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造血微环境免疫状态对IRHS骨髓单个核细胞端粒酶活性的影响及临床意义被引量：5: 2014年; 目的:观察免疫相关性血细胞减少综合征(Immune related hematocytopenia syndrome,IRHS)患者骨髓造血微环境免疫分子表达状态,对骨髓单个核细胞(BMMNC)端粒酶活性(TA)的影响,探讨对造血细胞破坏的免疫损伤机制及临床意义。方法:①端粒重复序列扩增-酶联免疫吸附法(TRAP-PCR-ELISA)检测366例IRHS患者治疗前后BMMNC的TA。②免疫化学染色和免疫荧光染色,观察患者骨髓细胞和造血微环境中HLA-DR、抗人IgG、FcγⅡ受体(FcγⅡR)、甘露糖受体(MR)、白细胞介素17A(IL-17A)及受体表达。③FACS技术检测患者外周血淋巴细胞CD3+CD4+T细胞、CD3+CD8+T细胞、CD3-CD16+/CD56+NK细胞和CD19+B细胞比例。60例健康查体者外周血淋巴细胞亚群作为正常对照,30例缺铁性贫血患者骨髓作为疾病对照。结果:①IRHS患者治疗前端粒酶活性为0.2617±0.0216,高于疾病对照组(0.0616±0.0313,P<0.01);其中HLA-B27+组高于HLA-B27-组(0.3013±0.0206比0.1923±0.0129,P<0.05),HLA-B27+IgG升高的重度IRP患者显著高于HLA-B27-IgG升高组(0.4016±0.0172比0.2211±0.0110,P<0.01)。②HLA-B27+IgG+组骨髓免疫细胞和造血微环境呈现细胞免疫活化和体液免疫均紊乱状态,高表达HLA-DR、FcγⅡR、IL-17A、IL-17RA和MR等免疫分子,外周血CD3+CD4+T细胞、CD3+CD8+T细胞和CD3-CD16+/CD56+NK和CD19+B细胞比例呈不同程度升高,造血破坏呈现多样性。③而HLAB27-IgG+组骨髓免疫细胞和造血微环境呈现体液免疫活化优势状态,高表达FcγⅡR,IL-17A等炎性因子不表达或弱表达,外周血仅CD19+B细胞比例升高,骨髓造血破坏方式主要为抗体依赖性细胞毒性(ADCC)效应。经糖皮质激素联合环孢素A等药物治疗后,患者血象恢复时BMMC的端粒酶重新失活,TA为0。结论:IRHS骨髓单个核细胞端粒酶活化,与患者骨髓造血微环境免疫状态和病变血细胞病理性损害程度密切相关。病毒感染和细胞免疫活化,多种炎性因子参与IRHS造血免疫损伤; 孙黎飞吴强强韩冰郝红峰许刚杜延会明汇王桂臣张金标; 关键词：端粒酶活性 HLA-B27 免疫分子

免疫相关性血细胞减少患者骨髓造血细胞岛的免疫损伤研究被引量：2: 2012年; 目的探讨免疫相关性血细胞减少(immuno-related hematocytopenia,IRH)患者骨髓"造血细胞岛"(hematopoietic islands,HI)对病变造血细胞破坏的免疫机制。方法 ELISA法检测患者血清IL-12和IL-17水平,观察其体内炎性因子的含量,免疫荧光(immunofluorescence,IF)染色,观察其骨髓HI中免疫细胞Fcγ受体Ⅱ(Fcγrecepter Ⅱ,FcγRⅡ)、甘露糖受体(mannose receptor,MR)、IL-12、IL-17A、IL-17RA和ICAM-1表达,分析HI的相关病理作用。结果 37例患者血清IL-12和IL-17的水平分别为(318.59±20.13)ng/L和(45.81±8.27)ng/L,显著高于对照组[(94.05±3.26)ng/L和(20.03±1.14)ng/L];经治疗后均下降近正常,较治疗前差异显著,P<0.01。患者骨髓中HI主要为抗体依赖性细胞毒(antibody dependent cell cytotoxicity,ADCC)型、巨噬细胞型(Mφ)和抗原提呈(antigen presenting,AP)型3种,HI中的免疫细胞高表达FcγRⅡ、MR,呈分泌状表达IL-12、IL-17A、IL-17RA和ICAM-1,在上述免疫分子的介导下,发挥体液免疫和细胞免疫及炎性损伤作用,破坏病变的造血细胞。结论 IRH患者骨髓中不同造血细胞岛是活化的免疫细胞破坏病变血细胞的不同免疫形式,是造血细胞在骨髓中"原位破坏的"重要场所。; 孙黎飞刘长伟李钢韩冰吴强强张金标; 关键词：甘露糖受体

