国家自然科学基金(30870497)
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- 突变型人TRBP基因的构建及表达
- 2012年
- 目的:探讨RNAi过程中TRBP传递双链RNA的机制,构建RNA结合结构域突变的人TRBP基因真核表达载体。方法:设计突变引物,通过拼接PCR将突变型TRBP基因克隆入pFLAG-CMV4真核表达载体,经双酶切和测序鉴定正确后,命名为pFLAG-CMV4-TRBPm。瞬时转染HEK-293细胞,western-blot检测目的蛋白表达。结果:成功扩增了突变序列,构建了突变型TRBP基因的真核表达载体,转染HEK-293细胞后检测到带标签的目的蛋白表达。结论:突变型TRBP基因真核表达载体的成功构建,为进一步研究TRBP的生物学效应奠定了基础。
- 李俊堂王立锋王芳杨韬许彦鸣杨安钢
- 关键词：突变真核表达
- 人TRBP基因在HEK-293细胞中的表达
- 2009年
- 目的:构建携带人TRBP(TAR RNA结合蛋白)基因的真核表达载体,并将其在HEK-293细胞中表达.方法:用RT-PCR的方法扩增获得TRBP全长cDNA,然后克隆入pFLAG-CMV4真核表达载体.脂质体法瞬时转染HEK-293细胞,间接免疫荧光和Western Blot检测目的蛋白表达.结果:成功获得了全长的TRBP cDNA,构建了含人的TRBP cDNA的真核表达载体.转染HEK-293细胞后提取蛋白,经电泳观察到在Mr46000存在与目的蛋白分子质量相符的条带,该条带可被抗TRBP多克隆抗体及抗FLAGmAb特异性识别.结论:TRBP哺乳动物表达系统的建立,为进一步研究TRBP的生物学效应奠定了基础.
- 李俊堂王立锋王芳许彦鸣杨安钢
- 关键词：TARRNA结合蛋白基因表达HEK-293细胞
