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湖北省科技攻关计划(2007AA301825-1)
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吴新红
陈继红
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肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对Omi/HtrA2不同表达水平前列腺癌细胞的促凋亡作用
2010年
目的观察肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对前列腺癌细胞(PC-3M)不同丝氨酸蛋白酶Omi/HtrA2表达水平的促凋亡作用。方法构建其小分子干扰RNA(siRNA)表达载体,辅助设计Omi/HtrA2特异性siRNA序列。合成后克隆入真核表达载体psiRNA—hH1 neo。脂质体法转染psiRNA-Omi/HtrA2载体至PC-3M中,检测Omi/HtrA2在PC-3M细胞中的表达及psiRNA-Omi/HtrA2对Omi/HtrA2沉默效应后的转录和表达。用原位末端转移酶标记技术检测Omi/HtrA2基因沉默后,计算不同浓度TRAIL(50、100、200、500μg/L)下PC-3M细胞凋亡指数(AI)。结果Omi/HtrA2在PC-3M细胞中高表达。酶切和DNA测序证实siRNA基因序列正确,且准确克隆人psiR—NA—hH1neo载体中。psiRNA—Omi/HtrA2载体可特异性抑制PC.3M细胞中Omi/HtrA2的表达。不同浓度TRAIL(50、100、200、500斗g/L)对转染psiRNA-Omi/HtrA2载体后PC.3M细胞A1分别为7.23、14.87、22.65、31.78。而未转染组分别为15.28、24.17、36.33、47.76。两组之间差异有统计学意义(P〈0.05)。结论Omi/HtrA2在前列腺癌细胞凋亡过程中起重要作用,TRAIL促进前列腺癌细胞的凋亡,其效果与TRAIL浓度及Omi/HtrA2表达水平相关。
魏少忠
吴新红
陈继红
郑新民
关键词:
小分子干扰RNA
前列腺癌
肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体
丝氨酸蛋白酶
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