IL-17等炎性因子在风湿免疫相关性血细胞减少骨髓细胞中的分泌状态及其临床意义被引量：9: 2013年; 目的:观察风湿免疫相关性血细胞减少(Rheumatism immune-related hematocytopenia,RIRH)患者骨髓免疫细胞炎性因子分泌状态,探讨其对骨髓造血细胞损伤的病理作用及临床意义。方法:①ELISA法检测66例RIRH患者血清IL-5、IL-10、IL-12、IL-17和IFN-γ浓度,对照组30例采自健康查体血清;免疫化学法观察骨髓免疫细胞HLA-DR表达;②免疫荧光法观察骨髓细胞抗人球蛋白(IgG)抗体、FcγⅡ受体(FcγⅡR)、甘露糖受体(MR)、ICAM-1、IL-12、IL-17A与IL-17RA表达;30例缺铁性贫血患者骨髓作为疾病对照;③随机抽取32例血小板>50×109L-1无出血倾向患者,常规治疗同时联合复方丹参促进炎性因子代谢,与30例不联合复方丹参患者对照治疗效果。结果:①66例患者血清IL-5、IL-10、IL-12、IL-17和IFN-γ浓度分别为(126.04±7.66)ng/L,(316.23±25.163)ng/L,(328.43±27.01)ng/L,(48.17±4.22)ng/L和(40.28±3.69)ng/L,较之对照组(33.16±2.17)ng/L,(176.25±10.69)ng/L,(94.05±3.26)ng/L,(20.03±1.14)ng/L和(8.25±2.01)ng/L显著升高;②骨髓中活化的组织嗜碱细胞、嗜酸性粒细胞(EOS)、树突状细胞和巨噬细胞(Mφ)等免疫细胞高表达HLA-DR、FcγⅡR、MR、ICAM-1、IL-12、IL-17A和IL-17RA;③32例IRHS患者联合复方丹参组经治疗2周后,血清IL-5和IL-17含量较之对照组显著降低,血象恢复时间较之对照组提前1周。结论:RIRH患者骨髓中多种免疫细胞活化,表达和分泌多种免疫分子,介导ADCC效应、细胞免疫功能和炎性反应,是损伤病变的造血细胞的重要免疫机制。抗感染、抑制免疫联合复方丹参活血化瘀,能改善骨髓造血微环境,促进造血恢复。; 孙黎飞孙志宏吴强强张晓席杜延会王桂臣; 关键词：IL-5 IL-17 炎性因子造血微环境复方丹参

