广州市科技计划项目(2012J4100035)
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 相关作者：赖艳娴刘城裴静娴吴平生王月刚更多>>
- 相关机构：广州医科大学广州市第一人民医院更多>>
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- 低氧诱导因子-1α基因Asn_(803)位点在人骨髓间充质干细胞分化成心肌细胞中的作用被引量：2
- 2014年
- 目的研究低氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因Asn803位点在人骨髓间充质干细胞(hMSCs)分化成心肌细胞中的作用。方法将重组腺病毒Ad-LacZ、Ad-HIF-1αnative、Ad-HIF-1α564、Ad-HIF-1α564/402及AdHIF-1α564/803分别以最佳转染复数转染体外5-氮胞苷(5-aza)诱导的hMSCs,于诱导培养后第6周,(1)提取细胞浆蛋白,应用酶联免疫分析检测心肌肌钙蛋白I(cTnI)含量,Western blot测定HIF-1α及血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达水平;(2)更换含有120μmol/L姜黄素的心肌细胞诱导液培养1 h,后用心肌细胞诱导液继续培养11 h,接着用RT-PCR检测细胞中VEGF mRNA表达水平的变化。结果 hMSCs经5-aza诱导6周后,对照组、Ad-LacZ组、Ad-HIF-1αnative组、Ad-HIF-1α564组、Ad-HIF-1α564/402组及Ad-HIF-1α564/803组cTnI值分别为0.690±0.019、0.699±0.007、0.736±0.007、0.748±0.008、0.771±0.008及0.814±0.012(P<0.05),其中以Ad-HIF-1α564/803组cTnI表达水平最高(P<0.05)。Western blot结果显示:与Ad-LacZ组相比,Ad-HIF-1αnative组、Ad-HIF-1α564组、Ad-HIF-1α564/402组、Ad-HIF-1α564/803组HIF-1α及VEGF蛋白均明显升高(P<0.05),其中以Ad-HIF-1α564/402组HIF-1α蛋白表达水平最高(P<0.05),以Ad-HIF-1α564/803组VEGF蛋白表达水平最高(P<0.05)。RT-PCR检测结果显示:经120μmol/L姜黄素抑制后VEGF mRNA表达水平较未抑制组平均减少了(50.9±4.6)%。然而,在CBP/p300活性受同等抑制条件下,Pro564Asn803双突变型HIF-1α基因组VEGF mRNA表达水平虽然较未抑制组减少了约40%,但仍显著高于Pro564单突变型HIF-1α基因组(P<0.05)。结论 HIF-1α基因Asn803位点在HIF-1α促进hMSCs向心肌细胞分化中起关键作用。
- 刘城吴平生王月刚裴静娴赖艳娴
- 关键词：低氧诱导因子1Α人骨髓间充质干细胞心肌细胞
- 不同HIF-1α基因诱导人骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化的效能差异
- 2013年
- 目的研究腺病毒介导的野生型及突变型低氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)基因诱导人骨髓间充质干细胞(human mesenchymal stem cells,hMSCs)向心肌细胞(cardiomyocyte)分化过程中的效能差异。方法重组腺病毒Ad-LacZ、Ad-HIF-1αnative、Ad-HIF-1α564、Ad-HIF-1α564/402及Ad-HIF-1α564/803分别以最佳转染复数转染体外5-氮胞苷(5-azacytidine,5-aza)诱导的hMSCs,于诱导培养后第6周提取细胞浆蛋白,应用酶联免疫分析检测法或Western blot检测法分别测定其中的心肌肌钙蛋白I(cTnI)、HIF-1α、VEGF及Nkx2.5蛋白表达水平。结果经5-aza诱导hMSCs第6周cTnI值为:对照组(0.700±0.013)、Ad-LacZ组(0.702±0.006)、Ad-HIF-1αnative组(0.729±0.004)、Ad-HIF-1α564组(0.741±0.008)、Ad-HIF-1α564/402组(0.764±0.009)及Ad-HIF-1α564/803组(0.804±0.021),各实验组cTnI表达差异有统计学意义(P<0.05),其中尤以Ad-HIF-1α564/803组cTnI表达水平最高,与前述其它各组相比差异有统计学意义(P值均<0.05)。Western blot结果显示:与Ad-LacZ组相比,Ad-HIF-1αnative组、Ad-HIF-1α564组、Ad-HIF-1α564/402组、Ad-HIF-1α564/803组HIF-1α、VEGF及Nkx2.5蛋白均升高(P<0.05),其中以Ad-HIF-1α564/402组HIF-1α蛋白表达水平最高(P值均<0.05),以Ad-HIF-1α564/803组VEGF及Nkx2.5蛋白表达水平最高(P<0.05)。结论野生型及不同突变型HIF-1α基因均可促进hMSCs向心肌细胞分化,尤以Pro564 Asn803双突变型HIF-1α基因(HIF-1α564/803)作用最强。
- 刘城王月刚吴平生裴静娴赖艳娴
- 关键词：低氧诱导因子1Α骨髓间充质干细胞分化
