂次数增多,端粒将发生不可逆的缩短。一旦细胞端粒缩短到一定程度,细胞即停止分裂,直至衰老死亡。从碱基结构来看,GGG三联序列意味着端粒更容易受到超氧自由基的攻击,因此,
- 吕娟王红
- 关键词：端粒心血管疾病
- 脂多糖结合蛋白与脂多糖结合位点模拟肽的筛选
- 2013年
- 目的应用噬菌体随机12肽库筛选脂多糖结合蛋白(LBP)与脂多糖结合位点的多肽序列。方法以脂多糖为固相筛选分子,对噬菌体12肽库进行4轮亲合筛选,采用酶联免疫吸附法鉴定筛选后的噬菌体克隆与脂多糖的结合活性,取结合活性较高的克隆进行DNA测序,推导其多肽序列并与LBP序列比对,再进行竞争抑制实验检测筛选噬菌体与LBP竞争结合的效力。结果选取的86个噬菌体克隆中,多数结合实验鉴定阳性,取20个亲和力最高的克隆测序,得到20条不同编码的12肽序列,20条多肽与LBP一级结构有不同程度同源性,均为模拟肽。12个噬菌体克隆有较高的竞争抑制率。结论用噬菌体12肽库成功筛选出LBP与脂多糖结合位点模拟肽,为进一步以这些多肽为先导物进行定向进化研究提供了实验依据和结构基础。
- 杨海捷杨韶艳刘晓丽谭志胜郭军王红
- 关键词：脂多糖结合蛋白噬菌体肽库模拟肽
- siRNA干扰TCAB1对人主动脉平滑肌增殖的影响及机制被引量：1
- 2019年
- 目的:探究TCAB1沉默对人主动脉平滑肌细胞(HASMC)增殖的影响及可能机制。方法:采用RNAi技术设计并合成靶向沉默TCAB1基因表达的三对特异性si RNA序列(si TCAB1-331、si TCAB1-619、si TCAB-749)和一对阴性对照序列(NC),使用lipo2000将si TCAB1、NC转染HASMC,分为3个组:干扰组(si TCAB1)、空白对照组(BC)、阴性对照组(NC),转染24小时倒置荧光显微镜观察细胞转染情况;通过RT-qPCR和Western blot从3个干扰靶点中筛选效果最好的干扰靶点。进一步转染si TCAB1-749后,MTS检测HASMC 24、48、72 h的增殖能力,48小时用RT-qPCR和Western blot检测CyclinD1表达量变化,流式细胞术检测HASMC的细胞周期变化。结果:RT-qPCR和WB结果显示si TCAB1-749为最好的干扰靶点;转染24、48、72 h后,si TCAB1-749组增殖水平明显低于NC组、BC组(P<0.05)。流式结果显示:si TCAB1-749组处于G1期细胞比率有所增加,处于S期细胞比率减少(P<0.05),且si TCAB1-749组细胞周期蛋白cyclinD1表达也下降(P<0.05)。结论:沉默TCAB1能抑制HASMC的增殖,其机制可能与阻碍细胞周期蛋白cyclinD1有关。
- 郑学忠高婧陈裕浩李青青王恩阳万怡轩王红
- 关键词：平滑肌细胞端粒酶细胞周期
- Id1和E2-2参与血管内皮损伤修复机制的研究进展被引量：3
- 2015年
- 血管内皮细胞及内皮祖细胞增殖、迁移是促进血管内皮损伤修复及有益再生,防治动脉粥样硬化等血管损伤性疾病的重要因素。近年来大量研究证明,分化抑制因子1(Id1)、转录因子E2-2在血管内皮细胞及内皮祖细胞增殖、迁移调控过程中起重要作用,共同参与血管内皮损伤修复,但机制尚不完全清楚。深入探讨Id1及E2-2对以上功能调控的分子机制将为促进血管内皮有益再生提供重要科学依据。
- 夏曦王红
- 关键词：分化抑制因子1增殖
- 不同端粒片段通过沉默信息调节因子1/抑癌基因P53促进血管平滑肌细胞凋亡被引量：2
- 2017年