嗜酸性粒细胞的抗白血病肿瘤免疫功能的探讨: 2013年; 目的探讨嗜酸性粒细胞（EOS）在慢性粒细胞白血病（CML）患者骨髓中的抗肿瘤细胞免疫功能.方法逆转录PCR观察CML患者外周血纯化EOS的BCR-ABL融合基因、IL-12 mRNA和IL-17 mRNA表达情况.酶联免疫吸附试验检测CML患者血清中IL-12和IL-17浓度；观察患者骨髓EOS中过氧化物酶（POX）和人类白细胞抗原（HLA）-DR表达,免疫荧光观察患者骨髓涂片中EOS甘露糖受体（MR）、IL-12、IL-17A和IL-17RA表达水平,并与正常健康人群对比.结果 60例CML患者血清IL-12和IL-17水平分别为（196.33 ±21.79） ng/L和（36.55±3.01） ng/L,明显高于对照组的（96.60 ±4.92） ng/L和（23.74±1.36） ng/L（P值均＜0.01）.32例骨髓EOS活化组患者IL-12和IL-17的水平分别为（273.12±17.16） ng/L和（40.11±6.13） ng/L,显著高于EOS未活化组的（126.16±14.27） ng/L和（28.14±5.29）ng/L（P值均＜0.01）.EOS表达IL-12和IL-17 mRNA,不表达BCR-ABL融合基因.CML骨髓和外周血EOS明显增多,胞浆内POX强阳性,弱表达HLA-DR,以黏附、捕获和吞噬状态攻击肿瘤细胞.活化状态的EOS高表达MR、IL-12、IL-17A和IL-17RA,与患者血清细胞因子水平密切相关.结论 CML骨髓中活化的EOS表达IL-12 mRNA和IL-17 mRNA,可通过释放POX、分泌IL-12和IL-17介导细胞免疫和炎症反应破坏白血病肿瘤细胞；通过表达MR捕获和吞噬细胞,在CML患者体内发挥重要的抗肿瘤免疫生物学效应.; 孙黎飞吴强强郝红峰马向杉杜延会王桂臣张金标; 关键词：嗜酸细胞 IL-17 IL-12 甘露糖受体

免疫相关性血细胞减少患者骨髓造血细胞端粒酶活性检测的临床意义被引量：7: 2012年; 目的观察免疫相关性血细胞减少和全血细胞减少（IRH／IRP）患者治疗前后骨髓单个核细胞（BMMNC）端粒酶活性变化，探讨端粒酶活化与该类疾病的关联及临床意义。方法端粒重复序列扩增-酶联免疫吸附法（TRAP-PCR-ELISA）检测108例IRH／IRP患者BMMNC的端粒酶活性，免疫荧光染色观察患者骨髓细胞抗人IgG、FcγⅡ受体（FcγⅡR）、白细胞介素17A（IL-17A）和甘露糖受体（MR）表达，30例缺铁性贫血患者作为疾病对照。结果IRH／IRP患者治疗前端粒酶活性为0．251±0．021，高于疾病对照组（0．062±0．031，P〈0．01）；其中HIA-B27＋患者高于HLA-B27-患者（0．270．4-0．020比0．181．4-0．013，P〈0．05），HIJA．B27＋IgG升高的重度IRP患者显著高于HLA-B27-IgG升高患者（0．341-4-0．016比0．183±0．010，P〈0．01）。IRH／IRP患者骨髓中可见抗人IgG抗体阳性的幼稚血细胞，IgG升高者骨髓中活化的巨噬细胞（Mφ）高表达FcγIIR，HLA-B27＋患者骨髓活化的树突细胞和Mφ高表达IL-17A和MR。经糖皮质激素联合环孢素A等药物治疗后患者血象恢复时,BMMNC的端粒酶重新失活。结论IRH／IRP患者骨髓BMMNC端粒酶活性增强，其活化的强度与免疫细胞活化的群体对病变造血细胞病理性损害程度相关，具有同步性和均衡性。; 孙黎飞韩冰吴强强刘长伟李钢马向杉郝红峰; 关键词：端粒末端转移酶 HLA-B27抗原白细胞介素17

