国家科技支撑计划(2011BAD17B01-01-3)
- 作品数：9 被引量：38H指数：4
- 相关作者：张铁军杨青川康俊梅李燕房锋更多>>
- 相关机构：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所中国农业科学院植物保护研究所中国农业大学更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划中央级公益性科研院所基本科研业务费专项中国农业科学院北京畜牧兽医研究所基本科研业务费更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 紫花苜蓿DExD/H box RNA解旋酶基因的克隆与分析
- 2013年
- 基于紫花苜蓿(Medicago sativa L.)盐胁迫抑制消减杂交文库中的一条EST序列,使用RACE技术克隆得到一条1678bp的cDNA序列。核酸序列分析表明该cDNA序列包含一个1281bp的最大开放阅读框,编码426个氨基酸,与拟南芥(Arabidopsis thaliana)RNA解旋酶RH15和RH56的氨基酸序列相似性在90%以上,将该基因命名为MsRH(GenBank序列号:JX508648)。对此基因编码蛋白进行结构域预测表明其含有明显的DEXDc和HELICc结构域,预测其为DExD/H box RNA解旋酶。洋葱(Allium cepa)表皮细胞亚细胞定位分析表明MsRH定位于细胞核。为进一步研究此基因的功能,构建了MsRH基因的超表达载体pBI-MsRH,使用农杆菌介导法转化烟草(Nicotiana tobacum),筛选得到5株具有卡那霉素抗性再生烟草植株。PCR和RT-PCR检测结果表明MsRH基因成功插入烟草基因组中并表达。使用250mM NaCl处理7d后,转基因烟草中脯氨酸含量低于野生型烟草,而丙二醛和相对电导率则高于野生型烟草。初步试验结果表明转MsRH基因烟草对盐敏感性升高。
- 高燕丽龙瑞才康俊梅张铁军杨青川董宽虎
- 关键词：紫花苜蓿解旋酶亚细胞定位烟草转化
- 紫花苜蓿QTL与全基因组选择研究进展及其应用被引量：8
- 2014年
- 四倍体紫花苜蓿是重要的豆科牧草之一,由于其复杂的遗传背景与二倍体作物相比遗传作图与重要性状数量性状位点(quantitative trait locus,QTL)定位研究相对滞后。然而,二倍体苜蓿的相关研究起步较早,已经建立了高密度遗传图谱和物理图谱,这些研究为四倍体苜蓿遗传作图与QTL定位奠定了基础。随着第三代分子标记与测序技术的快速发展,极大地促进了四倍体苜蓿的高密度遗传图谱构建与QTL定位研究,并借助分子标记辅助育种技术对提高苜蓿选育效率,加速育种进程具有重要意义。本文对苜蓿遗传图谱构建与QTL定位研究及发展趋势进行了总结,并对苜蓿关联作图与全基因组选择的研究进展及应用前景加以概述,旨在为读者就相关研究领域有较全面的了解。
- 康俊梅张铁军王梦颖张怡杨青川
- 关键词：苜蓿遗传连锁图谱QTL全基因组选择分子标记辅助育种
- 紫花苜蓿MsZIP基因超表达载体的构建及烟草转化被引量：4
- 2012年
- 根据已经克隆得到的MsZIP基因(GenBank序列号:HQ911778),合成编码区cDNA,构建植物超表达载体PBI-MsZIP。将MsZIP基因插入到含有启动子35S和终止子nos的载体PBI121中,酶切鉴定表明,目的基因已经正确的插入到载体中,超表达载体构建成功。采用CaCl2冻融法将其转入农杆菌中,然后采用农杆菌介导的方法转化烟草(Nicotiana tobacum),共得到12株抗性烟草苗,选取其中长势良好的3株进行分析。结果表明:转基因烟草的PCR,RT-PCR和Southern-blot检测均得到了与目的条带大小一致的片段,说明已经成功获得了能够表达MsZIP基因的转基因烟草;进一步对转基因烟草进行组织化学染色分析,该基因在根、茎、叶中都可以表达。本试验为MsZIP基因功能的研究提供了理论依据和试验材料。
- 李燕康俊梅张铁军杨青川房锋
- 关键词：紫花苜蓿烟草转化
- 紫花苜蓿MsARGOS基因的克隆及对拟南芥的转化被引量：6
- 2014年
- 利用RT-PCR技术在紫花苜蓿中克隆出拟南芥ARGOS同源基因,命名为MsARGOS,MsARGOS基因编码区长234bp,编码77个氨基酸。通过DNA重组技术将其与载体pBI121连接,成功构建了植物表达载体35Spro::MsARGOS,并采用花序侵染法对拟南芥的腋生花序进行侵染,获得具有卡纳抗性的转基因植株,通过PCR和RT-PCR技术检测证明,目的基因已整合入拟南芥基因组中并能够成功表达。
- 王梦颖晁跃辉丛丽丽杨青川康俊梅张铁军
- 关键词：紫花苜蓿拟南芥
- 紫花苜蓿MsZIP基因RNAi表达载体的构建及苜蓿转化被引量：2
- 2012年
- 根据已经得到的MsZIP基因序列(GenBank序列号:HQ911778),设计两对含有酶切位点的引物ZIPF1/ZIPF2和ZIPR1/ZIPR2,合成用于构建干扰载体的正反义片段。将正反义片段插入到载体pART27中,构建成为含有发夹结构的RNAi干扰载体pART-F-R。采用农杆菌介导的方法,将该干扰载体成功转化到苜蓿中,得到9株抗性苗,选取其中的3株进行PCR鉴定,结果表明成功得到转基因苜蓿。