- 目的:研究不同端粒寡核苷酸序列对大鼠胸大动脉平滑肌细胞(A7R5)凋亡的影响,及沉默信息调节因子1(SIRT1)/抑癌基因P53(P53)信号通路是否参与调控端粒寡核苷酸序列诱导A7R5的凋亡。方法:将三种端粒重复序列端粒寡核苷酸序列的二聚体、四聚体、六聚体[TE-12(TTAGGG)2、TE-24(TTAGGG)4、TE-36(TTAGGG)6]转染至A7R5,分别作为TE-12组、TE-24组、TE-36组,另设A7R5空白为阴性对照组。应用流式细胞仪检测各端粒寡核苷酸序列转染后A7R5的凋亡情况。采用逆转录多聚酶联反应(RT-PCR)及蛋白免疫印迹(Western-blot)检测TE-12组、TE-24组、TE-36组及阴性对照组SIRT1、P53基因及蛋白水平。结果:将TE-12、TE-24、TE-36成功转染进A7R5,各组转染率差异无统计学意义。TE-12组A7R5凋亡率明显高于TE-36组、TE-24组和阴性对照组,TE-24组细胞凋亡率最低,但亦明显高于阴性对照组,差异均有统计学意义(P均<0.05)。TE-12组A7R5SIRT1m RNA及蛋白水平明显高于TE-36组、TE-24组和阴性对照组,差异均有统计学意义(P均<0.05)。TE-24组A7R5P53m RNA及蛋白水平明显低于TE-36组、TE-12组和阴性对照组,差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论:端粒寡核苷酸序列促进A7R5的凋亡。不同结构的端粒寡核苷酸序列引起A7R5凋亡程度不同,在选取的三种结构中,端粒单链序列TE-12引起A7R5凋亡最明显。端粒寡核苷酸序列对A7R5凋亡的作用可能与SIRT1/P53信号通路有关。
- 吕娟王红
- 关键词：寡核苷酸类凋亡
- 和肽素与心力衰竭的研究进展被引量：3
- 2019年
- 随着老龄化社会的进展,心力衰竭的发病率一直居高不下,尽管心力衰竭相关治疗改善了患者的生活质量和预后,但目前心力衰竭仍是中国患者住院和死亡最常见的原因之一。近年相关研究表明,和肽素与心力衰竭的发生密切相关,和肽素可影响心室重构和舒张功能不全,从而导致心力衰竭的发生。此外,和肽素与心力衰竭发病预测、病情评估以及患者预后密切相关。现从和肽素与心力衰竭发生的关系和相关机制以及和肽素与心力衰竭的临床研究展开综述。
- 万怡轩王清岑郑学忠王红
- 关键词：和肽素心力衰竭
- Id-1介导E2-2对PI3K/Akt信号通路及内皮祖细胞增长的影响被引量：2
- 2017年
- 目的探讨分化抑制因子1(Id-1)和转录因子E2-2(E2-2)对PI3K/Akt通路的影响情况,并明确其在内皮祖细胞(EPCs)增长中的作用。方法采用免疫共沉淀检测Id-1及E2-2是否存在相互作用。在EPCs细胞模型中,过表达及干扰Id-1及E2-2,采用CCK-8法检测细胞增长情况,RT-PCR和Western blot技术检测PI3K及Akt表达水平。结果免疫共沉淀检测发现,Id-1及E2-2之间存在蛋白-蛋白相互作用。过表达Id-1可显著下调E2-2表达水平,上调PI3K/Akt表达水平,细胞增长能力增强;过表达E2-2后PI3K/Akt表达降低,细胞增长减弱;共转染Id-1及E2-2则发现,二者可协同影响PI3K/Akt表达水平。结论 Id-1和E2-2之间存在相互作用,Id-1对PI3K/Akt起促进作用,而E2-2则发挥抑制效应,二者协同调控PI3K/Akt信号通路,进而影响EPCs的增长。
- 马阳张黎夏曦王红
- 关键词：ID1PI3K/AKT通路
- 沉默IRE1α-XBP1信号通路对HASMC增殖及CyclinD1表达的影响被引量：2
- 2019年