HLA-B27异常表达在免疫相关性血细胞减少疾病中的临床意义及相关机制研究被引量：6: 2013年; 目的观察免疫相关性血细胞减少(immunorelated hematocytopenia,IRH)和免疫相关性全血细胞减少(immunorelated pancytopenia,IRP)患者HLA-B27群体表达情况,分析HLA-B27检测分型对该类疾病诊疗的临床意义。方法①ELISA方法检测患者血清HLA-B27抗原、IL-12、IL-17和IFN-γ水平。②细胞免疫化学(immunochemistry,IC)染色观察骨髓中抗原递呈细胞(APC)HLA-DR表达情况。③原位免疫荧光(immunofluorescence,IF)染色,观察患者骨髓造血细胞表面抗人球蛋白IgG、FcγⅡR、甘露糖受体(MR)、IL-12和IL-17A表达情况。④根据HLA-B27和血沉等检测指标对IRH/IRP分型选择治疗方案。结果①106例IRH/IRP中45例(42.45%)血清HLA-B27显著升高(70.03±8.21)pmol/L,对照组仅2例(6.0%),P<0.01。②HLA-B27+组血清IL-17和IFN-γ血清质量浓度分别为(50.26±3.67)pg/ml和(42.95±3.64)pg/ml,显著高于HLA-B27-组(36.11±2.17)pg/ml和(28.875±5.81)pg/ml,P值均<0.05。③IRH/IRP患者骨髓中树突状细胞(DC)和巨噬细胞(Mφ)捕获和吞噬血细胞现象活跃,活化的DC与Mφ高表达HLA-DR抗原,HLA-B27+组骨髓中可见到淋巴细胞攻击造血细胞现象;粒细胞减少的患者骨髓中嗜酸性粒细胞攻击粒细胞现象多见。④IRH/IRP患者骨髓中部分造血细胞表面表达抗人IgG,DC和Mφ表达MR、IL-12和IL-17A,并介导对病变造血细胞的捕获和吞噬和炎性损伤。⑤在伴有IgG和ESR升高的患者骨髓中活化的Mφ高表达FcγRⅡ受体,发挥ADCC效应介导对病变造血细胞的损伤。结论 IRH/IRP是一类涉及细胞免疫和体液免疫多个环节,主要累及骨髓造血细胞且具有基因易感性的免疫相关性血细胞减少性疾病。部分患者发病与HLA-B27基因活化状态有一定关联,HLA-B27+伴体液免疫指标活化者病情更重。HLA-B27检测对疾病的评估、治疗和预后有着重要的临床意义。; 吴强强孙黎飞韩冰李钢马向杉郝红峰; 关键词：HLA-B27 IL-17

嗜酸粒细胞在自身免疫相关血细胞减少中的病理效应及临床意义被引量：4: 2013年; 目的观察嗜酸粒细胞（EOS）在免疫相关血细胞减少或全血细胞减少（IRH／IRP）患者骨髓造血细胞原位损伤的病理效应，探讨相关免疫机制及临床意义。方法ELISA法检测2008年2月至2012年2月解放军第一四八医院济南军区肿瘤诊疗专科中心117例IRH／IRP患者血清白细胞介素（IL）．2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-12和IL-17含量，观察患者骨髓EOS数量、活化状态、过氧化物酶活性和HLA—DR表达，免疫荧光染色观察EOS和造血细胞表达抗人IgG及细胞问黏附分子（ICAM）-1、Fcγ／受体Ⅱ型（FcγRⅡ）、甘露糖受体（MR）、IL-5受体（IL-5R）、IL-12、IL-12受体（IL-12R）、IL-17A及IL-17A受体（IL-17RA）表达，TdR掺入法检测EOS抗原提呈能力，反转录（RT）-PCR方法检测EOSIL-17mRNA表达。结果IRH／IRP患者血清IL4、IL-5、IL-6、IL-12和IL-17分别为（170．9±14．7）、（112．9±8．2）、（131．8±13．8）、（339．2-4-26．1）和（42．5±2．2）ng／L，显著高于健康对照组[（60．3±11．0）、（34．1±2．2）、（91．0±12．3）、（94．0±3．3）和（20．0．4-1．1）ng／L]。117例（100％）患者IL-5、IL-12和IL-17均升高。显微镜下白细胞减少伴HLA-B27^＋者，骨髓中EOS黏附、捕获和吞噬血细胞现象多见；活化的EOS过氧化物酶强阳性，被攻击的中性粒细胞则过氧化物酶活性减弱或消失；活化的EOS表达HLA-DR和自身抗体IgG，能增强EOS抗原提呈能力。EOS表达IL-17mRNA，具有分泌IL-17的功能；骨髓中EOS表达IL-17A和ICAM-1、FcγRⅡ、MR、IL-5R、IL-12、IL-17A和IL-17RA等众多免疫分子。结论EOS能分泌和表达多种免疫因子，具有黏附、捕获和吞噬病变血细胞功能，参与IRH病理过程的多个环节，是骨髓造血细胞原位损伤的重要免疫效应细胞。; 孙黎飞韩冰吴强强马向杉郝红峰许刚; 关键词：全血细胞减少嗜酸细胞甘露糖受体

