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TLR4基因的shRNA对内毒素刺激下RAW264．7细胞TLR2表达的影响及机制: 2008年; 目的观察针对T0u样受体4的发夹结构RNA（short hairpin RNA，shRNA）对内毒素刺激后小鼠巨噬细胞系RAW264．7细胞Toll样受体2表达的影响，并探讨其机制。方法将携带增强型绿色荧光蛋白（EGFP）及shRNA克隆位点的质粒pEGFP／TLR4-siRNA，运用脂质体Lipofectamine2000转染至小鼠巨噬细胞系RAW264．7。转染24h后予新霉素（G418）筛选获取稳定转染细胞株。然后将细胞分为三组：空白组（Blank group），未转染细胞LPS刺激组（LPS group）和稳定转染细胞LPS刺激组（LPS-TLR4-siRNA group），采用荧光定量PCR及流式细胞学方法检测各组细胞TLR2 mRNA和蛋白的表达，Westem blot检测NF—κB p65的表达，同时用ELISA方法检测细胞分泌的TNF-α水平的变化。结果将pEGFP／TLR4-siRNA转染至RAW264．7细胞后，增强型荧光蛋白的表达为（45．25±9．23）％。LPS-TLR4-siRNA组细胞的TLR2mRNA及蛋白的表达均明显低于LPS组（P〈0．05），同时NF-κBp65表达下调及分泌TNF-α的水平下降（P〈0．01）。结论针对TLR4 mRNA的shRNA能降低LPS刺激下的RAW264．7细胞TLR2的表达。; 徐建波吴河水张进祥王琳陈凤花王春友; 关键词：RNA干扰内毒素 TOLL样受体

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国家自然科学基金(30200722)