- 李燕孙彦康俊梅张铁军杨青川房锋
- 关键词：紫花苜蓿
- 紫花苜蓿MsPOD基因的克隆及对拟南芥的转化被引量：12
- 2013年
- 利用RT-PCR技术从紫花苜蓿中克隆出过氧化物酶基因,命名为MsPOD,并通过DNA重组技术将其连接到载体pBI121上,成功构建植物表达载体pBI-MsPOD;将表达载体转化到感受态农杆菌株GV3101中,利用花序浸泡法获得具有卡纳抗性的转基因拟南芥植株。对其中3个再生植株进行PCR检测表明,目的基因已经成功整合到拟南芥基因组中,通过RT-PCR和GUS染色检测分析,初步证明目的基因在拟南芥中成功表达。
- 张怡康俊梅杨青川晁跃辉张铁军金洪
- 关键词：紫花苜蓿过氧化物酶拟南芥
- 3个紫花苜蓿乙烯应答因子基因的克隆与分析
- 2012年
- 【目的】克隆3个紫花苜蓿乙烯应答因子基因,分析其在不同条件下的表达特性;构建植物表达载体并转化烟草,对转基因烟草的耐盐性进行初步鉴定。【方法】根据已获得的cDNA序列设计引物,扩增MsERF5、MsERF8和MsERF11的DNA序列,并分析基因结构;利用半定量RT-PCR技术分析其组织表达特异性和胁迫条件下的表达特性;通过农杆菌介导的方法转化烟草,鉴定盐胁迫条件下转基因烟草的表型和生理生化特性,初步验证其功能。【结果】MsERF5、MsERF8和MsERF11都不包含内含子。MsERF5在根、叶和花蕾中的表达量高于茎和花;MsERF8在根和叶中的表达量高于茎、花蕾和花;MsERF11在叶中的表达量最高;3个基因都能被多种非生物胁迫(盐、干旱、铝)和激素(脱落酸、赤霉素、乙烯利、水杨酸和茉莉酸甲酯)诱导,但表达模式不同。在盐浓度为200 mmol.L-1的筛选培养基上只有导入目的基因的愈伤组织能产生不定芽,250 mmol.L-1NaCl处理再生植株10 d,转基因植株和野生型植株叶片的电导率和可溶性糖含量均呈现上升趋势,但野生型植株叶片的电导率显著高于转基因植株,可溶性糖含量则显著低于转基因植株(P<0.05);转基因植株和野生型植株叶片的叶绿素含量均呈现下降趋势,野生型植株叶片叶绿素含量显著低于转基因植株(P<0.05);盐胁迫条件下,转化不同基因的再生植株的电导率、叶绿素和可溶性糖含量没有显著差异(P>0.05)。【结论】3个紫花苜蓿乙烯应答因子基因都不包含内含子,其表达具有组织特异性,都能被多种非生物胁迫和激素诱导,能够使烟草愈伤组织在含盐培养基上形成不定芽并最终产生转基因植株,且转基因植株的耐盐性高于野生型植株。
- 陈婷婷杨青川康俊梅丁旺张铁军张新全
- 关键词：紫花苜蓿烟草转化盐胁迫
- 紫花苜蓿MsRBP基因的克隆、分析及烟草的遗传转化
- 2013年
- 采用RACE技术以一段紫花苜蓿(Medicago sativa)盐诱导基因的EST(expressed sequence tag)序列为模板设计引物克隆此基因的全长序列。序列分析结果表明,该基因全长1551bp,包含一个1230bp的最大开放阅读框,编码409个氨基酸,包含3个RNA结合蛋白结构域(RRM domain),命名为MsRBP(GenBank accession No.JN986878.1)。亚细胞定位分析表明此基因编码蛋白定位于细胞核。经同源比对和进化树分析,MsRBP基因编码的氨基酸序列与截形苜蓿(Medicago truncatula)、大豆(Glycine max)、拟南芥(Arabidopsis thaliana)等物种中的某些RNA结合蛋白的氨基酸序列具有很高的相似性。RT-PCR(Real-time PCR)分析结果表明,在NaCl,ABA和PEG胁迫下MsRBP基因的表达水平均上调,推测该基因可能在紫花苜蓿逆境胁迫调控中发挥重要作用。经构建植物超表达载体pBI21-MsRBP,采用农杆菌介导法对烟草(Nicotiana tabacum)进行遗传转化,获得了抗性转化再生植株。通过PCR,RT-PCR及GUS组织化学染色分析表明:MsRBP基因在烟草的基因组中能够进行转录和表达。本研究为该基因的功能鉴定与调控机制研究奠定了基础。
- 王慧敏龙瑞才沈益新康俊梅张铁军张瑜杨青川
- 关键词：紫花苜蓿RNA结合蛋白实时定量RT-PCR烟草转化
- 紫花苜蓿MsZIP基因超表达载体的构建及转基因苜蓿检测被引量：12
- 2012年
- 根据已经克隆得到的MsZIP基因(GenBank序列号:HQ911778),扩增编码区cDNA,构建植物超表达载体PBI-MsZIP。酶切鉴定表明,目的基因已经正确的插入到载体中,超表达载体构建成功。采用CaCl2冻融法将其转入农杆菌菌株中,然后采用农杆菌介导的方法,转化紫花苜蓿,共得到11株抗性苗,对其中的4株进行卡那霉素基因PCR检测,均得到了目的条带。同时对这4株抗性苗进行目的基因的RT-PCR检测,均得到了目的条带。说明MsZIP基因已经成功在苜蓿中超表达。为了进一步验证该基因的功能,分别用200mmol/L NaCl和25μmol/LPEG-6000处理转基因苜蓿,3d后进行生理指标的测定。结果表明,MsZIP基因在苜蓿中超表达可以提高苜蓿的耐盐性和耐旱性。
- 李燕孙彦杨青川康俊梅张铁军房锋
- 关键词：紫花苜蓿