骨髓造血细胞岛在免疫相关性血细胞减少患者中的异质性研究被引量：6: 2012年; 目的:观察免疫相关性血细胞减少或免疫相关性全血细胞减少(Immuno-related hematocytopenia/immuno-relat-ed pancytopenia,IRH/IRP)患者骨髓"造血细胞岛"(Hematopoietic islands,HI)的不同性质,分析其与MHCⅠ/Ⅱ类分子和骨髓造血细胞抗人球蛋白(IgG)的关联,探讨相关免疫机制及其对临床诊疗的指导意义。方法:①对37例IRH/IRP患者骨髓涂片行常规瑞氏染色,观察HI的细胞成分和岛中免疫细胞性质;②细胞化学染色观察HI中免疫细胞过氧化物酶(POX)活性和铁贮存情况;③HLA-DR抗体免疫化学染色,观察免疫细胞MHCⅡ分子表达情况;④抗人IgG免疫荧光抗体(Immunofluores-cence,IF)染色,观察造血细胞和免疫细胞表面抗人IgG抗体表达;⑤观察不同HI在患者骨髓中出现的情况。结果:①HI中的造血细胞和免疫细胞各异,并与患者血沉和IgG、血清HLA-B27抗体浓度和过氧化物酶(POX)、HLA-DR和IF染色表达情况密切相关。②根据免疫细胞的生物学性质分为抗体依赖细胞介导的细胞毒作用(Antibody dependent cell cytotoxicity,AD-CC)型HI、巨噬细胞(Mφ)型HI、抗原提呈(Antigen presenting,AP)型HI、浆细胞型HI和幼粒细胞型HI 5种。③HI中幼稚的造血细胞膜上均表达抗人IgG荧光抗体,HI中免疫细胞与造血细胞接触处和抗原提呈细胞(Antigen presenting cells,APC)浆中呈现不同的强阳性IF颗粒。④Mφ型HI数量最多,常与ADCC型HI在血沉升高患者骨髓中同时出现,HLA-B27和血沉均升高的IRP患者骨髓中可同时存在ADCC型、Mφ型和AP型HI。结论:IRH/IRP患者骨髓幼稚造血细胞膜表面抗原改变产生抗人IgG抗体是HI产生的基础;HI异质性及在骨髓中出现的不同形式则为患者体液免疫和细胞免疫不同程度的活化对造血细胞多重性损伤的生物学表现。; 孙黎飞韩冰李钢吴强强郝红峰明汇张金标; 关键词：MHC分子 HLA-DR

人类白细胞相关抗原B27在免疫相关性血细胞减少患者诊疗中的意义被引量：8: 2012年; 为探讨人类白细胞相关抗原B27（HLA-B27）基因与免疫相关性血细胞减少（IRH）和全血细胞减少（IRP）发病的相关性，本研究观察了106例IRH／IRP患者血清中HLA-B27基因表达产物HLA-B27，抗原含量，分析HLA—B27，升高与该类疾病造血细胞损伤的可能关联及其临床意义。; 孙黎飞韩冰吴强强郝红峰王冬青岳青张金标; 关键词：人类白细胞相关抗原 HLA-B27 基因表达产物诊疗全血细胞减少

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