- 目的探究IRE1α-XBP1信号通路对人主动脉平滑肌细胞(HASMC)增殖及CyclinD1表达的影响。方法使用lipo2000将siERN1(siERN1-a、siERN1-b、siERN1-c)和siXBP1干扰序列转染HASMC作为干扰组(si RNA),以不作任何处理的HASMC作为空白对照组(BC),转染无关序列的HASMC为阴性对照组(NC)。转染24 h后,倒置荧光显微镜下观察细胞转染情况,并检测转染效率及ERN1和XBP1基因的干扰效应。HASMC进一步转染siERN1-c和siXBP1后,检测HASMC转染前0 h及转染后24、48、72 h的增殖能力;转染后48 h,检测CyclinD1表达量和HASMC的细胞周期变化。结果转染后,siERN1-c和siXBP1组的ERN1和XBP1表达量明显下调(P <0.05);转染24、48、72 h后,siERN1-c、siXBP1组增殖水平明显低于NC组、BC组(P <0.05);siERN1-c、siXBP1组处于G1期细胞比率有所增加,处于S期细胞比率减少(P <0.05),并且si ERN1-c、siXBP1组细胞周期蛋白cyclinD1表达也下降(P <0.05)。结论沉默IRE1α-XBP1信号通路能抑制HASMC增殖,其机制与降低cyclinD1表达有关。
- 郑学忠陈裕浩王恩阳郭德镔高婧万怡轩王红
- 关键词：平滑肌细胞信号通路细胞周期蛋白D1
- 慢病毒介导shRNA沉默E2-2基因促进内皮前体细胞增殖被引量：1
- 2015年
- 目的构建小鼠转录因子基因E2-2 RNA干扰（RNA interference,RNAi）慢病毒载体,并观测其沉默E2-2基因对内皮前体细胞（endothelial progenitor cells,EPCs）增殖的影响。方法 SPF级昆明小鼠20只,雌雄不拘,4周龄,体质量18-20 g。分离、培养小鼠骨髓EPCs,并予以鉴定。针对E2-2基因mRNA序列,筛选3个siRNA干扰靶点并予以合成;将合成的siRNA导入EPCs,用RT-PCR法检测其对靶基因的抑制效果,以确定最佳siRNA。设计并合成针对最佳siRNA靶序列的shRNA,连入FT203-PLVX载体,构建慢病毒载体FT203-PLVX/E2-2shRNA,并予以测序鉴定。测序正确者经293细胞包装,形成具高效感染力的FT203-PLVX/E2-2shRNA慢病毒。将该重组慢病毒感染EPCs,倒置显微镜观测被感染细胞的绿色荧光蛋白（GFP）的表达变化、CCK-8法检测被感染细胞的增殖情况;在mRNA和蛋白水平分别检测并定量分析被感染细胞的E2-2及核抗原PCNA基因及其编码蛋白的表达变化。结果小鼠骨髓EPCs得以分离、培养与鉴定。筛检到E2-2基因的最佳干扰靶序列为CGTCAGCTAGTGTTTCTAA;测序证实,成功构建FT203-PLVX/E2-2 shRNA慢病毒载体。荧光观察显示,被慢病毒感染的EPCs明显表达GFP。CCK-8检测表明,与对照细胞比较,沉默E2-2的EPCs的增殖加快,48 h开始变得更为明显（P〈0.01）;mRNA和蛋白水平检测及定量分析结果显示,E2-2 shRNA慢病毒能有效沉默EPCs的E2-2,并上调其核抗原PCNA基因及其编码蛋白的表达。结论小鼠骨髓EPCs得以分离、培养与鉴定;成功构建E2-2基因RNAi慢病毒载体,该载体能有效沉默EPCs的E2-2基因,促使EPCs的增殖并上调其核抗原PCNA的表达。
- 刘晓丽马阳梁源喻杨梁云华王红
- 关键词：RNAI内皮前体细胞慢病毒
- NF-κB信号通路在动脉粥样硬化中的作用及机制研究进展被引量：9
- 2018年
- 动脉粥样硬化（AS）是心脑血管疾病的关键致病因素,目前认为AS是一种多因素、多步骤的疾病,涉及到氧化性低密度脂蛋白（OX-LDL）、黏附分子、细胞因子、生长因子、炎症细胞、血管内皮细胞（ECs）和血管平滑肌细胞（VSMCs）等多种因素的相互作用。
- 郑学忠万怡轩王清岑王红
- 关键词：动脉NF-ΚB信号通路
